ARC-520的意义：对乙肝病毒生命周期的误解

account2014

港大研究突破發現乙型肝炎病毒引發肝癌的機理
2012年06月19日



乙型肝炎（乙肝）病毒感染是一個世界性的健康問題。根據世界衞生組織的統計，全球有超過3.5億名乙肝帶菌者。乙肝帶菌者患肝癌的機會率是非帶菌者的一百倍，但是乙肝病毒究竟如何引發肝癌則一直未明。香港大學李嘉誠醫學院外科學系最近進行了全球首個以全基因方法分析乙肝病毒基因融入肝癌細胞基因的研究，揭示了乙肝病毒與人類基因結合、從而引發肝癌的機制。研究發現，在肝癌組織中，乙肝病毒基因與人類基因的結合明顯較在癌旁肝組織中為多（86.4%對30.7%）。研究人員成功識別出乙肝病毒基因組的「裂口」--透過這個「裂口」，病毒基因得以與人類基因結合。同時，研究人員發現最常與乙肝病毒基因結合的三個人類基因。這些突破性的發現，相信有助研製預防肝癌的藥物。有關研究成果最近已於基因學研究範疇的頂尖期刊《自然—基因學》（Nature Genetics）上發表。

這項研究的其中一位主要研究員、香港大學李嘉誠醫學院肝膽胰外科講座教授、孫志新基金教授（外科）潘冬平教授說：「手術切除是治理原發性肝癌的最有效療法，5年存活率達55%，但超過一半患者術後肝臟會出現新腫瘤。現時抑制乙肝病毒複製的藥物可以輕微降低腫瘤復發機會，但暫時還未有方法可以有效防止新腫瘤生長。T我們可以針對是次研究發現的機制，研製阻止乙肝病毒基因與人類基因結合的新型藥物，從而防止肝癌復發。」

研究方法
研究人員收集了88名（81名乙肝病毒測試呈陽性，7名呈陰性）在瑪麗醫院接受肝臟切除或肝臟移植的中國籍原發性肝癌患者的資料進行研究。他們針對病人的癌組織樣本和癌旁組織樣本進行了全基因組測序及分析。

研究成果
研究發現，在肝腫瘤組織中，乙肝病毒基因與人類基因結合的比率為86.4％，而在腫瘤旁的肝組織中，此比率僅為30.7%。此外，研究亦識別出乙肝病毒基因組中一個特殊區域，是基因組的「裂口」，乙肝病毒基因與人類基因的結合，就是在這裂口進行。研究人員亦發現最常與乙肝病毒基因結合的人類基因是TERT、MLL4和CCNE1。這三個人類基因與乙肝病毒基因一旦結合，就會形成融合基因，加強這三個基因的表達，進而導致細胞周期失調，引發正常細胞轉化為癌細胞。這個全面的基因組測序揭示了乙型肝炎病毒基因與人類基因結合在肝癌發生過程中的作用。

研究亦顯示，乙肝病毒基因進入人類基因組，會使人類染色體中的異常基因複製和刪除變得頻繁，這可能是乙肝病毒引起惡性病變的另一機理。另一方面，在研究的病人中，其基因與病毒基因結合的人士會在較年輕時便患上肝癌。而尤為明顯的是，腫瘤中有大量這種基因結合的病人，比起只有少量甚至沒有基因結合的患者，存活時間顯著較短。

研究啟示
潘冬平教授建議未來的研究應著眼於破解以下三方面：乙肝病毒基因組裂口出現的機理、乙肝病毒基因與TERT、MLL4和CCNE1三個人類基因的結合，以及融合基因的形成。他說：「目前有幾種臨床上使用的藥物可以抑制乙肝病毒的複製以及降低感染者的病毒基因水平，但這些藥物不能把病毒徹底消滅，也不能阻止它與人類基因結合，所以不足以預防肝癌。我希望將來可發展專門藥物抑制乙肝病毒基因與人類基因的結合，從而防止乙肝帶菌者患上肝癌。」

另一方面，年輕的肝癌患者有較多的基因與病毒結合，解釋了為甚麼一些乙肝帶菌者未經慢性肝炎或肝硬化的演變過程，便在二、三十歲之齡得了肝癌。與較年長的患者相比，這些年輕病人的預後要差得多，這可能是因為他們的病毒與人類基因結合比較多。潘教授補充指，在2001至2010年期間在瑪麗醫院接受治療的3500名肝癌患者中，有222名 (6.3%) 患者是四十歲以下，他們的平均生存期只有8.3月，與較年長患者的16.1月相差一半。

研究隊伍
這項研究由香港大學李嘉誠醫學院外科學系領導，研究人員包括潘冬平教授、孫建業肝膽胰外科講座教授范上達教授、名譽教授陸滿清教授，而新加坡國立大學則提供實驗和數據分析的協助。本研究的資金由亞洲癌症研究小組提供。

乙型肝炎病毒與原發性肝癌
原發性肝癌為全球五個最常見的癌症之一，每年有接近一百萬宗新例。它亦是最凶猛的癌症之一，死亡率較其他常見的癌症為高。中國人族群中乙肝帶菌者的比率甚高，中國佔了全球超過一半的肝癌病例。而香港約百分之八的人口為乙肝帶菌者，是本地肝癌的主要病因。

zgct

disan 发表于 2015-10-2 22:41
回复 HBVcheck 的帖子

好像有核苷治疗降低HCC的文章。

你太牛了！感谢感谢！

zgct

被认为NUCs核苷药物治疗在减低cccDNA的同时，增加了integrated DNA，HCC不降，可能比例反升？尤其老病号吃药？”。正式各大药企集体失声的敏感点

hchu

        近年来随着强效的NAs(如ETV和TDF)的上市，有多项研究表明长期应用ETV，实现长期病毒抑制，可减少肝癌的发生。
        Hosaka等的一项回顾性分析显示，随访472例服用ETV的慢性乙型肝炎患者与1143例未经抗病毒的慢乙型肝炎患者，结果显示长期应用ETV可减少肝癌的发生，ETV组和对照组5年肝癌累积发生率分别为3.7%和13.7%，且ETV减少肝癌发生的作用优于LAM。这项研究同时采用了肝癌风险评分系统，结果显示抗病毒治疗前风险评分越高，抗病毒治疗对肝癌发生风险降低越明显，即与那些年轻且无肝硬化的患者相比，肝硬化、高龄、活动性炎症的患者接受抗病毒治疗会获益更多。
        TDF的研究也有同样的结论，有报道对641例服用TDF的乙型肝炎患者进行6年随访，根据REACH-B对用药前后肝癌发生风险进行评分，结果显示长期应用TDF可降低肝癌发生的风险.

newchinabok

肝癌发生是个长期的过程，十年以上，肝纤维化，肝硬化是hcc的病理基础，基因整合是诱因

zgct

Reductions in cccDNA under NUC and ARC-520 therapy
in chimpanzees with chronic hepatitis B virus infection
implicate integrated DNA in maintaining circulating
HBsAg
Christine I. Wooddell1, Deborah Chavez2, Jason E. Goetzmann3,
Bernadette Guerra2, Ryan M. Peterson1, Helen Lee2,
Julia O. Hegge1, Robert Gish4, Stephen Locarnini5, Christopher
R. Anzalone1, Robert E. Lanford2, David L. Lewis1; 1Arrowhead
Madison, Arrowhead Research Corporation, Madison, WI; 2Texas
Biomedical Research Institute, San Antonio, TX; 3New Iberia
Research Center, University of Louisiana at Lafayette, New Iberia,
LA; 4Department of Medicine, Stanford University Medical Center,
San Diego, CA; 5Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory,
Melbourne, VIC, Australia
Background: RNAi therapeutic ARC-520 designed to target
all cccDNA-derived transcripts reduces viral antigenemia for
>1 month after single doses in HBV patients. Here we report
the effect of multiple ARC-520 doses on hepatic HBV DNA
and RNA in HBV chimps. Methods: 9 chimps (5 M, 4 F; 9-37
yrs) received 6-11 monthly injections of ARC-520 concurrent
with NUC therapy. 5 were HBeAg-positive (HBeAg+), baseline
DNA 8-9 log10 IU/mL serum, and 4 were HBeAg-negative
(HBeAg-), ≤3 log10 IU/mL. Chimps received NUCs for
8-24 weeks prior to ARC-520 dosing. Liver biopsies from 8
chimps were taken at baseline, completion of NUC lead-in
and on study. HBV DNA, +/- plasmid-safe DNase digestion to
enrich cccDNA, was measured by qPCR. Pre-core/core RNA
(C probe) and total HBV RNA (Total probe) were measured
by RT-qPCR. The Guide for the Care and Use of Laboratory
Animals was strictly adhered to. Results: During NUC lead-in,
total liver HBV DNA decreased 1.1-2.5 log10 in HBeAg+ but
not appreciably in HBeAg- chimps. cccDNA in HBeAg+ chimps
decreased 0.7 ± 0.6 log10. Following addition of ARC-520 in
HBeAg+, total liver DNA decreased from baseline by 1.5–2.9
log10 and cccDNA by 1.4 ± 0.7 log10, the degree of reduction
generally correlating with duration of treatment. Neither
total HBV DNA nor cccDNA levels changed remarkably in
HBeAg- during the study, which at baseline had 2-4 orders of
magnitude less cccDNA than HBeAg+ chimps. HBeAg- chimps
had 50-fold more DNase-sensitive HBV DNA, possibly indicating
the majority is integrated DNA rather than cccDNA.
HBV RNA was not reduced by NUCs, but with addition of
ARC-520 RNA reductions tracked qHBsAg reductions. In
HBeAg+, Total probe detected 1-2x as many transcripts as
the C probe, suggesting similar levels of core/pre-core and
S transcripts. In HBeAg-, the Total probe detected 37x more
transcripts than the C probe, supporting a greater proportion of
HBsAg transcripts being produced from integrated HBV DNA
in HBeAg- chimps. Integration between DR1 and DR2 would
result in HBV RNA lacking ARC-520 target sites, consistent
with greater HBsAg reduction in HBeAg+ (1.7 ± 0.5 log10)
than HBeAg- chimps (0.7 ± 0.1 log10). Administration of siRNA
targeted to integrant-produced transcripts resulted in HBsAg
reductions up to 2.3 log10 beyond those produced by ARC-520
in HBeAg-. Conclusions: 1) ARC-520 reduced total liver DNA
and cccDNA beyond levels achieved in HBeAg+ with NUCs
during lead-in; 2) ARC-520 but not NUCs reduced HBV RNA
and antigens; 3) integrated HBV DNA may be important in
maintaining HBsAg in chronic HBV, especially in HBeAg-. This
finding, if confirmed, has important implications for development
of new HBV therapies.
Disclosures:
Christine I. Wooddell - Employment: Arrowhead Research Corporation
Ryan M. Peterson - Employment: Arrowhead Research Corporation
Julia O. Hegge - Employment: Arrowhead Research Corp
Robert Gish - Advisory Committees or Review Panels: Gilead, AbbVie, Arrowhead;
Consulting: Eiger, Isis, Genentech; Speaking and Teaching: Gilead, Abb-
Vie; Stock Shareholder: Arrowhead
Stephen Locarnini - Consulting: Gilead, Arrowhead; Employment: Melbourne
Health
Robert E. Lanford - Grant/Research Support: Arrowhead Research
David L. Lewis - Employment: Arrowhead Research Corporation
The following authors have nothing to disclose: Deborah Chavez, Jason E. Goetzmann,
Bernadette Guerra, Helen Lee, Christopher R. Anzal

zgct

楼主科普下

disan

zgct 发表于 2015-10-4 13:15
楼主科普下

这是箭头6月份提交到会议的摘要。

看标题看结论看明白了就可以了。

就是说根据当时的黑猩猩数据，推论integrated DNA在产生HBsAG，尤其是对于HBeAG阴性来说，这对今后的治疗方案很重要。

这篇摘要之后箭头就加了第7组的人的临床，再之后9月24日开了个发布会，算是在人上印证了和黑猩猩类似的数据。

我想箭头会有late breaking的数据会发给会议摘要的。。。

zgct

谢谢

disan

顺便说下RNAi的3个主要玩家的HBV项目，ARWR，ABUS，ALNY

ARWR就是ARC-520/ARC-521。
ABUS的TKM-HBV，和ALNY的ALN-HBV。

这三个都是RNAi的原理。具体的只是运送技术不同，目标靶点不同。
普通人就知道现在为止箭头算领先就好了。

ARC-520/ARC-521的作用和NUCs作用在首页update了。
箭头的520两个trigger全在cccDNA，521两个trigger一个在cccDNA一个在integrated DNA。

这里ALN-HBV只有一个trigger，既然完全抑制sAg需要cccDNA和integrated DNA，不看好它家的。
TKM-HBV有3个trigger，如果它把cccDNA和integrated DNA全cover，可能会后来居上。不过需要证实，个人持疑问态度。