聊聊慢性乙肝治疗，先从思路转换说起

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IFN-α治疗慢性乙肝抗病毒疗效与细胞因子变化关系分析

何生松　李淑莉　熊莉娟　刘薇　曾令兰

摘要：观察慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者(25例)经α-干扰素(IFN-α)抗病毒治疗前后血清中细胞因子和受体水平的变化与乙肝病毒消长之间的关系。收集治疗前后血清标本ELISA法同步检测，根据治疗后乙肝病毒复制指标(HBV-DNA)阴转分应答组(10例)与无应答组(15例)进行统计学分析。治疗后两组血清中IL-6水平下降，尤其应答组下降明显；治疗后应答组IL-2水平明显升高(P＜0.01)，sIL-2R水平则明显下降；但治疗后两组TNF-α均较治疗前下降，相反IL-8水平升高接近正常人水平；CHB患者体内存在免疫功能的失调，通过IFN-α免疫调节(IL-6、IL-2、sIL-2R)对病毒复制影响具有重要作用。但TNF-α和IL-8表达与病毒复制消长无相关关系。

关键词：慢性乙型病毒性肝炎； 白细胞介素；
肿瘤坏死因子-α； α- 干扰素

　　IFN-α除了本身具有抗乙肝病毒作用外，作为一种细胞因子还具有重要的免疫调节作用，就其对治疗CHB患者体内细胞因子变化与病毒消长关系目前仍不清楚，为此进行了这方面的探讨，现将研究结果报告如下。
1　材料和方法
1.1　研究对象
　　25例均为1997年6月-1999年4月我科经IFN-α治疗的CHB患者，其中经住院治疗20例，门诊治疗5例。男21例，女4例；年龄19～46岁，平均年龄33.6岁。均有乙肝病史，病程2～12年， 均有反复肝功能不良病史(ALT升高，部分曾有轻度黄疸)，乙肝病毒复制指标阳性(HBsAg+，HBeAg+，抗-HBc+，HBV-DNA+)。以上病例均按1995年北京全国病毒性肝炎会议修订标准进行， 其中诊断为慢性轻度(慢迁肝)20例，慢性中度(慢活肝)5例。所有选择治疗病例血清胆红素水平正常或者接近正常，血清ALT水平200u/L以下，并排除其他肝炎病毒重叠感染，近期3月内未进行其他抗病毒药物治疗。以上病例选用IFN-α 3～5×106IU(IFN-α1b，批 号970308，980514，深圳科兴公司提供)，每日肌肉注射，连接4周，后改为隔日1次，持续12～24周。所有病例治疗前和治疗后收集血清标本-20℃保存备用，同时部分血清留做乙肝病原学检查。根据乙肝病毒复制指标阴转(HBeAg�，HBV�,DNA�)情况分为有效组与无效 组。25例中HBV-DNA和HBeAg同时阴转9例，单纯HBV-DNA阴转1例，有效组以HBV-DNA阴转计算。

1.2　检测方法
　　所有病例治疗前后均通过血清免疫学和PCR法检测血清乙肝病毒指标，抗乙肝免疫ELISA试剂由深圳月亮湾生物有限公司提供，PCR试剂由上海复兴生物有限公司提供。治疗前后血清标本同步检测IL-2、sIL-2R，IL-6、IL-8、TNF-α，试剂由上海华都医学科技发展有限公司提供。实验方法严格按照试剂盒说明书实施。所有上述血清标本浓度通过酶标测定仪(Bio-RADModel 550日本生产)测定标准品，OD值为纵坐标，浓度为横坐标，绘出标准曲线，通过标本OD值测定计算出相应浓度。

2　结果
2.1　乙肝患者不论IFN-α应答组还是非应答组血清IL-6水平均较正常组高，但应答组明显高于非应答组，两组比较有较显著性差异。IL-2血清水平应答组明显低于非应答组和正常组。但sIL-2R则相反，明显高于非应答组和正常组。血清TNF-α应答组则明显低于非应答组和正常组。IL-8水平无论应答组还是非应答组均较正常组低。
结果见表1。

表1　IFN-α治疗前慢性乙肝应答组、非应答组与
正常组血清细胞因子变化关系(pg/mL x±s)
Table 1 Changes of interleukin and receptor in serum of response、 unresponse
group with CBH and normal group before IFN-α treatment (pg/mL x±s)
　
应答组　
Response group
非应答组　
Unresponse group
正常组
Normal group
IL-6
250.72±59.57△/*
180.06±25.00△
152.47±21.89
IL-2
160.31±50.56
297.07±43.21△/*
194.28±43.98
sIL-2R
250.72±59.97△/*
180.06±25.00△/*
152.47±21.89
TNF-α
52.64±19.33△
117.18±17.55*
105.89±16.15
IL-8
375.46±61.89△
412.03±83.90△
664.81±77.37
　　△与正常组比较P＜0.01　　*应答与非应答组比较P＜0.012.2


经IFN-α治疗后应答组血清IL-6水平明显下降，前后比较有较显著性差异。非应答组则略有上升，但两组比较无显著性差异。IL-2水平应答组经治疗后则明显升高，非应答组则下降。sIL-2R水平应答组治疗后较治疗前下降明显，前后比较有显著性差异，非应答组则略有升高，但无差异性。经α-IFN治疗后血清TNF-α水平无论是应答组还是非应答组均下降，尤其是无效应答组下降明显，IL-8水平经治疗后两组均明显上升接近正常水平。结果见表2。

表2　IFN-α治疗前后应答组与非应答组血清细胞因子及受体变1化关系(pg/mL x±s)
Table 1 Changes of interleukin and receptor in serum of response、 unresponse
group with CBH before and after IFN-α treatment (pg/mL, x±s)
　
有效组
Response group
无效组
Unresponse group
治疗前
BT
治疗后
AT
治疗前
BT
治疗后
AT
IL-6
250.72±59.57△
194.02±46.00
180.06±25.00
198.18±28.55
IL-2
160.31±50.56△
388.71±69.32
297.07±43.21△
158.17±35.2 6*
sIL-2R
250.72±59.97△
194.02±46.01
180.06±25.00
198.18±28.55
TNF-α
52.64±19.33
33.31±8.171
17.18±17.55△
39.97±5.97
IL-8
375.46±61.89△
579.22±106
412.03±83.90△
685.18±100.23
　　△治疗前后比较P＜0.01　　*治疗后有效与无效比较P＜0.01
　　BT(before IFN-α treatment) AT(after IFN-α treatment)

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3　讨论
　　IL-6、IL-2、IL-8、TNF-α主要由活化的T细胞、单核巨噬细胞、NK细胞、成纤维细胞及内皮细胞等产生，具有多种生物学功能的细胞因子。有关他们在病毒性肝炎发病机理中的作用尚未完全清楚，有资料表明CHB患者IL-6、IL-8、TNF-α的表达增强，而且与肝损的炎症程度密切相关［1］。并发现某些细胞因子与病毒复制有相关性，如发现IL-6、TNF-α表达在CHB患者不论是血清中还是在周围血单核细胞培养上清液中HBV-DNA(+)组明显高于HBV-DNA(-)组［2，3，4］。
　　我们结果表明CHB患者经IFN-α治疗后其有效应答组在治疗前血清IL-6水平明显高于无效应答组，两组之间比较有显著差异。还发现经IFN-α治疗后HBV复制阴转组IL-6水平明显下降，提示与病毒复制有相关性。这可能与IL-6含有HBV-Pre-S1AA41-47肽的认别部位，I FN-α影响调节病毒与靶细胞间相互作用有关［5］。CHB患者血清中TNF-α水平与正常人组比较无显著差异，这与王新等人报告相似［1］，这可能与我们选择的治疗病例多为慢性迁延型有关。但有意义的是经IFN-α治疗后的CHB病人不论是有效应答组还是无效应答组血清TNF-α水平均较治疗前明显下降。提示外源性IFN-α对CHB体内TNF-α表达有抑制作用，呈负调节，但与可溶性TNF受体(sTNFRc)表达无关［6］，与病毒消长亦无相关性。这与他人报告7例经IFN-α治疗慢性乙肝病例，4例病毒复制阴转后血清TNF-α水平增高不一致［7］，有待进一步澄清。
　　IL-8是一种低分子蛋白质，是主要的白细胞趋化因子，具有激活中性粒细胞作用，属典型炎症介质。他人发现CHB患者血清中IL-8水平增高［1］，但我们的调查结果则相反，较正常组为低，有意义的是经IFN-α治疗后无论是应答组还是非应答组血清IL-8水平明显升高，但两组之间比较无差异性。其机理尚不清楚，可能是IFN-α激活免疫细胞，促进炎症反应，有利病毒清除，但与病毒复制及消长无相关性。
　　已报导CHB病人血清IL-2表达下降，体内外实验证实IL-2有明显抑制HBV复制作用［8，9］。我们的结果观察到IFN-α有效应答组治疗前血清IL-2水平较正常组低，经IFN-α治疗后的有效应答组IL-2水平升高。IL-2生物学活性是通过特异性受体介导的，sIL-2R有竞争性抑制作用。有意义的是发现sIL-2R在应答组治疗前明显高于非应答组和正常组，与他人结果相似［10，11］。但经IFN-α治疗后应答组sIL-2R水平则明显降低，无效应答组则相反。关于作用机理尚不清楚，推测可能与IFN-α有效抑制病毒复制后，病毒抗原在靶细胞膜上表达减少或者消失，从而导致血清中sIL-2R表达减少，从而提高IL-2水平，增强抑制病毒复制作用。
　　上述研究表明慢性乙肝患者存在免疫调节功能紊乱，IFN-α除本身具有抗病毒作用外，通过免疫调节抑制病毒复制也具有非常重要意义，IL-6、IL-2和sIL-2R表达作用与病毒复制有较好的相关性。


基金项目：本课题得到教育部回国人员科研启动基金［教外司，留学生1997(436)］和深圳科兴公司资助
作者简介：何生松(1955年-)，男，湖北沙市，副教授，医学博士，主要从事病毒性
肝炎、肝硬化发病机理及防治研究。
何生松(同济医科大学附属协和医院传染科，武汉　430022)
李淑莉(同济医科大学附属协和医院传染科，武汉　430022)
熊莉娟(同济医科大学附属协和医院传染科，武汉　430022)
刘薇(同济医科大学附属协和医院传染科，武汉　430022)
曾令兰(同济医科大学附属协和医院传染科，武汉　430022)


参考文献
［1］　王新，许才绂，赵国宇，等.TNF-α、IL-6和IL-8与慢性肝病的关系［J］
.中华传染病杂志，1997，15(2)：85-88
［2］　张燕，印建.白细胞介素-6与病毒性肝炎的关系［J］.中西医结合肝病杂志，1999
，9(3)：3-5
［3］　任红，张定凤，贾小平等.病毒性肝炎肿瘤坏死因子和白细胞介素-6的改变［J］.
中华内科杂志，1992，31(6)：344-346
［4］　Yoshioka K, Kakumu S, Araom M, et al. Tumor necrosis factor productio n by
peripheral blood mononucler cells of patients with chronic liver disease ［ J］.
Hepatology, 1989,10:769
［5］ Neurath AR. Search for hepatitis B virus cell receptors reveals binding s ites for
interleukin 6 on the virus envelope protein ［J］. J Exp Med, 1992,175: 461
［6］ 何生松，黄华芳.慢性乙型肝炎患者血清肿瘤坏死因子受体检测及与干扰素治疗的关
系［J］.中西医结合肝病杂志，1997，7(1)：5-7
［7］ Danieels HM, Meager A, Eddleston AL, et al. Spoataneous production of necrosis
factor alphal treatment of chronic HBV infection ［J］. Lance, 1990,Ap r
14.335(8694):875
［8］ 成军，杨守纯主编.现代肝炎病毒分子生物学［M］.北京：人民军医出版社.1995.
［9］　王长嘉，路洪艳，房长茂，等. 白细胞介素-2穴位注射治疗乙肝的观察［J］.临床
肝胆病杂志，1998，14(2)：121
［10］　叶红军，富宁，陈致诚，等.慢性乙型肝炎、肝硬化病人可溶性白细胞介
素-2受体及其活性观察［J］.中华实验和临床病毒学杂志，1993，7(3)：277
［11］　朱瑞龙，沈健伟，陈士葆，等.血清可溶液性白细胞介素2受体测定在病毒性肝炎中
的意义［J］.中华传染病杂志，1995.13(3)：156-158

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IL2是一个很好的因子，有希望。。。。

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