治疗用（合成肽）乙型肝炎疫苗（εPA44）项目工作总结

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        心电图（十二导联）（第7天，第28天）；
        血常规、尿常规（第7天，第28天）；
        凝血功能检查：出血时间（BT）、凝血时间（CT）、部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原（PTA）（第7天，第28天）；
        血生化（包括谷丙转氨酶ALT、谷草转氨酶AST、总胆红素、直接胆红素、总蛋白、白蛋白、尿素氮BUN、血肌酐Cr、血糖、Na+、K+、Cl－）（第7天，第28天）；
        注射局部反应观察（每日）；
        记录不良事件和严重不良事件（每日）；
        记录伴随用药（每日）。

5）        停药后第7天
        免疫学指标检测的血样留取；
        测量血压、心率、体温；
        体格检查；
        心电图（十二导联）；
        血常规、尿常规；
        凝血功能检查：出血时间（BT）、凝血时间（CT）、部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原（PTA）；
        血生化（包括谷丙转氨酶ALT、谷草转氨酶AST、总胆红素、直接胆红素、总蛋白、白蛋白、尿素氮BUN、血肌酐Cr、血糖、Na+、K+、Cl－）；
        HCG检测（女性受试者，如必要）；
        注射局部反应观察；
        记录不良事件和严重不良事件；
        记录伴随用药。

6).        停药后第3周末，第7周末，第11周末
        免疫学指标检测的血样留取；
        测量血压、心率、体温（停药后第11周末）；
        体格检查（停药后第11周末）；
        心电图（十二导联）（停药后第11周末）；
        血常规、尿常规（停药后第11周末）；
        凝血功能检查：出血时间（BT）、凝血时间（CT）、部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原（PTA）（停药后第11周末）；
        血生化（包括谷丙转氨酶ALT、谷草转氨酶AST、总胆红素、直接胆红素、总蛋白、白蛋白、尿素氮BUN、血肌酐Cr、血糖、Na+、K+、Cl－）（停药后第11

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周末）；
        HCG检测（女性受试者，如必要）（停药后第11周末）；
        记录不良事件和严重不良事件；
        记录伴随用药。

免疫学指标检测
本研究主要为观察试验药物在健康受试者中的安全性和耐受性，同时观察了试验药物诱导健康受试者特异性细胞和体液免疫应答。
针对疫苗的特异性细胞免疫应答检测选择免疫酶斑点技术（ELISPOT）、四聚体技术（Tetramer）、以及细胞因子检测。目前ELISPOT和Tetramer是最先进的检测抗原特异性细胞免疫应答的方法。采用ELISA技术检测抗HBV Pre-S2抗体。

安全性指标
不良事件及处理
所有观察到的或受试者主动提供的不良事件，不论是哪个剂量组或是否由研究药物引起，都应记录在病例报告表的不良事件页上。
需记录的不良事件包括药物不良反应、研究过程中发生的疾病。研究者判断显著的体格检查异常和有临床意义的实验室检查异常。
对于所有的不良事件，研究者须追踪并获得足够的信息以判断不良事件的原因，是否与研究药物有关以及是否达到严重不良事件的判定标准，不良事件严重程度判定如下：
轻度不良事件：受试者有自觉症状，反应轻微，能耐受，不影响正常的活动，症状为一过性，在两次用药之间或治疗期间自行缓解；
中度不良事件：影响受试者正常的日常生活，症状持续的时间较长，可能干扰治疗，如需改变药物剂量或减少用药的次数等；
重度不良事件：使受试者机体功能受损，失去正常工作，生活能力，症状持续更长时间，需停药并且经适当的处理后方能缓解。

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对于所有的不良事件，研究者须对不良事件进行随访以确定其结果，随访应持续到此事件或其后遗症消除或稳定在一个研究者和凯维斯公司临床监查员均能接受的水平。

严重不良事件
严重不良事件定义为导致以下结果的不良事件：
1．导致死亡；
2．危及生命；
3．需住院或延长住院时间；
4．导致持续的或严重的残疾或机能不全；
5．导致先天异常或出生缺损。
如受试者在试验过程中发生严重不良事件，无论是否与研究药物有关，研究者应立即对受试者采取适当的治疗措施，保障受试者的安全，在事件发生24小时内报告凯维斯医药咨询公司。同时按GCP规定报告伦理委员会，药品监督管理局。

异常的体格检查发现
研究方案要求的所有体格检查结果均应记录在受试者的病例报告表中。根据研究者的判断，在体格检查中发现的临床显著异常变化，将作为不良事件记录在病例报告表中，研究者应判断其发生是否与本研究有关。

异常的实验室检查结果
研究方案要求的所有实验室检查结果均应记录在受试者的病例报告表中。如果实验室检查的结果异常并导致了研究药物的停药，或需干预性治疗，或以诊断性检查来评估受试者的危险程度，应将这一实验室检查结果的异常作为不良事件记录在病例报告表中。

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数据处理
所有完成的病例报告表（CRF）均采用双份录入方式，两份数据完全一致后保存为SAS数据库格式，以保证数据库的数据与CRF上的一致。
根据CRF上各数据的逻辑关系、是否违背方案、是否超出正常参考范围等对数据进行逻辑检查，对脱落、缺失以及逻辑矛盾的数据发出数据质疑表予以澄清。
当所有数据质疑解决后，对数据库进行锁定。

统计分析
统计分析方法
本研究涉及的所有统计分析及报告均采用SAS Version 8.2完成，对评估指标主要采用描述性统计分析进行总结。考虑样本量比较小，不进行剂量组间推断性检验。

受试者分布、人口统计学资料、基线特征
对人口学统计学资料与基线特征进行描述性统计分析，包括性别、年龄、身高、体重、体重指数、饮酒史、吸烟史、过敏史和乙肝疫苗接种史等。对连续变量计算受试者例数、平均值、标准差、最小和最大值；对分类变量采用频数表进行总结，计算各类别的受试者例数和百分比。

安全性分析
安全性资料包括给药前、给药后、停药后的生命体征、体格检查和实验室检查，以及研究过程中发生的注射部位局部反应和不良事件。

不良事件
对不良事件采用频数表进行总结，分别计算不良事件例次和不良事件发生率。另外，按不良事件的严重程度、与研究用药的相关性分别计算各类别受试者例数和百分比。如果同一例受试者在某一类别发生多起不良事件，将只计数一次。将与研究用药相关的不良事件（肯定有关、很可能有关、可能有关）作为不良事件的子集进行分析

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注射部位局部反应
对研究过程中发生的注射部位局部反应采用频数表进行总结，分别计算各类反应的发生率。

体格检查
采用描述性统计分析，并计算给药后相对给药前各指标的变化值。

实验室检查
采用描述性统计分析，计算给药后相对给药前各指标的变化值的平均数、标准差，并计算变化值具有潜在临床意义的受试者例数和百分比。另外，对给药后各指标测定值中最小和最大值分别进行描述统计分析。

特异性细胞和体液免疫应答
对特异性细胞和体液免疫应答指标采用描述性统计分析，计算各指标的平均值、标准差等。同时计算各指标相对基线期的变化值，并采用配对T检验进行给药前后比较。剂量组间的差异采用方差分析进行比较。

结果和结论：
在健康人体对治疗用(合成肽)乙肝疫苗的免疫应答:在一定程度上诱发健康人体的特异性细胞免疫应答,证明:300µg组即见体液和细胞免疫应答,各剂量组的免疫应答强度无明显差异,姑未见剂量相关性.

Ⅱ期临床试验：
Ⅱ期临床研究，评价治疗用（合成肽）乙肝疫苗对慢性乙型肝炎患者的治疗作用和安全性，为Ⅲ期临床研究设计和给药剂量方案的确定提供依据。北京大学第一医院作为该项目Ⅱ期临床研究的负责单位，提供完整、科学的临床研究总结报告。

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试验目的：
评价慢性乙型肝炎患者单用治疗用（合成肽）乙肝疫苗（εPA-44）和联用εPA-44、γ-干扰素（IFN-γ）、粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）两种免疫程序的安全性和耐受性，同时观察其针对乙肝病毒的特异性免疫应答。探索安全剂量，并为后续临床试验确定合理的免疫剂量、程序和疗程提供参考。
研究方法：
本研究为前瞻性试验，受试者接受单用εPA-44和联用εPA-44、IFN-γ、GM-CSF两种免疫程序。
受试者数（计划的和分析的）：
在西南医院进行（各组受试者均需观察免疫指标）：

入选及排除标准：
入选标准
        年龄18-50岁，性别不限；
        诊断为慢性乙型肝炎*，且
        HBV-DNA大于105拷贝/ml，
        HBeAg阳性，
        谷丙转氨酶（ALT）在正常值上限的1.3-8倍之间；
        HLA-A2阳性；
        体格检查正常，无心、肺等脏器的损害，肾功能、凝血功能检查及血、尿等化验无异常临床意义；
        白细胞大于3.5×109/L和中性粒细胞大于1.5×109/L，血小板大于80×109/L；
        血清总胆红素≤25μmol/L；
        理解并签署知情同意书。
*按2005年12月10日中华医学会肝病学分会和中华医学会感染病学分会联合制订的《慢性乙型肝炎防治指南》（临床诊断和检查）第五条临床诊断项下的慢性乙型肝炎诊断。
1．HBeAg阳性慢性乙型肝炎   血清HBsAg、HBV DNA和HBeAg阳性，抗-HBe阴性，血

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清ALT持续或反复升高，或肝组织学检查有肝炎病变。
2．根据生化学试验及其他临床和辅助检查结果，上述慢性乙型肝炎也可进一步分为轻度、中度和重度
根据《慢性乙型肝炎防治指南》第六条的生化学检查及HBV血清学检测等结果做出相应诊断。

排除标准（有下述之一即排除）
        抗-HAVIgM、抗-HCV、抗-HDV和抗-HEV阳性；
        抗-CMVIgM、抗-EBVIgM和抗-HIV阳性；
        临床上有明显的心血管、呼吸、内分泌、新陈代谢、肾、胃肠道、皮肤、感染、恶性肿瘤、血液、神经或精神疾病/机能紊乱、原发肝脏疾病*。既往史有研究者认为不宜参加本试验的疾病；
        肝癌或疑似肝癌者；
        3个月内参加过其他药物试验或献血；
        半年内曾用过抗病毒药物及强效免疫调节剂；
        过敏体质或有药物过敏史；
        怀孕，哺乳期或计划怀孕的女性受试者；
根据研究者判断，受试者不能完成本研究或不能遵守（由于管理方面的原因或其它原因）本研究的要求。
*原发肝脏疾病特指遗传性肝脏疾病。

评价标准：
疗效指标（主要的和次要的）：
主要疗效指标：
主要疗效评估为第48周时的病毒学应答（采用SFDA批准的检测方法和试剂）
1）血清HBV DNA定量＜103拷贝/毫升的受试者人数；
2）血清HBV DNA较基线值下降的拷贝数；

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3）血清HBV DNA载量下降大于或等于2个对数级或血清HBV DNA定量＜105拷贝/毫升的受试者人数；
次要疗效指标：
1）用药后不同时间点的生化学应答
        ALT恢复正常的受试者人数；
        ALT未恢复正常的受试者人数；
        ALT在用药后不同时间点的变化。

2）用药后不同时间点的血清免疫学应答
        发生HBeAg/抗HBe血清转换的受试者人数；
        HBeAg阴转，但未出现抗HBe的受试者人数
        发生HBsAg/抗HBs血清转换的受试者人数（至第一次用药后24周）
        HBsAg阴转，但未出现抗HBs受试者人数（至第一次用药后24周）

免疫学应答：
1）用药前后不同时间点HBcAg18-27特异性CTL细胞数(Pentamer+)/CD8+细胞数比值的变化
2）用药前后不同时间点PBMCIL-5，IL-12分泌量的变化（至第一次用药后24周）
3）用药前后不同时间点血清中抗HBV Pre-S2抗体的变化
安全性指标：
        不良事件
        实验室检查
        生命体征、体格检查
        心电图

筛选与基线（开始用药前4周内）
- 取得书面的知情同意书；

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- 确认符合入选/排除标准；
- 取得人口学资料；
- 病史；
- 生命体征；
- 体格检查；
- HLA分型（开始用药前4周内）；
- 甲胎蛋白；
- TSH、T3、T4检测；
- 抗-HAV、抗-HCV、抗-HDV、抗-HEV抗体；
- 抗-CMVIgM、抗-EBVIgM、抗-HIV抗体；
- 血常规、尿常规、血生化、凝血功能检测；
- 心电图（十二导联）；
- 腹部B超（肝、胆、脾）；
- 乙肝两对半（血清HBsAg、HBeAg、抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc）；
- 肝功能检测；
- HBV DNA定量测定；
- 尿妊娠试验（女性受试者，如必要）；
- 记录伴随用药；
- 记录不良事件和严重不良事件。

对筛选合格的受试者进行随机分组。

研究用药阶段
第0周
- 免疫学指标留样检测（仅在西南医院进行）；
- 乙肝两对半（血清HBsAg、HBeAg、抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc）；
- 肝功能检测；
- HBV DNA定量测定；
- 注射研究药物；
- 清点/回收研究药物；

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- 记录伴随用药；
- 记录不良事件和严重不良事件。

第2周末±3天
- 免疫学指标留样检测；
- 心电图（十二导联）；
- 肝功能检测；
- 记录伴随用药；
- 记录不良事件和严重不良事件。

第6周末±3天
- 生命体征；
- 体格检查；
- 血常规、尿常规、血生化；
- 凝血功能检查；
- 心电图（十二导联）；
- 乙肝两对半；
- 肝功能检测；
- HBV DNA定量测定；
- 免疫学指标留样检测（仅在西南医院进行）；
- 注射研究药物；
- 清点/回收研究药物；
- 记录伴随用药；
- 记录不良事件和严重不良事件。

第12周末±3天
- 生命体征；