治疗性乙型肝炎疫苗的总结

天狼星

本帖我将陆续贴出一些有关治疗性疫苗在研究和临床上的进展的信息和资料，并保持跟踪。
治疗性乙型肝炎疫苗的基础与应用研究  
  
加入时间：2003年9月29日   

  

乙型肝炎的治疗可分为两大类：一类为抗病毒治疗，另一类为免疫治疗。由于在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)持续性感染中，宿主免疫应答异常是主要的发病机制，正确地调动宿主的免疫应答，适当地调动宿主自身的免疫应答，使HBV感染者恢复健康是免疫治疗目的。由于持续性HBV感染者的免疫异常情况各有不同，因此在制订免疫治疗方案时应“个样化”，既要考虑感染者体内病毒复制的程度、病毒株是否已有“复合性变异”，又要了解感染者的细胞免疫状态、体液免疫状态、是否存在自身免疫性损伤或肝外感染及病变等。在此基础上实事求是地制订免疫治疗方案以达到不同层次的治疗要求，即“阶梯化”。
一、慢性乙型肝炎发病与免疫机制的基础研究进展
1．树突状细胞(dendritic cells，DC)呈递抗原的重要性：Akbar等对43只HBV转基因鼠进行了长期注射乙型肝为表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)治疗性疫苗，发现有23只鼠发生免疫应答，表面为DC细胞表面主要组织相容性复合物Ⅱ类抗原及其CD86抗原表达上调，产生较高水平的白细胞介素-12(interleukin-12、IL-12)及在DC-T细胞混合培养中产生较多的IL-2与肿瘤坏死因子α。这些鼠血清HBsAg被清除，血清乙型肝炎e抗原及HBVDNA水平下降。其它鼠的DC无类似改变则疫苗无治疗效果。认为在特异性免疫治疗前先上调DC功能将会有更良好的治疗效果。为改变抗原递呈细胞不能正常地呈递抗原并激活CD4、CD8和细胞免疫，You等用逆转录病毒载体作基因修饰使鼠DC分泌HBc与IgGFc段的融合蛋白，通过Fc受体介导，使抗原可通过DC主要组织相容性复合物I途径呈递抗原直接激活细胞毒性T淋巴细胞，诱生针对乙型肝炎核心抗原的免疫应答，其效果可增强约1000倍。
2．CD8T细胞的功能性研究：为了解CD8细胞在HBV感染中的致病机制，Maini等用体外扩增T细胞结合人类白细胞抗原-肽-四重体直接计数人外周血及肝内侵润的HBV特异性CD8细胞的数目，发现在肝脏无病理性损伤和HBV复制的患者中，肝内有更高比例的HBV CD8细胞；而在肝内有T细胞侵润及出现病变的患者中，肝HBV特异性T细胞的比例相对较低。在后一类患者中因浸润T细胞较多，故其HBV CD8细胞的绝对数与前一类患者相似。在病毒血症滴度高且有肝脏炎症病变的患者中，CD8细胞经特异性HBV识别并激活后，表现为与抑制HBV复制相关。结果显示有效的HBV特异CD8细胞应答及抑制病毒复制与肝脏损伤间无直接联系。似乎当HBV特异的CD8细胞应答不能控制病毒复制的情况下，则通过体内非HBV特异的T细胞而造成肝脏损伤。这一结果与在转基因鼠重症肝炎模型中所发现的现象相符，即肝组织损伤是在出现特异性CD8细胞浸润之后，当非抗原-特异的CD8细胞浸润时才发生。在黑猩猩感染HBV的研究中也发现当大部分HBV已被清除，肝内及浸润大量CD8细胞后才出现肝组织损伤。因此推测造成肝组织损伤的不是HBV特异的D8细胞。研究结果说明不仅需要研究CD8T细的数目，还需研究其功能，特别是要确定CD8细胞是否为HBV特异的CD8细胞。
进一步研究发现在慢性乙型肝炎感染中HBV特异的CD8细胞有不同的变化，包括缺失、无反应性或不同程度的功能性改变。在病毒抗原滴度高的慢性乙型肝炎患者中，有一定数量的“非典型耐受” D8细胞。在体外培养后这些CD8细胞可经激活增殖，裂解靶细胞并产生抗病毒的细胞因子。这些细胞的特点为对人类白细胞抗原-肽-四重体结合力明显低下。有意义的是这种特异性的改变仅限于针对HBsAg。结果显示CD8细胞功能性改变对不同病毒抗原的应答不同，在慢性乙型肝炎感染者中CD8功能性缺陷主要限于HBsAg。最近在HBV转基因鼠中也比较了动物对病毒包膜抗原及多聚酶抗原特异的CD8细胞的免疫应答，发现用DNA免疫虽可出现对多聚酶抗原的细胞毒性T淋巴细胞应答，但不影响HBV动物体内的复制，也不与肝功能改善相关。因此对HBV的耐受性只针对病毒包膜抗原而不针对多聚酶抗原而不针对多聚酶抗原，明确了调节HBV患者的免疫应答性主要针对HBsAg。
3．非特异性免疫细胞的作用：除对病毒特异性细胞免疫研究外，学者们也研究了非特异免疫应答是否也具有抑制HBV复制的功能。在HBV转基因鼠中注射一剂(α-半乳糖脂酰硝氨)，通过将糖脂经CDld呈递给Vα14+NK11+T细胞，HBV转基因鼠肝内可测及干扰素α、β和γ，同时发现肝内HBV停止复制。但是在肝内出现的NKT细胞是短暂的，很快消失，其机理可能为活化后导致NKT细胞死亡。在敲除干扰素α/β或γ基因的小鼠中再注入α-Gal Cer则无此作用。因此推测抑制HBV复制的机制为先有NKT细胞活化并继而活化自然杀细胞(natural killer，NK)细胞，分泌抗病毒的细胞因子。在用缺陷型腺病毒感染的小鼠中，学者们也发现NK细胞可在无T细胞的条件下引起肝细胞凋亡，并诱生γ干扰素。NK细胞还可通过启动病毒特异的T细胞，促进其分泌γ干扰素。
二、治疗性疫苗的研究进展
早在1994年由法国巴斯德研究所首次进入临床研究的含有PreS2及S抗原的治疗疫苗，至今已完成Ⅱ期临床研究。结果发现无论用CHO细胞表达的PreS2/S抗原或酵母菌表达的重组HBsAg均未能显著降低血清HBV DNA。美国学者用CY-1899T细胞疫苗(含有HBV核心抗原第18-27位氨基酸免疫90名慢性乙型肝炎患者，虽然可诱生低度的细胞毒性T淋巴细胞应答，最高仅为10个裂解单位Lytic units，但并不与清除病毒相关。临床研究显示这一候选疫苗虽无严重不良反应，但对改善肝功能或降低病毒抗原均无显著作用。14名慢性乙型肝炎患者应用血源HBsAg-乙型肝炎免疫球蛋白复合物治疗慢性疫苗的结果显示，9名患者血清HBV DNA阴转，6名HBsAg阴转，2名出现抗-HBe，但患者的血清HBsAg无变化。改用酵母菌表达的重组HBsAg-乙型肝炎免疫球蛋白治疗性疫苗，现已进入I期临床研究。此外，应用重组表达PreS1/PreS2/HBAg作为治疗性疫苗的临床研究尚在观察中。最近，以色列与美国学者采用260U至40000U的人抗-HBs单克隆抗体给27名慢性乙型肝炎患者作静脉滴注。以抗体-抗原克分子比为1：2-1：20进行免疫，每月1次共12次，可致血清HBsAg降至不能测及的水平，且HBV DNA滴度也降低，患者无不良反应，但这一治疗作用是短暂的。德国学者用皮内注射HBsAg加口服拉米夫定加皮下注射IL-2，3个月后，7/9疫苗加拉米夫定及与2/5疫苗加IL-2加拉米夫定治疗者HBV DNA转阴，初步显示有一定治疗效果。
目前尚处于研究阶段的免疫治疗制剂主要为用病毒抗原加不同佐剂或用不同重组DNA免疫。用HBsAg-抗-HBs重组质粒DNA三重复合物型疫苗，用多肽-DNA组建针对人类白细胞抗原-A2.1和人类白细胞抗原11限制性肽加Th细胞表位及内浆网转位信号序列的DNA疫苗，以诱导T细胞或抗体HBsAg表位组成嵌合抗原的DNA免疫原。此外，还在携带HBV的黑猩猩中先用DNA免疫，再用重组含HBV DNA的金丝雀痘苗加强免疫。一周后，动物血清HBV DNA下降400倍并持续为HBV DNA阴性达186周，血清HBsAg滴度仅有短暂下降。应用CPG寡核苷酸加HBsAg阳性转基因鼠中可清除血清中的HBsAg并诱生特异的抗-HBs，且可调节肝内HBV mRNA的表达。
近来研究的进展主要有6点：(1)明确了乙型肝炎治疗性疫苗免疫耐受抗原为包膜还原，以针对HBsAg为耐受原的为首选候选疫苗。(2)候选疫苗应既可增强呈抗原呈递细胞的递抗原功能，又需促进DC-T细胞间的相互作用。(3)候选疫苗应能促进HBV特异的CD8杀伤细胞作用，但应尽量减少激活非特异CD8的作用。(4)治疗过程中，除及时了解HBV特异的CD8及所分泌细胞因子的情况，还应了解NKT及NK细胞的应答。(5)至今并未发现治疗性疫苗诱发肝细胞坏死等严重不良反应。(6)建立检测CD8细胞及其功能及NK、T细胞功能的方法，在进行临床试验中予以随访，既可防止出现不良反应，又可促进基础结合临床研究，从而获得治疗性乙型肝炎疫苗有价值的科学资料。

参考文献（略）
——作者：闻玉梅院士  中华肝脏病杂志.2003，11（9）：519-520

[此贴子已经被作者于2003-10-30 1:01:59编辑过]

天狼星

病毒入侵机体后，正常情形下机体将产生免疫应答来清除病毒。近年，科学家推测慢性乙肝患者可能对乙肝病毒产生了特异性免疫耐受（无免疫应答反应）。复旦大学医学院熊思东教授等在闻玉梅院士的指导下，在国际上首次建立了乙肝病毒免疫耐受模型，并证实了上述假说。在此基础上，他们研制了以消除乙肝病毒免疫耐受性为目的的新型生物制剂———固相基质抗体抗原复合物。

　　以上海基因免疫与疫苗研究中心主任熊思东教授为首的科研小组在固相基质抗体抗原复合物实验性治疗慢性乙肝取得较好疗效的基础上，以抗体工程技术建立了以抗原表位为基础，以抗体分子为载体的新型乙肝治疗性疫苗———乙肝病毒特异性抗体化抗原。实验结果显示，该抗体化抗原可诱导100％的乙肝病毒免疫耐受小鼠产生乙肝病毒特异性抗体和细胞免疫应答，可望达到治疗慢性乙肝的目的。与此同时，另一种乙肝治疗性疫苗———以CTL表位为基础的基因疫苗及其增强技术也在该中心研制成功。目前，他们正申请有关国际专利。

      治疗性疫苗是近年建立和发展起来的免疫治疗新概念。其基本思想是通过构建具有治疗作用的疫苗用于病毒感染、肿瘤等疾病的治疗。治疗性疫苗与传统意义上的预防性疫苗具有显著不同的特征。通常，预防性疫苗主要作用于从未感染的机体，因此，天然结构的病毒蛋白可直接用作疫苗抗原；而治疗性疫苗的作用对象则为曾经感染病毒、且多为持续感染的机体，天然结构的病毒蛋白一般难于诱导其产生特异性免疫应答（乙肝患者再注射乙肝疫苗已不起作用）。因此，治疗性疫苗必须经过分子设计，重新构建，以获得与原天然病毒蛋白结构类似，但又不同的新的免疫分子。


   我去年下半年专门去闻玉梅的实验室拜访过，呵呵。 这好象是得过自然科学二等奖的。 也许体外或者动物实验是肯定很鼓舞人心的，但是进入临床后有了麻烦？或者效果不那么好？

天狼星

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   　　由乙肝表面抗原、抗体组成的免疫原性乙肝治疗性疫苗（乙克，IC），是医学分子病毒学实验室以闻玉梅院士领衔的课题组，在863计划资助下，经过十年多潜心研究而发展起来的具有我国自主产权的创新制品，在HbsAg阳性转基因鼠中证实可不同程度地清除鼠血清中HbsAg，并产生抗-HBs，诱生γ-干扰素及CTL。“九五”期间完成了临床前研究、三批产品的试制、通过中国药品生物制品所鉴定和临床Ⅰ期试验的申报工作。“十五”期间，本课题的总体目标为完成HbsAg-HBIG(IC)型乙肝治疗性疫苗的临床研究，获得新药证书，而2002年的主要工作则为获得临床研究批件并完成Ⅰ期试验。迄今进展顺利，2002年8月获得国家药品监督管理局同意在北京地坛医院、复旦大学附属华山医院、上海市静安区中心医院等五家单位进行临床研究的批文，2002年9月份开始在北京地坛医院进行临床Ⅰ期试验，同年12月底结束。在24例健康志愿者的研究结果显示，HbsAg-HBIG(IG)型乙肝治疗性疫苗安全、无副作用；(健康志愿者)注射3针后均能够产生高水平乙肝表面抗体；免疫学指标检测结果提示本治疗性疫苗可诱生有效的特异性免疫应答（包括抗体和细胞因子等）。预计2003年6月启动Ⅱ期临床试验。
   背景资料：治疗性乙肝疫苗


　　传统的疫苗设计一般是将病原体杀死、减毒或取其中一部分亚单位，注入健康的人体内，以激活人体内正常的免疫功能，从而达到预防的效果。但对于已经感染的病人，传统的疫苗一般不起任何作用。

　　治疗性疫苗可使机体产生免疫应答或克服免疫耐受状态。现有治疗慢性乙肝的抗病毒药对慢性乙肝病毒携带者疗效不佳，其主要原因是这些抗病毒药可以抑制乙肝病毒复制，但不能清除乙肝病毒；对机体的免疫耐受状态的逆转没有肯定的作用。从发展趋势来看，乙肝病毒治疗性疫苗将成为本世纪对慢性乙肝病毒感染特别是慢性乙肝病毒携带者治疗研究领域的热点，它与现有抗乙肝病毒药物的联合应用，成为一种新的治疗方法。



　　附：医学分子病毒学实验室1996年以来承担的有关肝炎的课题

1．治疗型乙肝疫苗的研究，863重点项目（96－2000）

2．新型治疗型乙肝疫苗的研究，863项目（96－2000）

3．DNA疫苗的研究，863 项目（96－2000）

4．乙肝表面抗原－课题－DNA三重复合型疫苗的研究，国家教育部(1997－2000)

5．肝炎病毒致病相关基因研究，自然科学基金重点项目（97－2000）

6．肝炎病毒基因的复制与表达，上海市科委基础研究重点项目(98－2000）

7．丙型肝炎病毒基因复制、表达的应用性基础研究，国家自然科学基金国家B类科学基金(1999-2001)

8．丙型肝炎病毒RNA多聚酶的蛋白质联系图谱研究，国家自然科学基金(1999－2001)

9．感染性丙型肝炎病毒cDNA克隆及RNA转录体构建，国家教育部优秀青年教师基金(1997-2000)

10．DNA芯片制造与应用研究，上海市科委重大科技创新项目(1999-2001)

11．丙型肝炎病毒基因组3’端非编码区的应用性研究，卫生部科研基金（1998－2000）

12．英国Wellcome Trust基金（98－2000）

13．丙型肝炎病毒基因复制机理的研究，霍英东教育基金(1999－2001)

14．HCV基因、病毒蛋白和细胞蛋白间的相互作用，教育部青年教师教学和科研奖励基金(2000－2004)

15．病原微生物基因组研究，863项目（合作）（1998－2000）

16．乙型肝炎病毒致病机理及免疫应答机制的研究，国家重大基础研究发展规划项目（2000－2005）年到位科研经费达200多万元。

18. 抗原-抗体-DNA三重复合型乙肝治疗性疫苗的研制, 国家科技部863计划 （2001．1-2003．12）

19. 中国慢性乙型肝炎病人树突状细胞功能的研究,国家自然科学基金委员会与香港研究资助局联合资助基金（2002－2004）

20. 乙型肝炎病毒多聚酶新功能区的基础与应用研究，国家自然科学基金（2002－2004)

22. 乙型肝炎病毒多聚酶基因变异表达及功能研究的基础与应用研究,上海市重点项目(2001-2004)

23. 乙型病毒型肝炎的基础及应用研究,复旦大学Med-X基金重点项目(2001-2003)


资料来源：http://www.hbver.com 　2003年7月2日  来源:复旦悦达 　  

天狼星

1995年前医学界普遍认为，疫苗只作预防疾病用。随着免疫学研究的发展，人们发现了疫苗的新用途，即可以治疗一些难治性疾病。从此，疫苗兼有了预防与治疗双重作用，治疗性疫苗属于特异性主动免疫疗法。1998年国外开始用乙肝病毒基因转移鼠为动物模型研究乙肝病毒治疗性疫苗的抗病毒作用。同年在法国、日本也开始用乙肝病毒某些基因片段表达的多肽加上各种不同佐剂配制的治疗性疫苗作临床研究，观察这种多肽疫苗对慢性乙肝病毒携带者的治疗作用。其结果揭示，这种疫苗对乙肝病毒基因转移鼠有抗病毒作用，单一应用特别是与抗乙肝病毒药联合应用，对慢性乙肝病毒携带者有一定的疗效。1999年美国研制了新的多肽治疗性疫苗，并对这种治疗性疫苗的免疫学作用进行了深入研究。美国这一研究具有很大意义，因为这一研究中，作者提出了一些免疫学检测方法，这些检测方法不仅可以预测治疗效果，而且还初步证明，治疗性疫苗可以打破慢性乙肝病毒感染患者最主要的免疫学反应紊乱，即对乙肝病毒及其抗原不产生免疫应答———免疫耐受状态。
　　
??免疫耐受是造成慢性乙肝病毒携带者呈持续病毒感染状态的主要原因之一，也是治疗上最难解决的问题。现有治疗慢性乙肝的抗病毒药对慢性乙肝病毒携带者疗效不佳，其主要原因是这些抗病毒药可以抑制乙肝病毒复制，但不能清除乙肝病毒；对机体的免疫耐受状态的逆转没有肯定的作用。
　　
??从发展趋势来看，乙肝病毒治疗性疫苗将成为本世纪对慢性乙肝病毒感染特别是慢性乙肝病毒携带者治疗研究领域的热点，它与现有抗乙肝病毒药物的联合应用，将成为一种新的治疗方法。
苏盛

健康报    以上有关于治疗性疫苗在国外研究的起源情况。

moonshadow

关于乙克最新的消息是8到9月已经在北京开始II期临床试验。I期的试验目的主要是检测其安全性，实验对象是无表面抗体的健康者。通过使用证明对人体无毒害副作用，并可诱生高滴度的表面抗体应答。由于I期试验的目的所限，对于此产品是否真的能对持续感染的慢性患者和携带者产生同样的效果，将是II期和III期试验的主要目的。
不过以前有贴子说闻院士本人对目前的乙克的效果并不保持怎么乐观，据说她认为真正有效的治疗性疫苗成果可能在5年后才会出来，她本人好像也在致力于基于三重免疫复合物的治疗性疫苗的研究。
也是道听途说。还是等乙克的II期临床试验结束了再看吧。

peterl

不会吧，乙克能否使HBsAg转阴？我不求所有的人都有效，就先让一部分人先转阴也好啊，已经知道在北京地坛医院做二期，我还等着它出来救命呢，我但心的事，它上不了市，只是作为骗取科研经费的手段，和公司股票圈钱的工具，唉，我目前唯一的希望啊。
还有重庆那个治疗性疫苗什么时候能上市啊，跟乙克有什么不同，重庆那边可是号称第一的啊

godsaveme01

我在烧香!

PAP

我不懂医学，我估计这东西不会是什么突破性的东西。希望越大，失望越大。

天狼星

现在出来的化学抗乙肝病毒药药都是抑制病毒作用的，不能根除病毒。

[此贴子已经被作者于2003-12-11 22:11:25编辑过]