研究报告：吴玉章的治疗用（合成肽）乙肝疫苗

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构建有效的新型抗原肽，必须研究T、B细胞表位的不同组合，研究引入了两个能够协助HBsAg特异性B细胞产生抗体的Th细胞表位，连结于MAP肽的核心端。研究发现MAP1、MAP2及Pre-S蛋白都能刺激特异性淋巴细胞发生增殖，且相互之间没有交叉刺激作用。说明活化的淋巴细胞亚群为抗原特异性的。既往研究表明：仅采用单一B细胞表位的构建MAP肽，其免疫原性仍不够理想。PreS蛋白能刺激免、小鼠T细胞的活化，Pre-S蛋白产生抗体滴度明显高于对照的Pc。而Pc有能被小鼠MHC分子识别的T细胞表位，可能与在小鼠诱发的抗体滴度稍高于对照免疫有关。以上实验说明，引入Th细胞表位能增强抗原肽的免疫原性。值得一提的是，MAP1对小鼠淋巴细胞ST的增殖作用明显高于其它抗原（P<0．05）。但MAP1诱发的抗体滴度并非最高，而低于MAP2，是否抗体产生主要决定因素在于B细胞表位的免疫原性? Th细胞的活化在抗体产生的定量如何，尚需进一步研究。

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5．新一代的疫苗。在构建完Pre-S蛋白B细胞的基础上，利用已研究的HBcAg中CTL表位，破伤风类毒素通用的Th细胞表位，以及分子内脂类佐剂为设计基础，设计了新一代的疫苗。
相关的试验情况如下：治疗用HBV模拟抗原的设计及其诱导慢性乙型肝炎患者外周血CTL活性研究论文中。

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首先，是通过引入四聚体技术，比较基于不同表位组合的模拟抗原分子的免疫原性，研究其结构与诱导免疫应答之间的关系。以乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg）18—27表位为基础，分别引入了Th、Th＋B细胞表位，合成了3种模拟抗原，并以这3种模拟抗原在体外刺激慢性乙型肝炎患者的外周血单个核细胞为模型，通过HLA-A2*0201 tetramer定量检测抗原特异性细胞毒性T细胞（CTL）。在研究中以血清HBsAg、anti-HBc、anti-HBe阳性、血清谷氨酸丙酮酸转氨酶（肝脏炎症的衡量指标）、HBV DNA水平低、HLA-A2＋的慢性乙型肝炎患者为研究对象是基于此类患者外周血中存在的CD8＋T细胞特异性地识别病毒后能够有效的增殖以控制病毒复制。因此选取此类患者用于所设计的模拟抗原能有效地诱导产生特异性CTL反应的研究。 　　
结果显示3种模拟抗原分子能有效地诱导慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞产生抗原特异性CTL反应；Th和B细胞表位的引入可增强该效应。所建立的四聚体技术可定量检测表位特异性CTL；模拟抗原的设计中引入Th、B细胞表位可增强其免疫原性。

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其次，血清中和抗体的检测多肽。Pl和P2不能诱导小鼠产生中和抗体，多肽P3 JJlJ强免疫4次后，可产生适度的中和抗体，其滴度约为1：670对照肽组未检测到抗体产生。 　　
模拟抗原诱导T细胞Th1／Th2型极化的分析用双抗体夹心EL1SA法检测小鼠免疫血清中细胞因子IL-4、IL-10、IFN-γ等细胞因子谱的分泌量变化，间接分析T细胞极化情况。结果表明，P3诱导Thl、Th2型细胞极化的能力均较强，并以Thl型极化为主；多肽Pl、P2及Mart-1 27-35均能诱导较弱的Thl型T细胞极化。各模拟肽抗原结果差异显著（P<0.05）．

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6．疫苗项目总结。目前，无论是蛋白疫苗、DNA疫苗还是多肽类疫苗，国内外现有研究开发，主要集中在天然抗原选择搭配、在预防性疫苗的制剂中添加抗原或抗体的方式。而且除多肽类疫苗是在表位识别水平外，其余的都是在蛋白大分子水平上。目前所有的治疗性乙肝疫苗没有出现有效治愈的案例，没有取得突破性的进展。在天然抗原的组合和搭配上进行了多年的探索，依然是没有取得突破性的近展。主要是由于天然抗原产生的免疫耐受、免疫偏差、免疫颠覆基本上是同时存在，因此仅仅依靠天然抗原的组合难以解决乙肝病人的免疫耐受。随着模拟表位的发现，吴玉章在乙肝疫苗的设计中提出了模拟抗原代替天然抗原的思路，首创了表位识别的氨基酸密码学说和模拟抗原的分子设计理念，来克服天然抗原的免疫弱势和蛋白大分子的免疫偏差和免疫颠覆。

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从有关乙肝免疫耐受的机理、治疗用（合成肽）乙肝疫苗有关的免疫识别理论（表位生物学、氨基酸密码学说），影响Th1/Th2细胞极化的多重因素，CTL效应与Th1/Th2细胞极化的关系，CTL免疫识别和效应，以及吴教授的基于表位的疫苗设计路线（EBVD）的阐述来看。我们认为该疫苗的设计路线新颖，理论成熟可靠，具有很高的实用价值。打破乙肝病毒免疫耐受的概率极大。 　　
从临床前的实验资料可以看出，吴玉章有关乙肝疫苗的相关研究进程，是一个层层递进的关系，目前公开资料中，显示该疫苗到动物试验结束之前，都是非常不错的效果，从中，我们也能够看到该疫苗的理论基础和设计方法在实践中获得了验证。根据吴教授公开的实验数据和相关免疫指标的检测，以及在动物试验中的良好结果，我们认为非常有可能在人体内出现一个特异性的免疫应答，从而达到打破免疫耐受和彻底治愈乙肝的目标。 　　
治疗用（合成肽）乙肝疫苗相关技术的核心是基于表位生物学和氨基酸密码学说，通过特异性免疫，纠正免疫偏差、免疫颠覆、激发免疫效应，达到特异性免疫治疗的目的。所以该项目的相关技术能够应用的领域包括慢性感染性疾病、自身免疫性疾病、认知性疾病等。
我们认为该疫苗的设计路线新颖，理论成熟可靠，具有很高的实用价值。打破乙肝病毒免疫耐受的概率极大。

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从临床前的实验资料可以看出，吴玉章有关乙肝疫苗的相关研究进程，是一个层层递进的关系，目前公开资料中，显示该疫苗到动物试验结束之前，都是非常不错的效果，从中，我们也能够看到该疫苗的理论基础和设计方法在实践中获得了验证。根据吴教授公开的实验数据和相关免疫指标的检测，以及在动物试验中的良好结果，我们认为非常有可能在人体内出现一个特异性的免疫应答，从而达到打破免疫耐受和彻底治愈乙肝的目标。
治疗用（合成肽）乙肝疫苗相关技术的核心是基于表位生物学和氨基酸密码学说，通过特异性免疫，纠正免疫偏差、免疫颠覆、激发免疫效应，达到特异性免疫治疗的目的。所以该项目的相关技术能够应用的领域包括慢性感染性疾病、自身免疫性疾病、认知性疾病等。

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