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电化学发光免疫分析
电化学发光免疫分析仪法与ELISA法检测乙肝“两对半”少见模式的比较首
【摘要】 目的:分析电化学发光免疫法ECLIA与ELISA法检测乙肝“两对半”少见模式特征。方法:用电化学发光免疫分析仪对954例标本进行乙肝“两对半”的定量检测,对于其少见模式(“1”、“1235”、“1245”、“1345”、“12345”),随机抽取58例,再用ELISA法检测作对比。结果:电化学发光免疫分析仪法定量检测共11种模式,其中5种少见模式。ELISA法检测结果:少见模式中的“1”主要表现为“阴性”;少见模式中的“1345”主要表现为“145”;“1245”模式主要表现为“145”、“245”;“1235”模式主要表现为“135”;“12345”模式共2例均表现为“15”。结论:本组乙肝“两对半”表现模式较为复杂,电化学发光免疫分析仪技术检测乙肝“两对半”的灵敏度、速度和自动化程度均较高,是目前临床检查乙肝“两对半”的较好方法。
【关键词】 乙肝病毒标志物 电化学发光免疫分析仪法 酶联免疫吸附实验
材料和方法
标本来源及处理:取自我院门诊及住院病人的血清(浆)。所有受试者均系静脉采血,3800rpm离心5分钟分离出血清(浆),立即上机测定。
试剂、仪器:全自动电化学发光免疫分析仪,全自动微孔洗板机,anthos 2010酶标仪。
方法:乙肝“两对半”定量测定严格按照仪器的操作规程进行实验,所测结果均由仪器自动完成。对其结果中的少见模式,随机抽取58例(有1、1345、1235、1245、12345模式),并用ELISA法严格按照试剂盒说明书进行操作。每次检测时均设阴阳性对照及质控对照。检测结果用酶标仪判读。
阳性判断标准:HBsAg为定量分析,以IU/ml为单位,浓度≥1时判为阳性;抗HBs为定量分析,以mIU/ml为单位,浓度≥10.0时判为阳性;HBeAg以样本相对光强度单位(RLU)与临界质控相对光强度单位之比(S/Co)为单位,结果≥1.0时判为阳性;抗HBe以S/Co为单位,结果≤1.0时判为阳性;抗HBc以S/Co为单位,结果≥1.0时判为阳性。
结果表述:以1、2、3、4、5分别代表乙肝“两对半”中的HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe和抗HBc,并以阳性项目的序号为该模式的代码,如某病人血清学标志的检测结果为HBsAg阳性,抗HBs阴性,HBeAg阴性,抗HBe阳性,抗HBc阳性,则该模式代码为“145”,余类推。
结果
954例乙肝“两对半” ECLIA法定量检测结果的模式共有11种。对其中58例标本分别用ECLIA法和ELISA法对其进行检测,结果如表1。
表1 ECLIA法与ELISA法检测结果(略)
ELISA法检测结果:少见模式中的“1”主要表现为“阴性”;“1345”主要表现为“145”;“1245”模式主要表现为“145”、“245”;“1235”模式主要表现为“135”;“12345”模式共2例均表现为“15”。
讨论
在“1”模式中,HBsAg绝大多数含量<4IU/ml,而ELISA法检测阴性,主要因为ECLIA方法敏感,而ELISA法的灵敏度不高,对于极微量的抗原抗体通常检测不出来,特异性差且易受人为因素的影响。
在“1345”模式中,HBeAg含量绝大部分在1.17~11.18之间(单位S/Co),HBe含量绝大部分在0.22~0.77之间(单位S/Co),说明HBeAg、抗HBe含量大部分在低值(弱阳性)范围,此种情况可能是“135”模式在向“145”模式的转换过程中[1]。ELISA法检测主要表现为“145”模式,主要因为ELISA法检测不到低浓度的HBeAg。
在“1235”模式中,HBsAg绝大多数含量>250IU/ml,抗HBs含量绝大多数在10.97~50.72之间(单位mIU/ml),HBeAg含量在10.84~1352.09之间(单位S/Co),抗HBs含量大部分在低值,说明此模式也可能是“135”向“145”的中间转换模式[1]或新的不同亚型再感染[2]。ELISA法检测结果主要表现为“135”,主要原因可能为ELISA法灵敏度不高,检测不到低浓度的抗HBs。也有2例抗HBs和HBsAg两种方法检测结果含量均较高,可能为新的不同亚型再感染。“1245”模式可能是“145”模式在抗HBs低滴度阳性后向“245”模式转换过程中[4]或亚临床HBV感染早期[3],ELISA法检测结果主要表现为“145”、“245”也正说明了这一点。HBsAg、抗HBs含量均较高者可能为新的不同亚型再感染[2]。“12345”模式也可能是HBV血清学标志物模式转换的中间模式[3]或者是亚型感染[3]。而ELISA法检测结果表现为“15”,主要是因为ELISA法检测不到低浓度的抗HBs、HBeAg、抗HBe。
产生“13”模式的原因可能为低滴度抗HBc;前c区突变导致HBcAg变异,以致目前的核心抗原检测系统不能检出抗HBc;或宿主存在选择性免疫缺陷,缺乏HBcAg特异性的T细胞。
产生“15”模式的原因:血清转换期或前c区末端1896位点发生G→A的突变,使得无法合成HBeAg,如果经追踪观察,仍为HBsAg和抗HBc阳性,而HBV-DNA保持阳性,则可能是前C区突变模式。
【参考文献】
1 孙南雄,黄祖瑚,刘雁雁,等.乙型肝炎患者957例血清学标志分析.中华医学检验杂志,1999,22(5):296-298.
2 叶维法,钟振义.肝炎学大典.第1版.天津:天津科学技术出版社,1996,463-515.
3 朱国安.检测后的“乙肝三系”结果如何判断.实用医技杂志,1998,5(3):141. |
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