EASL2019：新研究发现cccDNA几个月内便可完成全面 - 学术讨论& HBV English

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newchinabok

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发表于 2019-5-1 08:14 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

本帖最后由 newchinabok 于 2019-5-1 08:14 编辑

EASL2019：新研究发现cccDNA几个月内便可完成全面更新
原创：放下肝脏时间今天
目前慢性乙型肝炎使用标准的治疗方法治愈率较低，而患者肝细胞内的cccDNA病毒池无法消除被认为是主要原因。尚不清楚这种持久性是由于cccDNA的寿命因素还是由于重新感染或细胞内扩增而获得有效补充所导致。

Assembly Biosciences公司等机构研究人员通过优化方法以分析慢乙肝患者血清和肝脏活组织检查中不同的cccDNA，pgRNA和病毒DNA群体。设计泛基因型引物以扩增HBV逆转录酶（RT）基因。

来自snapfrozen 肝脏活组织检查的HBV cccDNA通过改良的Hirt方法提取，用T5核酸外切酶消化，通过PCR扩增。用QIAamp MinElute病毒试剂盒从Hirt提取流中纯化肝内rcDNA和HBV RNA。

使用QIAamp MinElute Virus试剂盒从患者血清中提取HBV DNA和pgRNA。将等分试样用DNase I消化并用作RT-PCR的模板。

使用SequencherTM软件（基因代码）分析PCR和RT-PCR片段的Sanger测序结果，并通过TAcloning后的群体测序或基于克隆的测序计算拉米夫定/替比夫定抗性（NucR）突变的百分比。
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回顾性地监测NucR突变的出现和消失，作为来自两个临床研究（EFFORT和ML18376）的配对患者肝脏和血清样品的患者组中cccDNA转换/进化的敏感遗传标记。

对于这种遗传方法的成功至关重要，研究人员发现在血清pgRNA，肝内HBV RNA和cccDNA样本中发现的群体序列之间存在密切关系，在肝活检样本不可用的时间点验证血清RNA作为cccDNA序列的替代标记。

观察到的NucR病毒变异体（DNA）的变化表明野生型pgRNA和cccDNA群体几乎完全更新，观察到一些病人血清HBV DNA，pgRNA和cccDNA群体在WT和NucR群体之间在短短3-4个月内转换。

影响适合度的补偿性突变可能是突破性患者中完整病毒遗传更新所观察到的时间线范围。在所有病例中，如先前预测的那样，周转率是在几个月而不是如先前所测量的几年。

综上，血清pgRNA被验证为cccDNA群体的替代遗传生物标志物。总体而言，cccDNA池似乎是动态的，现有种群迅速衰减，并在短短3-4个月内完成更新换代。这些发现支持了可以完全抑制病毒复制并抑制新cccDNA分子再生的方案的有限治疗期的潜力。（更多肝病研究信息敬请关注“肝脏时间”微信公众号）！

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