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标题: EASL2019：新研究发现cccDNA几个月内便可完成全面 [打印本页]

作者: newchinabok 时间: 2019-5-1 08:14 标题: EASL2019：新研究发现cccDNA几个月内便可完成全面

本帖最后由 newchinabok 于 2019-5-1 08:14 编辑

EASL2019：新研究发现cccDNA几个月内便可完成全面更新
原创：放下肝脏时间今天
目前慢性乙型肝炎使用标准的治疗方法治愈率较低，而患者肝细胞内的cccDNA病毒池无法消除被认为是主要原因。尚不清楚这种持久性是由于cccDNA的寿命因素还是由于重新感染或细胞内扩增而获得有效补充所导致。

Assembly Biosciences公司等机构研究人员通过优化方法以分析慢乙肝患者血清和肝脏活组织检查中不同的cccDNA，pgRNA和病毒DNA群体。设计泛基因型引物以扩增HBV逆转录酶（RT）基因。

来自snapfrozen 肝脏活组织检查的HBV cccDNA通过改良的Hirt方法提取，用T5核酸外切酶消化，通过PCR扩增。用QIAamp MinElute病毒试剂盒从Hirt提取流中纯化肝内rcDNA和HBV RNA。

使用QIAamp MinElute Virus试剂盒从患者血清中提取HBV DNA和pgRNA。将等分试样用DNase I消化并用作RT-PCR的模板。

使用SequencherTM软件（基因代码）分析PCR和RT-PCR片段的Sanger测序结果，并通过TAcloning后的群体测序或基于克隆的测序计算拉米夫定/替比夫定抗性（NucR）突变的百分比。
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回顾性地监测NucR突变的出现和消失，作为来自两个临床研究（EFFORT和ML18376）的配对患者肝脏和血清样品的患者组中cccDNA转换/进化的敏感遗传标记。

对于这种遗传方法的成功至关重要，研究人员发现在血清pgRNA，肝内HBV RNA和cccDNA样本中发现的群体序列之间存在密切关系，在肝活检样本不可用的时间点验证血清RNA作为cccDNA序列的替代标记。

观察到的NucR病毒变异体（DNA）的变化表明野生型pgRNA和cccDNA群体几乎完全更新，观察到一些病人血清HBV DNA，pgRNA和cccDNA群体在WT和NucR群体之间在短短3-4个月内转换。

影响适合度的补偿性突变可能是突破性患者中完整病毒遗传更新所观察到的时间线范围。在所有病例中，如先前预测的那样，周转率是在几个月而不是如先前所测量的几年。

综上，血清pgRNA被验证为cccDNA群体的替代遗传生物标志物。总体而言，cccDNA池似乎是动态的，现有种群迅速衰减，并在短短3-4个月内完成更新换代。这些发现支持了可以完全抑制病毒复制并抑制新cccDNA分子再生的方案的有限治疗期的潜力。（更多肝病研究信息敬请关注“肝脏时间”微信公众号）！

作者: fuke 时间: 2019-5-1 10:49

RNA到底是不是cccdna的标志物，现在也说不清楚。现在在研发的可以降RNA的药物好像有好几种

作者: newchinabok 时间: 2019-5-1 13:41

fuke 发表于 2019-5-1 10:49
RNA到底是不是cccdna的标志物，现在也说不清楚。现在在研发的可以降RNA的药物好像有好几种 ...

你的理解本末倒置了，cccdna少了，rna才变少。药物影响了cccdna。不是药物直接降rna

作者: fuke 时间: 2019-5-1 14:42

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我的理解有问题吗？我当然知道你说的这个。我的意思是说rna低了是不是就可以判断cccdna降低了。

作者: newchinabok 时间: 2019-5-1 22:23

本帖最后由 newchinabok 于 2019-5-1 22:25 编辑

fuke 发表于 2019-5-1 14:42
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我的理解有问题吗？我当然知道你说的这个。我的意思是说rna低了是不是就可以判断 ...

RNA少了当然说明cccdna少了，RNA就是蛋，cccdna就是鸡。核衣壳的靶点不是rna，是间接影响cccdna，为什么rna能快速变少呢？原因就是间接干挠了cccdna

作者: newchinabok 时间: 2019-5-1 22:28

fuke 发表于 2019-5-1 14:42
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我的理解有问题吗？我当然知道你说的这个。我的意思是说rna低了是不是就可以判断 ...

http://m.medlive.cn/cms/research/124386

作者: StephenW 时间: 2019-5-2 16:06

newchinabok 发表于 2019-5-1 22:23
RNA少了当然说明cccdna少了，RNA就是蛋，cccdna就是鸡。核衣壳的靶点不是rna，是间接影响cccdna，为什么rn ...

II型核衣壳加速衣壳的形成，导致没有pgrna(前基因组RNA)的空衣壳, 因此没有从pgrna到hbvdna的逆转录. 因此血清hbvdna和血清hbv rna减少. Pgrna 不能从肝细胞释放到血液中, 除了衣壳内.

血清RNA少了不必要说明cccdna少了.

作者: fuke 时间: 2019-5-2 22:14

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我觉得也是这样，cccdna少了rna会减少，rna减少并不能说明cccdna也减少了

作者: newchinabok 时间: 2019-5-3 07:03

本帖最后由 newchinabok 于 2019-5-3 07:05 编辑

fuke 发表于 2019-5-2 22:14
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我觉得也是这样，cccdna少了rna会减少，rna减少并不能说明cccdna也减少了 ...

rna减少，证明衣壳破坏了，复制抑制，cccdna新陈代谢，不是少了么？片面看问题对么？

作者: StephenW 时间: 2019-5-3 14:53

newchinabok 发表于 2019-5-3 07:03
rna减少，证明衣壳破坏了，复制抑制，cccdna新陈代谢，不是少了么？片面看问题对么？ ...

cccdna新陈代谢半衰期仍是未知数. 就像用TDF / ETV一样, dna减少,复制抑制, cccdna新陈代谢, 不是少了么？

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