我的HBV DNA去哪了【转发 检验科的故事 】

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http://www.alabmed.com/content-697-166-1.html

我的HBV DNA去哪了

【案例经过】

这件事发生在笔者实习期间，那是笔者轮转到PCR室实习的第二个周末。上午八点带教老师和我准时投入到自己的战斗当中，一切都有条不紊的进行着，临近下班之时，李老师把我叫过去了。
“小邱，你过来一下，你看看这个结果”

笔者坐下来仔细查看着这位患者的各种信息：患者男，年龄8个月，诊断肝炎，前天入院治疗，乙肝五项结果HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性，大三阳，其他指标大致正常。可是一看今天PCR结果却是HBV DNA<10^3（PCR-荧光探针法，上海科华）。

王老师，这样的结果应该不可能呀，这个孩子是大三阳，怎么PCR会是阴性的呢？

是呀，虽然HBeAg阳性的乙肝患者，HBV DNA的阳性率是95%左右，可是出现那5%阴性的时候实在是很少，我都没见过;看看标本没有溶血、脂血，今天的质控线也很完美。难道是乙肝五项结果有问题？患者真的是HBeAg阳性么？还是患者抗病毒治疗后HBV DNA转阴了？

立刻复查原血乙肝五项（电化学发光法，罗氏601），1h后免疫室回报复查结果依然为大三阳，难道是今天的PCR检测出问题了？王老师亲自找到这个患者的标本核对所有信息无误后，复查PCR。中午结果出来了，可出现在眼前的仍然是一天躺着的平直的扩增曲线。

无计可施之时，王老师让我去病房看看护士采血有没有问题，到了感染科病房，见到患者家属说明来意后，家属情绪很激动。

孩子这么小，你们早上刚抽完两管，扎了好几针，怎么现在又要抽啊，你们抽血的技术怎么这么差呀

您好，这孩子小血管不好找，实在不好意思，您说早上护士抽了两管？
是呀，一管绿的，一管粉的，粉的抽的时候孩子都哭过去了

难道是？一种不祥的预感油然而生，按捺住心中的疑惑。又和家属解释半天终于同意，抽血后直接找到了今天早上的责任护士小李。小李是今年刚毕业进科不久的护士，追问了半天，她终于道出了实情。
因为那个小孩血管不好找，扎了两针绿管的够了，粉管的不够，要扎第三针家属急了，态度很不好还骂了我，但是粉色的又太少，我就把绿管的血倒到粉管里了，实在对不起，我也不知道影响会这么大。

回到检验科马上复查新采的EDTA抗凝的标本，下午结果出来了，HBV DNA为6.5X10^7。终于水落石出，这个谜团的出现原来是护士抽错标本管导致的结果。
【分析与心得】
平时我科检测HBV DNA所用的为EDTA的抗凝管，因为肝素对HBV DNA荧光定量检测结果会产生影响。据文献报道是肝素抑制了Taq 酶的活性, 干扰了HBV DNA的合成，从而会使检测结果出现假阴性[1]。

检验质量涉及了标本分析前、中、后的每个环节，而分析前质量则是构成临床检验质量保证的第一个重要环节，而在实验误差中，分析前因素占71%；临床反馈不满意的检验结果，有80%的报告可最终溯源到标本不符合要求[2]。我们有时会碰到血糖30mmol/L,血钾11mmol/L等等，这些大部分都是临床工作中因分析前标本质量涉及的环节因素多、控制方法不得力等原因造成的。分析前质量不合格不仅增加了医护人员的工作量，还造成了时间和资源的浪费，造成患者第二次抽血，有时更会引起患者的不满和纠纷。所以作为一名临床护理人员，应该从思想上充分认识到分析前血标本质量控制的重要性，充分认识到护理人员在质量控制中的重要作用，自觉做好每一个环节质量的自控和他控，切实保证分析前血标本的质量。作为检验人员也要走出检验科，加强与临床的配合与沟通，对护理人员发放学习资料，并现场培训进行有效沟通，对不合格标本，耐心细致的做好临床护士、医生的解释工作，定期沟通并反馈意见从而更好进行全面的质量管理。检验人员在工作之余更要学好专业基础知识，加强临床知识与临床思维的学习，从而更好地预防和发现分析前失误所造成的误差，在检验工作中对质量控制的每个环节严格把关，减少误差，努力提高检验数据的可靠性和准确性，更好的为患者服务。

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楼主补充 检测HBV-DNA的有关规定

王震宇

纯属胡说八道，用错采血管会把7次方DNA降到阴性？？？

你当别人都是傻子？

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补充原贴中的参考文献
[1] Yokota M, TatsumiN, Nothalang O, etal. Effects ofheparin on polymer asechain reaction for blood whitecells[ J] . J Clin Lab Anal, 1999, 13: 133-140
[2] 丛玉隆. 临床实验室分析前质量管理及对策[J]. 中华检验医学杂志, 2004, 27(8): 483-487

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王震宇 发表于 2016-7-12 20:12
纯属胡说八道，用错采血管会把7次方DNA降到阴性？？？

你当别人都是傻子？ ...

王大夫，觉得检验科弄错采血管能有什么样的误差呢？

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10323479
Effects of heparin on polymerase chain reaction for blood white cells.

聚合酶链反应(PCR)已经被用于诊断传染病和遗传病越来越频繁。在这项研究中,肝素的影响PCR进行调查,因为肝素化血液有时被用于PCR研究。HLA-DQA1基因扩增被用作模型。PCR显然是干扰当肝素化血液被用作模板DNA的来源,和干扰的程度是由以下三个因素的影响;(1)类型的Taq DNA聚合酶;(2)血液中白细胞计数;(3)肝素的浓度。当额外的测试进行了明确的肝素浓度的增加PCR反应混合物,与大量的DNA标本由肝素往往表现出更少的干扰。添加≥0.1到0.0016 U(肝素/反应混合物(50μl)抑制DNA扩增剂量依赖性的方式。我们因此得出结论,应该小心当肝素化血液作为PCR材料。

Polymerase chain reaction (PCR) has been used with increasing frequency to diagnose infectious and genetic diseases. In this study, the effects of heparin on PCR were investigated, because heparinized blood may sometimes be used in PCR studies. HLA-DQA1 gene amplification was used as a model. PCR was clearly interfered with when heparinized blood was used as a source of template DNA, and the degree of interference was affected by the following three factors; (1) type of Taq DNA polymerase; (2) leukocyte count in blood; and (3) concentration of heparin contained. When additional tests were conducted with additions of definite heparin concentrations to a PCR reaction mixture, specimens with large amounts of DNA tended to exhibit less interference by heparin. The addition of ≥ 0.1 to 0.0016 U of heparin per reaction mixture (50 μl) suppressed DNA amplification in a dose-dependent fashion. We therefore concluded that much care should be taken when heparinized blood is used as a PCR material. J. Clin. Lab. Anal. 13:133–140, 1999.

王震宇

哭泪娃酒友呆

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王震宇 发表于 2016-7-12 20:50
哭泪娃酒友呆

王大夫，别扯你那个天津呛的日语了。

论坛上能听懂的没几个。

你的日语，词不达意，语法全无。

王震宇

你信我不信，
你说你的
我说我的
你我之间的交流

娃啊离妈森

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我转发内容来源于 检验视界网 上 http://www.ivdchina.org/authors/show-142.html 的原创文章。
作者：承德医学院附属医院检验科  邱伟

王大夫是门诊的， 难道相信检验科的医生没有事情瞎编一个失误故事自己黑自己？！

王震宇

卡纳西米嘎，哭路西米嘎
呼啦----蜜液露来休

酷雅西米嘎，你酷西米嘎
呼啦----蜜液露来休

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王震宇 发表于 2016-7-12 21:53
卡纳西米嘎，哭路西米嘎
呼啦----蜜液露来休

您想装东洋鬼子么，还是想当翻译官。