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标题: 我的HBV DNA去哪了【转发检验科的故事】 [打印本页]

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-12 15:03 标题: 我的HBV DNA去哪了【转发检验科的故事】

本帖最后由 smilingcloud 于 2016-7-27 14:13 编辑

http://www.alabmed.com/content-697-166-1.html

我的HBV DNA去哪了

【案例经过】

这件事发生在笔者实习期间，那是笔者轮转到PCR室实习的第二个周末。上午八点带教老师和我准时投入到自己的战斗当中，一切都有条不紊的进行着，临近下班之时，李老师把我叫过去了。
“小邱，你过来一下，你看看这个结果”

笔者坐下来仔细查看着这位患者的各种信息：患者男，年龄8个月，诊断肝炎，前天入院治疗，乙肝五项结果HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性，大三阳，其他指标大致正常。可是一看今天PCR结果却是HBV DNA<10^3（PCR-荧光探针法，上海科华）。

王老师，这样的结果应该不可能呀，这个孩子是大三阳，怎么PCR会是阴性的呢？

是呀，虽然HBeAg阳性的乙肝患者，HBV DNA的阳性率是95%左右，可是出现那5%阴性的时候实在是很少，我都没见过;看看标本没有溶血、脂血，今天的质控线也很完美。难道是乙肝五项结果有问题？患者真的是HBeAg阳性么？还是患者抗病毒治疗后HBV DNA转阴了？

立刻复查原血乙肝五项（电化学发光法，罗氏601），1h后免疫室回报复查结果依然为大三阳，难道是今天的PCR检测出问题了？王老师亲自找到这个患者的标本核对所有信息无误后，复查PCR。中午结果出来了，可出现在眼前的仍然是一天躺着的平直的扩增曲线。

无计可施之时，王老师让我去病房看看护士采血有没有问题，到了感染科病房，见到患者家属说明来意后，家属情绪很激动。

孩子这么小，你们早上刚抽完两管，扎了好几针，怎么现在又要抽啊，你们抽血的技术怎么这么差呀

您好，这孩子小血管不好找，实在不好意思，您说早上护士抽了两管？
是呀，一管绿的，一管粉的，粉的抽的时候孩子都哭过去了

难道是？一种不祥的预感油然而生，按捺住心中的疑惑。又和家属解释半天终于同意，抽血后直接找到了今天早上的责任护士小李。小李是今年刚毕业进科不久的护士，追问了半天，她终于道出了实情。
因为那个小孩血管不好找，扎了两针绿管的够了，粉管的不够，要扎第三针家属急了，态度很不好还骂了我，但是粉色的又太少，我就把绿管的血倒到粉管里了，实在对不起，我也不知道影响会这么大。

回到检验科马上复查新采的EDTA抗凝的标本，下午结果出来了，HBV DNA为6.5X10^7。终于水落石出，这个谜团的出现原来是护士抽错标本管导致的结果。
【分析与心得】
平时我科检测HBV DNA所用的为EDTA的抗凝管，因为肝素对HBV DNA荧光定量检测结果会产生影响。据文献报道是肝素抑制了Taq 酶的活性, 干扰了HBV DNA的合成，从而会使检测结果出现假阴性[1]。

检验质量涉及了标本分析前、中、后的每个环节，而分析前质量则是构成临床检验质量保证的第一个重要环节，而在实验误差中，分析前因素占71%；临床反馈不满意的检验结果，有80%的报告可最终溯源到标本不符合要求[2]。我们有时会碰到血糖30mmol/L,血钾11mmol/L等等，这些大部分都是临床工作中因分析前标本质量涉及的环节因素多、控制方法不得力等原因造成的。分析前质量不合格不仅增加了医护人员的工作量，还造成了时间和资源的浪费，造成患者第二次抽血，有时更会引起患者的不满和纠纷。所以作为一名临床护理人员，应该从思想上充分认识到分析前血标本质量控制的重要性，充分认识到护理人员在质量控制中的重要作用，自觉做好每一个环节质量的自控和他控，切实保证分析前血标本的质量。作为检验人员也要走出检验科，加强与临床的配合与沟通，对护理人员发放学习资料，并现场培训进行有效沟通，对不合格标本，耐心细致的做好临床护士、医生的解释工作，定期沟通并反馈意见从而更好进行全面的质量管理。检验人员在工作之余更要学好专业基础知识，加强临床知识与临床思维的学习，从而更好地预防和发现分析前失误所造成的误差，在检验工作中对质量控制的每个环节严格把关，减少误差，努力提高检验数据的可靠性和准确性，更好的为患者服务。

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楼主补充检测HBV-DNA的有关规定

作者: 王震宇 时间: 2016-7-12 20:12

纯属胡说八道，用错采血管会把7次方DNA降到阴性？？？

你当别人都是傻子？

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-12 20:29

补充原贴中的参考文献
[1] Yokota M, TatsumiN, Nothalang O, etal. Effects ofheparin on polymer asechain reaction for blood whitecells[ J] . J Clin Lab Anal, 1999, 13: 133-140
[2] 丛玉隆. 临床实验室分析前质量管理及对策[J]. 中华检验医学杂志, 2004, 27(8): 483-487

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-12 20:33

本帖最后由 smilingcloud 于 2016-7-12 20:38 编辑

王震宇发表于 2016-7-12 20:12
纯属胡说八道，用错采血管会把7次方DNA降到阴性？？？

你当别人都是傻子？ ...

王大夫，觉得检验科弄错采血管能有什么样的误差呢？

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10323479
Effects of heparin on polymerase chain reaction for blood white cells.

聚合酶链反应(PCR)已经被用于诊断传染病和遗传病越来越频繁。在这项研究中,肝素的影响PCR进行调查,因为肝素化血液有时被用于PCR研究。HLA-DQA1基因扩增被用作模型。PCR显然是干扰当肝素化血液被用作模板DNA的来源,和干扰的程度是由以下三个因素的影响;(1)类型的Taq DNA聚合酶;(2)血液中白细胞计数;(3)肝素的浓度。当额外的测试进行了明确的肝素浓度的增加PCR反应混合物,与大量的DNA标本由肝素往往表现出更少的干扰。添加≥0.1到0.0016 U(肝素/反应混合物(50μl)抑制DNA扩增剂量依赖性的方式。我们因此得出结论,应该小心当肝素化血液作为PCR材料。

Polymerase chain reaction (PCR) has been used with increasing frequency to diagnose infectious and genetic diseases. In this study, the effects of heparin on PCR were investigated, because heparinized blood may sometimes be used in PCR studies. HLA-DQA1 gene amplification was used as a model. PCR was clearly interfered with when heparinized blood was used as a source of template DNA, and the degree of interference was affected by the following three factors; (1) type of Taq DNA polymerase; (2) leukocyte count in blood; and (3) concentration of heparin contained. When additional tests were conducted with additions of definite heparin concentrations to a PCR reaction mixture, specimens with large amounts of DNA tended to exhibit less interference by heparin. The addition of ≥ 0.1 to 0.0016 U of heparin per reaction mixture (50 μl) suppressed DNA amplification in a dose-dependent fashion. We therefore concluded that much care should be taken when heparinized blood is used as a PCR material. J. Clin. Lab. Anal. 13:133–140, 1999.

作者: 王震宇 时间: 2016-7-12 20:50

哭泪娃酒友呆

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-12 20:52

王震宇发表于 2016-7-12 20:50
哭泪娃酒友呆

王大夫，别扯你那个天津呛的日语了。

论坛上能听懂的没几个。

你的日语，词不达意，语法全无。

作者: 王震宇 时间: 2016-7-12 20:56

你信我不信，
你说你的
我说我的
你我之间的交流

娃啊离妈森

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-12 21:22

我转发内容来源于检验视界网上 http://www.ivdchina.org/authors/show-142.html 的原创文章。
作者：承德医学院附属医院检验科邱伟

王大夫是门诊的，难道相信检验科的医生没有事情瞎编一个失误故事自己黑自己？！

作者: 王震宇 时间: 2016-7-12 21:53

卡纳西米嘎，哭路西米嘎
呼啦----蜜液露来休

酷雅西米嘎，你酷西米嘎
呼啦----蜜液露来休

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-12 22:09

王震宇发表于 2016-7-12 21:53
卡纳西米嘎，哭路西米嘎
呼啦----蜜液露来休

您想装东洋鬼子么，还是想当翻译官。

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-12 22:29

王震宇发表于 2016-7-12 21:53
卡纳西米嘎，哭路西米嘎
呼啦----蜜液露来休

老王，你是不是傻逼西米嘎？

作者: 王震宇 时间: 2016-7-20 12:15

楼主所转发的帖子，故事是虚构的

我的实验结果完全与其不同

作者: 王震宇 时间: 2016-7-20 12:19

毛病出在这里

【因为那个小孩血管不好找，扎了两针绿管的够了，粉管的不够，要扎第三针家属急了，态度很不好还骂了我，但是粉色的又太少，我就把绿管的血倒到粉管里了，实在对不起，我也不知道影响会这么大。】

较大可能，把另一个人的血冒充成这个人的。

作者: 王震宇 时间: 2016-7-20 12:24

其二
【平时我科检测HBV DNA所用的为EDTA的抗凝管，因为肝素对HBV DNA荧光定量检测结果会产生影响。据文献报道是肝素抑制了Taq 酶的活性, 干扰了HBV DNA的合成，从而会使检测结果出现假阴性[1]。】

1.没有进行同份血清对照试验
2.没有进行扩大样本量校对实验

简单地说，就是从麻袋里摸出一个黑球，就简单推定麻袋里面全都是黑球了。

作者: 五蛋 时间: 2016-7-20 14:22

楼主又开始与王拉米大战了。。

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-20 15:50

回复五蛋的帖子

老王是离不开。
拉米西斯的使命了---- 拉西的屎命。

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-20 15:52

回复王震宇的帖子

继续听王教授讲课。

您的全部实验结论就这些么？

继续讲吧，加油。

作者: 王震宇 时间: 2016-7-20 15:58

我历来的风格是，只讲结论，省略过程。

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-20 16:11

王震宇发表于 2016-7-20 15:58
我历来的风格是，只讲结论，省略过程。

结论在哪里呀结论在哪里
结论在那13楼的猜测里
这里有阴谋啊，这里有杜撰，
还有那拉西大帝的屎命
啦啦啦啦啦啦啦啦啦啦啦啦

还有那拉西大帝的屎命。

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结论的表述，至少应该是
老王把 xxx 病毒含量的大三阳血装入绿色采血管，
之后进行HBV-DNA定量分析（PCR-荧光探针法，上海科华），跟采用EDTA抗凝管的情况没区别。

更或者老王，也可以说
测量HBV-DNA，使用任何颜色的采血管都不会影响结果。

这是老王的结论吧。

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-20 16:14

连个清晰的结论都不敢直接说，

和稀泥一样 “王”顾左右而言他地说个猜测。

您这套路，是老中医么？

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-20 16:30

这个帖子的是提醒检验人员注意操作规范。不按规定操作使用采血管，会影响检测数据的可靠性和准确性。

老王站出来想说，用检测人员用错采血管不会影响检测结果？

老王是不是心里还想说，常温普通邮件邮寄HBV血清也不会影响HBV检测结果？

作者: figo789 时间: 2016-7-20 23:22

王教授在不同温度下都研究过。和管管有个球关系……

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-21 04:30

卡西的屎命是用嘴吹的么？

老王都没敢明确讲出来，“用任何颜色真空采血管不影响hbv各项检测”这种谬论。
粉丝跑出来擦屎腚。

有尿性的粉丝，自己查血的时候跟医院指定要最便宜的采血管或者拿绿色的采血管查hbvDNA

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-25 21:45

不晓得，隔壁老王哪里来的那么大自信就挑战临床血液检验的主流观点－－－－肝素会影响ＰＣＲ反应。
ＨＢＶ－ＤＮＡ测定是很容易受到操作环境影响的，尤其是ＰＣＲ测试时。
希望大家找正规靠谱医院测量ＨＢＶ各项指标，不要去常温下邮寄血清。
针对ＨＢＶ－ＤＮＡ的测量有如下限定
[attach]500862[/attach]

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-27 14:21

检测HBV指标，用全血、血清、还是血浆，用什么采取容器、什么抗凝剂，都是有严格要求的。
血液标本的保存状态，也直接影响着检查结果的准确性。

不按照世界各国的医学要求来做，拍脑门子、动小聪明、妄图走捷径，最后都是乙人自己吃亏。

虽然有许多老王粉丝实践着，违法普通邮件邮寄病毒血清。
但这绝不是合法规，且具有医疗信赖结果的。

老王在咨询版删我帖子，就是继续忽悠粉丝继续用普通灭菌试管常温邮寄病毒血清。

http://hbvhbv.info/forum/thread-1389171-1-1.html
异地血清运送须知 WHO首推强效低耐药抗病毒药物

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-27 15:40

验血要找正规医院，按照操作规范来采血。

正确规范的采血，使用合适的凝血剂。

不能走捷径、图便宜。

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-28 08:07

肝素抗凝会抑制PCR扩增效率。
在实际的PCR检测HBV-DNA中，错误使用肝素抗凝的绿头采血管影响结果准确性，容易产生假阴性。

国外的PCR检测HBV-DNA的试剂盒说明书中，明确写明不要采用肝素抗凝。

这是检测领域的常识。

隔壁老王教授，号称做了实验，发现如上的常识是错误的。

可以推断，如下可能。
1，老王没做实验，用嘴吹牛。
2，老王就做了2例实验，操作有问题。
3，老王用的肝素抗凝是假货。

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好比，我们的共识是砒霜半数致死量是14.6mg/kg(老鼠口服数据)。
老王不信砒霜是毒药，非说吃两次没毒死。
1，老王吹牛。
2，老王奇人神功，碰巧没死。
3，老王吃的白色面粉。

-----老王有脸删帖，却没脸承认错误。

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-28 21:10

传说老王做了N例试验。
然后宣布以现有资料，肝素不影响pcr测试HBV-DNA。

传说老李从天津步行120公里到北京。
然后宣布以现有的认知，大地是平的，不是圆的。

传说老赵看镜子说自己帅得惊动党中央。
然后宣布以现有的认知，老赵是神仙捏的，不是猿变的。

作者: smilingcloud 时间: 2016-7-29 09:23

问王震宇教授，乙肝病毒携带者应该怎么办。
王教授讲，要注意定期检查肝功等指标。

问老李，地球是圆的么。
老李讲，以双脚丈量的求实精神讲还不能证实。

问老赵，人是猿猴变的么。
老赵讲，以党性保证我家族谱上没有猿猴的名字。

问隔壁老王，肝素不是会抑制PCR增殖么。
隔壁老王讲，以科学的严肃性现有资料不能证实。

问隔壁老王，阿德肾毒性怎么处理。
隔壁老王讲，阿德低毒性且廉价。

问隔壁老王，拉米耐药了恩替容易耐药吧。
隔壁老王讲，拉米有神功、耐药不是事儿。

问隔壁老王，根号2加上根号2等于多少。
隔壁老王讲，科学家认为等于2啊。

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