如果基因治疗能够彻底根除乙肝，大家能够接受多少？

lifflefield

走遍四方 发表于 2011-9-26 11:51
楼主你所说的K因子会存在于以下链接中的物质吗
http://www.hbvhbv.com/forum/thread-1079308-1-1.html ...

完全不同。 我所说的因子，相当于干扰素的下游分子，攻击HBV，是蛋白质。 而你所描述的是药物。

lifflefield

StephenW 发表于 2011-9-26 12:59
从Wikipedia
Adeno-associated virus (AAV) is a small virus which infects humans and some other prima ...

我所说的，应该是我表示学术上最大的通俗性，所以势必有学术上的误差，因为这不是学术文章。改造过的rAAV病毒，已经在临床上应用于肿瘤病人，是病人，而不是动物，已经取得很大的成功，所以这个病毒给了promise，对基因治疗领域。
我前面所说的，都是改造过的rAAV病毒，并不是你理解的完整的rAAV病毒，我们破坏了rAAV病毒基因，让它携带k因子进入肝脏，而且rAAV病毒，被标记上了肝脏细胞的特异受体，所以 它一旦投入人体，只能感染肝脏细胞，释放k因子，只有一次侵染。这个基因改造病毒，是在体外培养好的，并不需要人体培养，当培养好的改造过的rAAV病毒，进入肝脏，只做一次侵染，同时我们构建四环素调控抗生素，只有注射四环素，rAAV病毒才开始生成k因子，一旦病人体内乙肝病毒被清除干净后，停止服用四环素，rAAV病毒就会停止生产K因子。
  你所查到的是天然rAAV病毒。
  HBV可以理解为急性肝炎病毒，如果人体没有免疫力和应急因子，比如，体外培养的细胞，最终都是被大量的乙肝繁殖引起死亡的，而在体内，恰恰是免疫力赋予了人体对抗乙肝病毒，但是代价是纤维化等等副作用， 这是我们对HBV的理解。

lifflefield

西安狂人 发表于 2011-9-26 10:46
如果 k因子 真的 影响人体的免疫 。如果 潜伏期 > 50年 很多人都无视。前提是必须根治 hbv dna ...

HBV的DNA来自HBV的RNA，而HBV的RNA来自细胞核里面的HBV的cccDNA。K的杀伤就是HBV RNA和cccDNA，所以最终结果 是HBV DNA，蛋白质，RNA都下降。
而普通药物，只是控制了RNA不去生产HBV DNA，它的量并不减少，只要停药，这些一直存在的RNA，又会大量生产HBV DNA。
所以，要控制HBV DNA，源头是HBV RNA，而HBV RNA的源头是躲在细胞核里面的少量HBV cccDNA。
  k正是杀死cccDNA和RNA的，所以对清除乙肝病毒有效。
  你们可以了解一下，为什么干扰素和细胞因子，可以减少HBV RNA，DNA和蛋白质，而药物只能减少HBV DNA，而不能减少HBV RNA和蛋白质。就是细胞因子，通过k来做对乙肝病毒的武器，而药物只是控制RNA不生成DNA

StephenW

lifflefield 发表于 2011-9-26 08:41
RNAi技术从1996年被发现开始就被赋予有可能治疗各种疾病。 包括一些研究室用RNAi技术证明了，可以拟制艾 ...

"而蛋白质K最大的特点，就是多层次的杀伤HBV，" -

K因子的问题:
1.蛋白质K是什么？，它尚不存在，它只是一个在你脑海中的概念.
2.一旦你定义了您的K蛋白的氨基酸(amino acids sequence)，你要证明
K蛋白是安全的.
3.然后，你必须设计一个K -蛋白质的基因(gene)，该基因产生K蛋白.
4. 然后你必须导你的基因入人体的细胞，而不引起癌症，基因治疗最大的问题之

"而且大量的RNA存在于细胞中，会严重影响细胞工作" - 我不同意。我相信有许多酶(enzymes)在细胞内，未使用的RNA和其他复杂的分子将这些酶降解(degraded)。
RNA稳定性?

lifflefield

南来飞鸿 发表于 2011-9-26 12:10
请楼主说明一下，如果顺利，你的这套方法，最快什么时候用于人体？你想我们怎么做？集体请求政府立项吗？ ...

  用于人体，当然需要很长的论证。而且我本人并不是主攻HBV方向的，在国外，研究HBV得不到太大的资助，我本职工作，是HIV，艾滋病毒，我们做艾滋病毒比较方便，一在于资金很好申请，二在于，临床展开相对容易，大多数的HIV患者，都期待基因治疗，这也是唯一的途径，所以FDA能够很快的给你一些许可，让你们加速临床实验。
  而HBV研究，想应用最新的基因治疗，第一点就是所谓，杀鸡要用牛刀的道理？基因治疗，多数都是所谓的大病，比如癌症和艾滋。 HBV有疫苗，有药物，能够很好的被控制，只是20.30年后，直接引起癌变。 所以，在临床上实验，需要很多反正论证的时间，包括国内医院的太多，和患者的理解等等。
   我是想来投石问路，想把所发现早些应用，只有国内有庞大的HBV临床样品了。我个人是近些年不太可能回国参与研究，只能依靠国内医院搞临床合作，我这里还要负责HIV的基因治疗工作。我目前只是提前看一下，临床上基因治疗在国内应用于HBV的可能性而已？

lifflefield

StephenW 发表于 2011-9-26 13:32
"而蛋白质K最大的特点，就是多层次的杀伤HBV，" -

K因子的问题:

K因子的问题:
1.蛋白质K是什么？，它尚不存在，它只是一个在你脑海中的概念.
2.一旦你定义了您的K蛋白的氨基酸(amino acids sequence)，你要证明
K蛋白是安全的.
3.然后，你必须设计一个K -蛋白质的基因(gene)，该基因产生K蛋白.
4. 然后你必须导你的基因入人体的细胞，而不引起癌症，基因治疗最大的问题之

"而且大量的RNA存在于细胞中，会严重影响细胞工作" - 我不同意。我相信有许多酶(enzymes)在细胞内，未使用的RNA和其他复杂的分子将这些酶降解(degraded)。
RNA稳定性?
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－1.我们只能说的更细了，k因子我目前还不能直接表述，它是蛋白质没错，它的原理我已经讲明了，就是识别HBV polymerase 和pregenome RNA的结合，而将自己binding的各种RNase带到HBV RNA上，引起前体RNA降解。 这类酶包括RNA Exosome和Xrn1，还有UPF1等下游事件。（这些我个人都在今年国际病毒学会发表过）
2.在K蛋白引入一个氨基酸突变，就让它的酶活性丧失，但是它的结构完整，依然能够把RNA酶类带到HBV RNA上，同时K还能够阻止HBV RNA翻译。
3.基因不需要设计，直接clone到病毒载体上就可以了。k的优点就是200氨基酸，完全在rAAV病毒最佳允许范围内。
4。癌症，这是我们一直所面对的问题，天然的有活性的k因子，如果不加调控，必然引起各个组织的癌变，这点在老鼠上表露无疑，这也是为什么 干扰素后期不管如何再用，k都不会继续存在的道理，而且 国际上有很多论证，k因为才是引起肝癌的因子，正是可能因为 HBV感染激活了，细胞因子，后增加了k因子的表达，k一面杀死了乙肝，但是另一面它的活性长期存在就造成肝癌。 所以，我们必须改造k因子。
5，我说过了，改造过的k因子对细胞没有危害，至今老鼠上没有看到任何表形的变化。 而且，我们同时用四环素控制了k因子的存在，只有服用四环素，改造后的k才能存在于肝脏。
     一句话：我们就是改造了，干扰素激活的一个下游分子，去杀死和清除乙肝病毒，也就是 我们找到了 干扰素的子弹，想扩大它的正效果，避免副效果。

lifflefield

StephenW 发表于 2011-9-26 13:32
"而蛋白质K最大的特点，就是多层次的杀伤HBV，" -

K因子的问题:

而且大量的RNA存在于细胞中，会严重影响细胞工作" - 我不同意。我相信有许多酶(enzymes)在细胞内，未使用的RNA和其他复杂的分子将这些酶降解(degraded)。
RNA稳定性？－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
你可能不知道siRNA，也就是寡聚RNA的危害。 就是细胞实验，过多的寡聚RNA都能引起细胞凋亡，而且RNA并不稳定。你我表达的意思在于：
你知否指的的是，在体外合成寡聚RNA，然后转入人体？ 还是，用rAAV病毒携带RNA进入呢？
后者的话，因为这种RNA生产，需要U6启动子，所以产生效果往往不如前者，但是前者虽然效果好，又不能高效导入体内。
RNA的不稳定性，是指它容易干扰细胞其他RNA，虽然RNA要求配对，但是在实际过程中，很多不是target的RNA还是被降解，这也就是为什么RNAi有时候不靠谱，要反复论证它知否真的专一降解某个RNA。
  我不排斥RNAi对于基因治疗，但是RNAi至今很难找到很成功的案例罢了，我指的是病人，而在HBV上 RNAi没有K因子的powerful能力，所以我忽略了RNAi的基因治疗。

StephenW

lifflefield 发表于 2011-9-26 13:22
我所说的，应该是我表示学术上最大的通俗性，所以势必有学术上的误差，因为这不是学术文章。改造过的rAAV ...

AAV genome, transcriptome and proteomeThe AAV genome is built of single-stranded deoxyribonucleic acid (ssDNA), either positive- or negative-sensed, which is about 4.7 kilobase long. The genome comprises inverted terminal repeats (ITRs) at both ends of the DNA strand, and two open reading frames (ORFs): rep and cap. The former is composed of four overlapping genes encoding Rep proteins required for the AAV life cycle, and the latter contains overlapping nucleotide sequences of capsid proteins: VP1, VP2 and VP3, which interact together to form a capsid of an icosahedral symmetry.[11]
[edit] ITR sequencesThe Inverted Terminal Repeat (ITR) sequences comprise 145 bases each. They were named so because of their symmetry, which was shown to be required for efficient multiplication of the AAV genome.[12] Another property of these sequences is their ability to form a hairpin, which contributes to so-called self-priming that allows primase-independent synthesis of the second DNA strand. The ITRs were also shown to be required for both integration of the AAV DNA into the host cell genome (19th chromosome in humans) and rescue from it,[13][14] as well as for efficient encapsidation of the AAV DNA combined with generation of a fully assembled, deoxyribonuclease-resistant AAV particles.[15]
With regard to gene therapy, ITRs seem to be the only sequences required in cis next to the therapeutic gene: structural (cap) and packaging (rep) genes can be delivered in trans. With this assumption many methods were established for efficient production of recombinant AAV (rAAV) vectors containing a reporter or therapeutic gene. However, it was also published that the ITRs are not the only elements required in cis for the effective replication and encapsidation. A few research groups have identified a sequence designated cis-acting Rep-dependent element (CARE) inside the coding sequence of the rep gene. CARE was shown to augment the replication and encapsidation when present in cis.[16][17][18][19]

"释放k因子，只有一次侵染。这个基因改造病毒，是在体外培养好的，并不需要人体培养，当培养好的改造过的rAAV病毒，进入肝脏，只做一次侵染，同时我们构建四环素调控抗生素，只有注射四环素，rAAV病毒才开始生成k因子，一旦病人体内乙肝病毒被清除干净后，停止服用四环素，rAAV病毒就会停止生产K因子。"
"只有一次侵染" - 这可能吗？
"释放k因子" - 这可能吗？
"四环素调控抗生素" (Regulation of Gene Expression by Tetracycline) -也很难.

"你所查到的是天然rAAV病毒。" - rAAV recombinant AAV  is a type of recombinant DNA:

重組DNA是一种人工合成的脱氧核糖核酸。它是把一般不同时出现的DNA序列组合到一起而产生的[1]。从遺傳工程的观点来看重組DNA是把相关的DNA添加到已有生物的基因組中，比如细菌的质粒中，其目的是为了改变或者添加特别是的特性，比如免疫[1]。重組DNA与遺傳重組不是一回事。它不是重组细胞内或者染色体上已经存在的基因组，而完全是通过外部工程达到的[1]。重组蛋白质是从重組DNA合成出来的蛋白质[2]。
重組DNA技术是1973年由斯坦利·诺曼·科恩和赫伯特·玻意尔设计的。1974年他们发表了他们的设计[3]。在这篇论文中他们描述了分离和放大基因或者DNA片断，然后精确地把它们插入其它细胞中，由此制造出转基因细菌。沃納·亞伯、丹尼爾·那森斯和漢彌爾頓·史密斯发明了限制酶才使得重組DNA技术可行，为此他们获得了1978年诺贝尔医学奖。

走遍四方

回复 lifflefield 的帖子

这个药物会不会包含你所指的这个蛋白质呢？

lifflefield

StephenW 发表于 2011-9-26 14:03
AAV genome, transcriptome and proteomeThe AAV genome is built of single-stranded deoxyribonucleic  ...

"只有一次侵染" - 这可能吗？
"释放k因子" - 这可能吗？
"四环素调控抗生素" (Regulation of Gene Expression by Tetracycline) -也很难.--------------------------------------------
只有一次侵染，对的。
释放k，这是没有问题的。
四环素调控，这是最基本的tet on系统，非常简单，学过生物学的都会知道的。
我聚四环素只是一个例子，它很基本，大家都知道，其实我们未必用这么原始的调控方式了。
四环素调控转录起始分 Tet on和off两个系统，我们可以用on，这个系统，也就是存在四环素，转录才发生，k才会存在


rAAV病毒和其他病毒用法，你可以参考正经网站，不要wiki了。
www.genetherapynet.com/what-is-gene-therapy.html