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本帖最后由 风雨不动 于 2012-4-14 15:22 编辑
[摘要』目的
8512.6 '2 文献标识码A 文章编号1000484X( 2006)08 -0768-04
:通过测定慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞CD8' CD38'的表达及门冬氨酸氨基转移酶(AST )、总胆
红素(TBIL)、凝血酶原时间(PT),旨在为治疗慢性乙型肝炎提供有用的参考指标。方法:流式细胞术检测38例慢性乙型肝
炎、14例肝硬化患者外周血淋巴细胞CD8'C D38’细胞的百分率;同时测定AST,TB IL和PT.结果1)慢性乙型肝炎组
CD8'C D38',C D38+细胞均明显高于正常组(P<0.01尹<0.01),肝硬化组CD8'CD38',CD38'细胞均明显高于正常组(P<
0.05,P<0.05)。肝硬化组CD8'CD38',CD8'细胞均明显低于慢性乙型肝炎组(P<0.05,P<0.05)0 (2)慢性乙型肝炎轻、
中、重各组之间比较,中度组CD8'CD38’高于轻度组(P<0.05),重度组CD8'C D38',C D8',C D38+均高于轻度组(P<0.05,
P<0.05,P<0.05);重度组CD38'高于中度组(P<0.05);肝硬化组CD8' CD38'均明显低于轻、中、重各组(P<0.05, P<
0.01, P<0.01),肝硬化组CD8'低于重度组(P<0.01), (3)慢性乙型肝炎患者AST,TBIL,PT不正常组CD8'CD38'均高于
AST,TBIL,PT正常组。结论:慢性乙型肝炎患者CD8'CD 38’细胞明显升高,表明慢性乙型肝炎患者细胞免疫处于异常激活
状态,并与肝功能损伤有一定的相关性。慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞CD8' CD38+的测定,对病情分析和诊断有一定
的临床参考价值。
〔关键词〕慢性乙型肝炎;CD8'CD38';肝硬化
The detection of CD8+CD38+expression of peripheral blood lymphocyte in patients
with chronic hepatitis B
QIUL ian-Na,ZHUY ong-Ze,Z HOUY ong-Lie,L UOS i-Yuan,LIH ong-Bo.C entralL aboratoryM edical,Zh ejiang
ProvincialP eople'sH ospital,Ha ngzhou3 10014,Ch ina
[A bst rac t) O场ecitve,Tos upplya er feerncem easuer,CD 8’CD38’experssin,AS T,TB IL,PT w eer examinedin p atientsw ith
chronich epaittisB .M ethods;CD 8'C D38'e xperssiono fp eripheralb loodl ymphocytein 3 8p atientsw ithc hromich epatitisB a nd1 4
patients with liver cirrhosis were detected with flow cytometry. AST,TBIL,PT were also measured at the same time with instruments.
Results;(1 )CD 8'C D38'e xpressionin p aitentsw ithc horonich epaititsB a ndil verci rrcosisel evateds ignificantlyc omparedw ithth ose
in normal controls. But CD8 ` CD38' expression in patients with liver cirrhosis was lower significantly than those with chronic hepatitis
B.(2 )CD 8'C D38'e xperssioni nm oderatec hronich epaititsB w eer higherth ant hosein m ildc hronich epatiitsB .C D8'C D38+,
CD8’,CD38’expression in severe chronic hepatitis B were higher than those in mild chronic hepatitis B. CD38‘expression in severe
chronich epaititsB w ash igherth anth osein m oderatec hronich epaititsB .C D8'C D38',C D 8+,CD38+expressionin il verci rrhosis
waslo werth anth osein m ild,mo derate,se veerc hronich epaititsB .C D8'e xperssioni nil verc irrhosisw aslo werth anth osein s eveer
chronich epaititsB .(3 )C D8'C D38'e xperssionin p aitentsu nderA ST,TBIL,PTa bnormalco ndiitonw eerh igherth anth osein p aitents
underA ST,TBILP T,nor malco ndiiton.Co nclusion;Th ein cerasingof C D8+CD38'ex pressionof pe ripheralbl oodly mphocytein p aitentsw
ithc hronich epsititsB ,re flectth ef actth atc eli mmunolgyw asa bnormalya citvated.Th eer wasa er markablec orrelaitono n
CD8'CD 38'a ndA ST,TBIL,PT.T ote stex perssiono fC D8'C D38'o fp eirpheralbl oodly mphocytein c hronich epaittisB h asv ery
important clinical reference value on patient's condition development and diagnosis.
[K ey wo rds] Chronich epaititsB ;C D8'CD 38';L iverci rhosis
乙型 肝 炎 病毒(HBV)是非细胞毒性病毒,其所
致的肝细胞的损坏主要是机体对HBV特异性抗原
的免疫反应引起的[r1。国内外研究表明,CD38在
①温州医学院,温州325000
②台州医学院,临海318000
③杭州市第六人民医院,杭州310014
作者简介:邱莲女(1972年一).女,硕士,主要从事临床免疫学研究。
CD8淋巴细胞上的表达代表了机体的免疫细胞的激
活状态,可作为HIV感染者/艾滋病(AIDS)疾病进
展和治疗效果的指标[121。而国内外关于HBV感染
者外周血淋巴细胞CD8' CD38'细胞的表达又少有
这方面的报道,为此,本实验观察了慢性乙型肝炎患
者外周血淋巴细胞CD8' CD38十表达的变化,并初
步讨论了这些变化的临床意义。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 研究对象经临床确诊的慢性乙型肝炎患
者52例,男30例,女22例,年龄在30-60岁之间,
均为未接受过抗病毒治疗,于2004年11一12月份
首次就诊于杭州市传染病医院(市第六医院),排除
其他肝炎和影响机体免疫状态的疾病,全部符合
1995年“第5次中华全国传染病和寄生虫病学术会
议”(北京)修订的诊断标准。参考2001年“中西医
结合肝病杂志”修订的分类标准将这些慢性不同类
型乙肝病例分为以下几组:慢性乙型肝炎轻度组13
例,中度组17例,重度组8例,乙肝后肝硬化组14
例。设正常对照组10例,均为11月份来我院接受
健康体检者,所有体检指标(包括肝功能)均正常。
“乙肝两对半”全阴的成年人。
1.1.2 试剂与仪器鼠抗人CD8-PE藻红蛋白),
CD38-FITC荧光单克隆抗体,阴性对照鼠抗人IgGIPE,
IgGI-F ITC荧光单克隆抗体。该试剂购自法国
Immunotech公司。流式细胞仪EPICS-XL型及QPREP
为美国Coulter公司。
1.2 方法
1.2.1 标本采集患者和正常对照组成员均于清
晨空腹状态下抽取外周静脉血,EDTA-K2抗凝,慢
性乙型肝炎患者于人院后3天内采血,均未使用过
对免疫系统有影响的药物。
1.2. 2 FCM检测方法用流式细胞仪对所有标本
分析,并作阴性对照管。测定管加10闪CD8-PE及
10闪CD38-FITC标记的鼠抗人单克隆抗体,并加
10川IgG1-PE及10闪IgGl-FITC做同型对照;加
100闪EDTA-K2抗凝血混匀,室温避光放置15分
钟,Q-Prep溶血固定处理,然后流式细胞仪检测。
测定前用Flow-Check液进行光路流路标定,将CV
值调整在2%以内,细胞根据前向散射光、侧向散射
光的不同分为淋巴、单核、中性粒细胞三群,以淋巴
细胞设门调阴性对照管,调整非特异性结合细胞在
1%左右。每测定管收集10000个以上细胞记录
CD8+CD38+,CD8+,CD38+的表达,结果以百分率
(%)表示。
1.2.3 统计处理采用SPSS统计软件,检测结果
以xt:表示,先作方差齐性检验,用独立样本t检
验,P值表示各组间的相关性。
2 结果
2.1 慢性乙型肝炎患者淋巴细胞CD8十CD38+的
表达见表1。结果显示,慢性乙型肝炎患者CD8+
CD38十、CD38+明显高于正常组(P<0.01, P<
0.01),肝硬化患者淋巴细胞CD8 + CD38十、CD38 +
细胞明显高于正常组(P< 0.05 ,P< 0.05 )。肝硬化
组CD8+CD38+,CD8+细胞明显低于慢性乙型肝炎
组(P< 0.05 ,P<0.05)。
2.2 慢性乙型肝炎患者不同组之间CD8+CD38+
的比较见表2。结果显示,慢性乙型肝炎患者轻、
中、重不同病情之间比较,中度组CD8+ CD 38+高于
轻度组(P< 0 .05 ),重度组CD8+ C D38+ , C D8+ ,
CD38+均高于轻度组(P <0.05,P <0.05,P <
0.05);重度组CD38+高子中度组(P<0.05);肝硬
化组CD8 + CD38+均明显低于轻、中、重各组(P<
0.01,P<0.01,P<0.05),肝硬化组CD8+,CD38+
低于重度组(P<0.01)。
2.3 慢性乙型肝炎患者AST指标与CD8 + CD38 +
的关系52例慢性乙型肝炎患者按AST结果分组,
将AST < 50 U/L为AST正常组,AST > 50 U/L为
AST不正常组,见表3。结果表明,AST不正常组
CD8十CD38+明显高于AST正常组(P<0.05)。
2.4 .慢性乙型肝炎患者TBIL指标与CD8' CD38十
的关系52例慢性乙型肝炎患者按TBIL结果分
组,将TBIL < 25 pmol/L为TBIL正常组,TBIL > 25
wmoVL为TBIL不正常组,见表4。结果表明,TBIL
不正常组CD8 + CD38' ,CD8十明显高于TBIL正常组
(P< 0.05 ,P< 0.05 )。
2.5 慢性乙型肝炎患者PT指标与CD8 + CD38+的
关系52例慢性乙型肝炎患者按PT结果分组,将
PT<12 s为PT正常组,PT>12s为PT不正常组,
见表5。结果表明,PT不正常组CD8 + CD38+明显
高于PT正常组(P<0.01)。
表1
Tab. 1
慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞CM + CD38 +的
表达比较(%,xts)
CD8+CD38 + expression of peripheral blood lymphocytes
in CHB patients and liver cirrhosis【%,
X S)
Groups
Control
n CD8+CD38+ CD8+ CD38+
19 4. 48 t 2.53 25.12 t 8.50 32.49 17.71
Chronic B
hepatitis
U ver
cirrhosis
38 9.96 t 4.32 2) 27.96 t 6 .83 41.54 t 1 2.6 12)
14 6.92t 1 .79')3) 21.241 6.733) 38.84 t 9.79')
Note;Co mpaerw ithn ormalco ntorl,I) P<0.05,2)P <0.01;Compaer
wit hc hor nich epatitisB ,3)P <0.05.
慢性乙型肝炎患者不同组外周血淋巴细胞CD8'
CD38'组的比较《%,x ts)
CD 8'C D38'e xpressiono fp eripheralb loodl ymph
ocytesi nd iffeernts tageso fC HB paitents【%,
l0 2
7 ,曰
7 2 胜
xts)
CD8* C D38" C D8+ CD38'
Mi ld 1 3
Moderate 17
8. 07 t 1. 89 23. 97 t 6. 10 38. 01 t 10. 94
10.50 t 5.22 r)
11.92 t 4.32 ')
27. 23 t 6.88 39. 22 t 12.84
Severe 8 31.36t5.61') 52.2119.601)3)
U ve r
14 丘 见 1 1.7 9" " -" 21 .2 4 t 6 .730' 38.8419.790)
cir rhosis
Note;Co mparew ithm ildc hronich epatitis,1) P<0.05,2)P <0.01;
Com p are w ithm oderatec hornich epatitis,3 )P<0.05,4)P <
0.0 1 ;Co mparew iths eveer chornich epatitis,5)P < 0.05 ,6)P <
0.01.
表3
1'ab. 3
慢性乙型肝炎患者AST正常组与不正常组之间
CM ' CD38 `比较(%,xts)
Co mparisono fC D8'C D38'in p aitentsw i山chr-o
nic
种al
hepatitis B under AST normal and AST abnorcon
山tion(%,xts)
CD8.CD38+ CD8+ CD38+
AST normal
人ST abnormal
7. 6 1t 1 .9 8 27.4 8t 7 .3 9 42.1 2 t2 3.7 5
10.10:t4.791) 26.10t 7 .53 43.46 t 1 1.33
l8 34
Note:I) P < 0 .05 .
表4 慢性乙型肝炎患者TBIL正常组与不正常组之间
CD 8' CD 3 8' 比较(%,xts)
Tab.4 Comparisono fC D8` C D38'in p atientsw ithc hronic
h ep ati tis B un derT BIL normala ndT BII.曲·
nor m al c o nd itio n %,x1 s)
n CD8+CD38+ CD8+ CD38+
8. 151 1.94 26.4 4 t4 .87 41.5 6t 8 .21
10.2915.49') 22.1916.271t) 42.8919.31
32 20
TB IL normal
TBIL abnormal
Note;1)P<0.05.
表5
飞恤h 5
慢性乙型肝炎患者PT正常组与不正常组之间CD8今
M38' 比较(%,xts)
Co mparisono fC D8'C D38'恤patientsw i山chronic
hepatitis B under PT
condition%,x 1S)
normal and PT abnormal
n CD8' CD38+ CD8+ CD38
盯 nor目
P】,曲nor目
7. 21* 2.06
10. 15 14.29t)
26.95 15.18 40.94 15.26
25. 53 s 5. 32 45. 04 t 9. 69
0沙内﹂
,二几﹂
Note:I) P < 0 .0 1.
3 讨论
人 的 CD 38分子是分子量为4500()的单链跨膜
糖蛋白,胞外决定簇为功能酶,是一种多功能酶,在
细胞的信号转导中起作用,其细胞外功能区上点突
变可抑制信号传导。CD38分布较独特,主要由一些
幼稚细胞和早期的造血细胞表达;在细胞成熟过程
中消失。当成熟细胞活化后又重新出现[3,41。在成
人,CD38蛋白主要表达于大多数NK细胞、T细胞、
B细胞和单核/吞噬细胞。CD38的表达受到生理和
药物等的调节,如细胞因子、凝集素等,主要作为上
调作用,还未发现有下调的因素。本实验结果也表
明,慢性乙型肝炎患者,肝硬化组淋巴细胞CD38细
胞明显高于正常组。
CD 38 分 子通过对激活信号的转导,促进T细
胞的激活,因而CD8十CD38十可作为细胞活化标
志[5l。本实验结果显示,慢性乙型肝炎,肝硬化组
CD8 `CD38+组明显高于正常组,说明CD8' CD38'
T淋巴细胞检测能良好反应慢性乙型肝炎患者的免
疫细胞异常激活状态。这可能由于病毒复制与细胞
激活相互促进,HBV感染过程中,病毒持续高水平
复制不断产生抗原,刺激CD8细胞,使之处于高水
平激活状态。
HB V感 染 后,一部分患者病毒在体内长期存
在。虽然HBV是一种非细胞毒性病毒,但由于
HBV在复制过程中,其病毒抗原往往表达于肝细胞
膜上或细胞浆内,当机体免疫细胞作用于这些抗原
时引起肝细胞的损坏[(2l。在乙型肝炎病毒的清除
和发病机制中,细胞免疫起重要作用,包括CD8+细
胞毒性淋巴细胞和CD4+辅助诱导细胞,非特异性
单核一巨噬细胞和NK细胞。其中CD8+细胞毒性淋
巴细胞被认为是免疫应答的主要效应细胞,在病毒
感染尤其是持续性病毒感染的清除中起了重要作
用。有文献【6]报道,HBV慢性感染者CTL反应很
弱,当慢性感染病情加重,甚至发展为慢性重症时,
CTL又明显增强。本实验结果表明,慢性乙型肝炎
重度组CD8+高于轻度组,肝硬化组CD8+低于轻度
组,而且慢性乙型肝炎组、肝硬化组CD8+细胞与正
常组免疫明显变化,但肝硬化组CD8+细胞明显低
于慢性乙型肝炎组,表明机体感染HBV后的细胞免
疫反应与病情密切相关,基本与文献报道一致。乙
肝病毒在肝细胞内繁殖和复制造成肝细胞损伤坏
死,致使肝细胞不断再生、修复、纤维化,进而发展成
肝硬化,因此可以说,乙肝患者不同程度的免疫耐受
(下 转 第 77 4 页 )
·774·
CD 4+ CD 25+ T 细胞具有逃避自身免疫的免疫
调节功能,可以调节CD4+和CD8+效应性T细胞的
活化,在免疫介导的糖尿病患者此类细胞是升高还
是降低各家报导不一。Camara等[’]报道在免疫介
导的糖尿病患者此类细胞降低。而Milicevi。等[(21
研究了43例早期TIDM 患者T细胞亚群的变化发
现CD4+ C D25+ T 细胞在TIDM 患者中较健康对照
组升高(7.0土5.4对2.0土2.0尹<0.05)。本研究
中我们发现LADA患者CD25+T细胞、CD4’CD25+ T
细胞、CD4+ C D25+ C D62L+ T 细胞均明显高于健康对
照组(P<0.05),更明显高于TIDM 患者(P<0.01),
而TIDM 患者略低于健康对照组(P>0.05)。此结
果提示LADA患者的胰岛p细胞功能衰竭速度较
TID M缓慢可能与CD4+ C D25+ T 细胞的免疫保护
有关未pLADA患者的胰岛p细胞自身抗原一方面
激活效应性CD4+T细胞损伤胰岛R细胞,另一方
面激活CD4+CD25+T免疫抑制细胞降低效应性T
细胞对胰岛R细胞的损伤。
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[收稿2005-07-30 二次修回2006-01-101
(编 辑 徐 杰 )
(上接第770页)
所导致的病毒清除不完全是造成肝硬化的最大因素。
观察 T 淋 巴细胞表面的分子表达,能了解机体
的免疫状态,有利于判断病情和疗效[7l。本次实验
结果中,慢性乙型肝炎患者轻、中、重各组之间比较,
中度组、重度组CD8 + CD38+均高于轻度组,肝硬化
组CD8 + CD38+均明显低于轻、中、重各组。而且,
慢性乙型肝炎患者AST,PT,TBIL不正常组CD8+
CD38+均高于AST,PT,TBIL正常组,说明慢性乙型
肝炎患者CD8 + CD38+细胞明显升高,并与肝功能
损伤有一定的相关性,对疾病诊断有一定的辅助作
用。
可见 , 淋 巴细胞CD8+CD38+检测能很好地反
映慢性乙型肝炎患者免疫细胞异常激活状态,并与
肝功能损伤有一定的相关性,因此慢性乙型肝炎患
者淋巴细胞CD8 + CD38+的测定,对病情分析和诊
断有重要的临床参考价值。
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[收稿2005-08-29修回2005-12-09
(编 辑 许 四 平 )
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