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研究证实, HBV cccDNA是最先能检测到的复制中间体.HBV特异的RNA,单链DNA(ssDNA)均晚于cccDNA形成,因此认为cccDNA是病毒前基因组 RNA转录的模板.52溴脱氧尿嘧啶标记分析显示rcDNA在胞浆经逆转录合成,是核内病毒cccDNA扩增池的主要前体.鸭肝细胞体外感染鸭乙型肝炎病毒(DHBV)证实,在病毒产生前的感染早期,核内就能检测到50至100个拷贝cccDNA分子,说明核内cccDNA扩增池的形成不需要多轮感染.在感染细胞内,病毒的持续存在也可能依赖于转录活性cccDNA分子池的大小.Tuttleman等研究发现DHBV接种鸭肝细胞原代培养后8~12 d ,细胞核内DHBV DNA分子增加超过100倍,胞内rcDNA,ssDNA水平则仅增加2~4倍.这种早期cccDNA分子扩增发生时,在培养细胞的上清液中尚不能检测到完整的感染病毒颗粒. [乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)] 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA) 在实验的基础上,专家提出在感染的早期阶段细胞核内cccDNA合成的途径为:病毒进入细胞后,在胞浆内脱壳,DNA的正链在DNA聚合酶作用下形成全长的 rcDNA.rcDNA被转运至核内构象发生改变形成cccDNA ,作为HBV部分基因的mRNA和前基因组RNA的合成模板.前基因组RNA在核内转录后转运到胞浆,经组装进入复合体内,复合体由病毒核心蛋白以及P蛋白组成.以前基因组RNA为模板通过逆转录合成HBVDNA负链.前基因组降解后,剩下负链DNA作为正链DNA的合成模板.新合成的双链中的正链大多不完整.包含完整或部分正链的核衣壳核心包装进病毒包膜运出细胞成为成熟的病毒体,但也可在胞浆内脱壳形成rcDNA被转运至核内以补充cccDNA的量. 一个感染病毒体在感染肝细胞后只产生一个cccDNA分子,但在处于稳定感染的每个肝脏细胞内大约有50~100个cccDNA拷贝,其原因就是 rcDNA又在胞内转换成cccDNA. |
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