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肝病患者外周血CD28+T细胞亚群变化



张美稀  章晓鹰  金树根  董惠芳  陈建杰  王灵台



上海中医药大学附属曙光医院  上海市  200021

项目负责人  张美稀(进修生，325401，浙江省平阳县中医院)

收稿日期  2000-06-22  接收日期  2000-06-29  



Subject headings  flow cytometry; liver diseases; T-lymphocyte subsets; antigens, CD4; antigens, CD8; peripheral blood

mononuclear cells?



主题词  流式细胞术；肝疾病；T淋巴细胞亚群；抗原，CD4；抗原，CD8；外周血单个核细胞??



张美稀, 章晓鹰, 金树根, 董惠芳, 陈建杰, 王灵台. 肝病患者外周血CD28+T细胞亚群变化. 世界华人消化杂志，2000；8(12)：1432-1433??   



T细胞的特异性激活需要特异性T细胞受体（TCR）/CD3复合物信号，同时还需要共刺激信号. 现已证实，在CD40-CD40-L和B7-CD28/CTLA-4（CD152）二条共刺激途径中， CD28, CTLA-4和ICOS与其配体B7家族分子(B7.1/CD80和B7.2/CD86)结合后所产生的共刺激信号(costimulatory signal)在T细胞活化过程中起重要作用［1］. 迄今，国内外开展有关肝移植排异［2］、原发性胆汁性肝硬变和原发性硬化性胆管炎等自身免疫疾病［3］、血吸虫等寄生虫感染［4］、HCV病毒感染［5,6］、肿瘤［7］、重症肝炎［8］中肝损伤T细胞的特异性激活共刺激研究，但乙肝病毒感染所致的肝损伤T细胞的特异性激活共刺激研究不多［9］. 鉴此，我们采用流式细胞分析仪，检测130例肝病患者外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell, PBMC）中CD4+, CD8+和CD28+ T细胞变化，兹报告如下.?



1  材料和方法?



1.1  材料  本院肝科门诊和住院130例，男104例，女26例，年龄23岁～78岁，平均(37±20)岁. 其中急性肝炎31例，慢性乙型肝炎活动期37例, 慢性乙型肝炎静止/缓解期34例, 肝炎后肝硬变活动期17例, 恶性肿瘤11例（原发性肝癌5例、胃肠和乳房肿瘤肝转移6例；对照组16例，男12例，女4例，年龄21岁～45岁，平均（32.6±15.4）岁，系来院门诊体检并排除心、肝、肾等重大疾患的正常健康人.?



1.2  方法  ①常规肝科检测项目：包括血常规、肝功能； ②血液外周血单个核细胞中T淋巴细胞CDs的流式细胞仪检测：包括CD4（FITC）, CD8（FITC）, CD28（PE）单染和CD4（FITC）与CD28（PE）, CD8（FITC）与CD28（PE）双染测定，采用美国COULTER公司的专供试剂和流式细胞仪（EPICS-XL型），由专人进行外周血单个核细胞中T细胞CDs检测.?



    统计学处理  采用微机全部输入SPSS数据库中，计量资料齐性检验后进行方差分析和两两比较.??



2  结果?



2.1  肝病患者外周血CD4+, CD8+和CD28+T细胞变化 见表1.?



表1  不同肝病患者外周血CD4+, CD8+和CD28+T细胞变化?  



组别与项目 CD4+（%） CD4+（*103·L） CD8+（%） CD8+（*103·L） CD4+/CD8+

I急性肝炎 41.0±4.41 691±143 32.2±7.99a 575±136 1.36±0.41a

II活动期慢性肝炎  37.7±9.81 688±241 31.9±8.49a    589±370ac 1.32±0.63b

III静止期慢性肝炎  38.9±7.08  664±146 30.9±6.61a    842±110dbe 1.33±0.40b

IV活动期肝硬变 41.9±9.79 547±366 26.9±7.02 350±168    1.75±0.64

V恶性肿瘤 43.1±7.79 407±194 26.0±9.64 173±159    2.46±1.05

VI对照组 42.2±9.27 681±241 27.8±4.06a 430±293    1.57±0.54b



aP＜0.05vsⅤ组；bP＜0.01vsⅤ组；cP＜0.05vsⅣ组；dP＜0.01vsⅣ组；?eP＜0.05vsⅥ组.??



2.2  不同肝病患者外周血CD28+T细胞变化  见表2.??



表2  不同肝病患者外周血CD28+T细胞变化?  



组别与项目 CD28+（%） CD28+（*103·L）

I急性肝炎 58.9±7.29  988±221

II活动期慢性肝炎  55.4±11.35 1029±345

III静止期慢性肝炎  58.3±10.39 1123±135

IV活动期肝硬变 52.6±16.91 675±487

V恶性肿瘤  54.9±6.87 538±132

VI对照组  61.3±12.24 1063±837



2.3  不同肝病患者外周血CD4+ CD28+, CD4+CD28-T细胞和CD4+ CD28+/CD4+CD28-比例变化  见表3.??



表3  不同肝病患者外周血CD4+ CD28+, CD4+CD28-T细胞和CD4+ CD28+/CD4+CD28-比例变化?



组别与项目 CD4+ CD28+（%）  CD4+CD28-（%） CD4+CD28+/CD4+CD28-

Ⅰ急性肝炎 24.6±15.3a 17.5±13.7a 3.18±3.13

Ⅱ活动期慢性肝炎  30.8±11.7  9.9±4.37  3.60±2.07

Ⅵ对照组 37.4±5.14  5.5±4.17 18.9±17.3



aP＜0.05 vs Ⅵ组.??



2.4  不同肝病患者外周血CD8+ CD28+, CD8+CD28-T细胞和CD8+ CD28+/CD8+CD28- 比例变化  参见表4.??



表4  不同肝病患者外周血CD8+ CD28+, CD8+CD28-T细胞和CD8+ CD28+/CD8+CD28-比例变化?



组别与项目 CD8+ CD28+（%）  CD8+CD28-（%） CD8+CD28+/CD8+CD28-

I急性肝炎 10.9±2.74b  21.1±8.84b  0.613±0.311b

II活动期慢性肝炎  10.7±4.00b 21.8±8.56b 0.585±0.317b

III静止期慢性肝炎  12.4±4.40b 17.8±6.84b    0.842±0.495b

IV活动期肝硬变 12.0±7.63ab 17.6±9.49b  0.990±0.993b

V恶性肿瘤 10.1±2.76ab 17.4±5.03b 0.631±0.287b

VI对照组 21.0±2.91  6.81±2.59  3.535±1.096



aP＜0.05, bP＜0.01vsⅥ组.??



2.5  急性肝炎治疗前后患者外周血CD4+, CD8+, CD28+, CD8+CD28+T细胞变化  参见表5.??



表5  急性肝炎治疗?2wk?前后患者外周血CD4+, CD8+, CD28+, CD8+CD28+T细胞变化（n=6,?x±s）?



T淋巴细胞亚群 治疗前（%） 治疗后（%）

CD4+ 41.9±4.5 43.6±6.3

CD8+  30.4±5.3 31.8±5.4

CD28+ 59.2±5.5 60.0±10.5

CD8+CD28+  10.1±2.7 12.5±3.5



3  讨论



本研究表明，与有关文献报道相同的是与正常人相比，急性肝炎、活动期和静止期慢性肝炎和活动性肝硬变以及恶性肿瘤PBMC中CD4+, CD8+和CD4+/CD8+T细胞数目没有发生明显变化［9］，但稍有不同的有，①活动性肝硬变、恶性肿瘤CD4+稍上升和CD8+T细胞下降相比，急性肝炎和活动期慢性肝炎PBMC的CD4+T细胞稍下降和CD8+T细胞有所上升（与前二者CD8+相比较?P＜0.05）?,且静止期慢性肝炎PBMC中CD8+T细胞亦有所上升（与活动性肝硬变相比?P=0.069?,而与恶性肿瘤相比?P＜0.05）?；②与急性肝炎、活动期和静止期慢性肝炎相比，活动性肝硬变和恶性肿瘤PBMC的T细胞CD4+/CD8+比例明显上升（后者与前四者相比较?P＜0.05）?；③活动性肝硬变PBMC中CD28+T细胞下降（与正常人和静止期慢性肝炎相比?P＜0.05）?；④与正常人相比，急性肝炎、活动期和静止期慢性肝炎和活动性肝硬变以及恶性肿瘤CD8+CD28+和CD8+CD28-T细胞分别均明显下降和上升，致CD8+CD28+/CD8+CD28+明显下降；⑤急性肝炎治疗后上述指标有改善趋势.?

       肝硬变和恶性肿瘤CD4+ T细胞稍升、CD8+ T细胞稍降及CD4+/CD8+上升的原因，可能是由于肝硬变和恶性肿瘤CD4+T细胞中Th1（IL-2, IFN）亚群下调、Th2（IL-4, IL-5, IL-6）和Th3（TGFβ1）亚群上调及CD8+T细胞中CD8+CD28+T细胞下调、CD8+CD28-T细胞上调所致. 前有研究认为，活动性肝炎PBMC中CD28+和CD8+CD28+T细胞的下降可能是由于CD28+和CD8+CD28+T细胞的激活致其自身FAS表达亢进而发生凋亡耗竭或参与肝损伤而CD8+CD28+T细胞由外周血循环向肝组织内迁移所致［9］. 我们认为，活动性肝病的CD4+/CD8+T细胞上升，是由于CD8+T细胞由外周血循环向肝组织内迁移，参与肝损伤所致［8］; 而恶性肿瘤尤非肝脏恶性肿瘤时CD4+/CD8+上升，更可能与肿瘤细胞表达FAS-L促进活化的、FAS+的淋巴细胞凋亡所致［7］.?

    树突（状）细胞（Dendritic cell）作为专职抗原提呈细胞(Professional Antigen-presenting cells)，其共刺激功能最强［10］，而非专职抗原提呈细胞中胆管上皮细胞和肝窦内皮细胞有一定的T淋巴细胞激活共剌激作用，肝实质细胞（肝细胞）的作用较差［11,12］. 因此，我们拟结合CD28+T细胞改变，研究肝病患者PBMC中树突细胞B7家族分子如B7.1(CD80)和B7.2(CD86)和T细胞的抑制性共刺激因子CTLA-4（CD152）

改变.





4  参考文献?



1  Yang Y, Wilson JM. CD40 ligand-dependent T cell activation: requirement of B7-CD28 signaling through CD40. ?

     Science,? 1996;273:1862-1864

2  Garcia-Alonso AM, Minguela A, Muro M, Ontanon J, Torio A, Marin L, Lopez-Segura P, Miras M, Alvarez-Lopez MR.  CD28 expression

    on peripheral blood T lymphocytes after orthotopic liver transplant: upregulation in acute rejection.  ?

  Hum Immunol?, 1997;53:64-72?

3  Kaji K, Tsuneyama K,   Nakanuma Y, Harada K, Sasaki M, Kaneko S, Kobayashi K. B7-2 positive cells around interlobular bile ducts

    in primary biliary cirrhosis and chronic hepatitis C. ?J Gastroenterol Hepatol?, 1997;12:507-512?

4  Martins-Filho OA, Cunha-Melo JR, Lambertucci JR, Silveira AM, Colley DG, Gazzinelli G, Correa-Oliveira R. Clinical forms of

    human Schistosoma mansoni infection are associated with differential activation of T-cell subsets and costimulatory molecules. ?

    Dig Dis Sci,?  1999;44:570-577?

5  Corado JA, Toro FI, Baroja ML, Bianco NE, Machado IV . CD3- and CD28-activating pathways in HCV infection.  ?

    Viral Immunol?, 1994;7:37-40?

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    chronic hepatitis C: relationship with biological and histological disease activities. ?Microbios?, 1999;97:29-38?

7  Tatsumi T, Takehara T, Katayama K, Mochizuki K, Yamamoto M, Kanto T, Sasaki Y, Kasahara A, Hayashi N. Expression of

     costimulatory molecules B7-1 (CD80) and B7-2 (CD86) on human hepatocellular carcinoma. ?Hepatology,?

    1997;25:1108-1114?

8  Leifeld L, Trautwein C, Dumoulin FL, Manns MP, Sauerbruch T, Spengler U. Enhanced expression of CD80 (B7-1), CD86 (B7-2),

    and CD40 and their ligands CD28 and CD154 in fulminant hepatic failure.  ?Am J Pathol?,  1999;154:1711-1720?

9  邓安梅, 仲人前, 陈孙孝, 张玲珍, 施笑梅, 孔宪涛.   肝病患者外周血单个核细胞中T淋巴细胞表面标志物分析. 中华肝脏病杂志,

    1999;7:149-150?

10 Inaba K, Witmer-Pack M, Inaba M, Hathcock KS, Sakuta H, Azuma M, Yagita H, Okumura K, Linsley PS, Ikehara S. The

     tissue distribution of the B7-2 costimulator in mice: abundant expression on dendritic cells ?in situ? and during maturation

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11 Leon MP, Bassendine MF, Wilson JL, Ali S, Thick M, Kirby JA. Immunogenicity of biliary epithelium: investigation of antigen

     presentation to CD4+ T cells.  ?Hepatology?,  1996;24:561-567?

12 Bertolino P, Trescol-Biemont MC, Rabourdin-Combe C. Hepatocytes induce functional activation of naive ?CD8+? T lymphocytes

     but fail to promote survival.  ?Eur J Immunol,? 1998;28:221-236

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