(转)几种新型佐剂的研究近况及存在问题

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佐剂（Adjuvant）又称免疫调节剂（Immunomodulator）或免疫增强剂（Immunomodulator），是指先于抗原或与抗原混合或同时注入动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答，发挥辅助作用的一类物质。随着亚单位疫苗、重组疫苗、合成肽疫苗等弱免疫原性疫苗的开发研究，原有的免疫佐剂已不能满足新型疫苗飞速发展的需要。寻找一些活性高而副作用低的新型免疫佐剂就显得更为迫切。近年来，各国学者研究开发了一系列新的免疫佐剂。
1．  佐剂基型
1.1蜂胶佐剂
蜂胶（Propolis）是蜜蜂从植物中采集的树脂、花粉及蜂蜡等混合物，内含几十种生物活性物质、多种维生素。氨基酸、脂肪酸、多糖及酶等，具有广谱抗病毒、抗细菌和抗霉菌作用。配合抗原注入机体，可增强补体功能、增强免疫功能细胞及吞噬细胞数量，促进抗体产生，从而增强免疫功能。早在60年代，原苏联咯山兽医学院就对蜂胶影响动物机体免疫活性方面进行了观察。随后，国内外众多学者不断对蜂胶的免疫功能进行了研究并取得了满意的效果。但蜂胶佐剂的剂型较多，制法不一。并且不同工艺制备的蜂胶佐剂，对免疫作用的影响程度也不一样。张宝康等采用乙醇溶解法、聚乙二醇溶解法、水溶解法三种制剂工艺，将蜂胶制成含量相等的三种佐剂，配合IBD组织灭活苗分组免疫蛋鸡，观察抗体水平动态变化。结果表明，三组卵黄抗体的水平，始终是水溶解组最高，乙醇溶解组最低。据程超等报道，将蜂胶乙醇提取物（EEP）作为佐剂制备减蛋综合征（EDS—76）疫苗，研究其对雏鸡血液中T、B淋巴细胞比例的影响，结果表明，EEP作为佐剂可使雏鸡血液中的T淋巴细胞比例极显著增加（P＞O．01）。邱昌庆等用三批减蛋综合征（EDS）蜂胶佐剂灭活苗分别免疫成年产蛋母鸡，连续检测HI抗体动态变化。证实EDS蜂胶苗的免疫期不短于EDS油苗。王守智等用从流产乳午分离的鹦鹉热衣原体试制成鸡胚卵黄膜甲醛灭活蜂胶佐剂苗，经试用，显示出良好的免疫原性。张君等用蜂胶为佐剂制备兔病毒性出血症组织灭活苗（A组）与兔病毒性出血症组织灭活苗（B组）同时免疫家兔，并于后期进行兔病毒性出血症病毒强毒进行攻毒实验，结果发现：A组家兔全部健活，而B组全部死亡。杨增歧等利用蜂胶作为佐剂制备的兔瘟灭活苗与兔瘟组织灭活苗同时免疫家兔，结果显示；蜂胶佐剂灭活苗免疫效果比组织灭活苗更为显著。又据报道，用淫羊营总黄酮和蜂胶初提物研制出淫羊蕾一蜂胶佐剂（Epimedium－Propolis adjuvt，EPA）与疫苗配合使用，亦可显著提高机体免疫功能。
1．2微型胶囊
微型胶囊（Microencapsulation）疫苗是用高分子聚合物包裹于疫苗表面而成的囊状物，大小在400um以下，其囊膜具有通透性，囊心抗原借助压力、pH、酶、温度等可逐步释放出来，故具有延缓释放、降低毒副作用、减少疫苗损耗、提高疫苗稳定性的功能，并可根据机体内不同pH环境控制疫苗作用部位，从而增强免疫效果，延长免疫期。控制释放系统。其作用方式是储存效应。随着该载体材料的降解，被包封于载体内的疫苗便缓慢释放出来。至今已研制出许多微球疫苗，如破伤风毒素，葡萄球菌肠毒素的微囊化疫苗，流感A病毒微球口服疫苗的研究等
1．3脂质体
是由类脂质组成的人造细胞膜样小球体，可包囊各种物质及疫苗，并有效地引入细胞内。该载体主要由磷酸类脂、胆固醇、硬脂胺等组成的单层或多层双分子夹水结构。在体内趋向沉积于肝、脾、淋巴结等网状内皮巨嗜系统中，延长在体内停留时间、减少疫苗用量、降低毒副作用，并可产生免疫记忆，提高免疫功能。刘湘涛等报道，用脂质体、油乳剂、明矾及金黄色葡萄球菌免疫符复合物为佐剂，分别与禽多杀性巴氏杆菌的主要保护性抗原荚膜多糖（CPS）配制成疫苗免疫鸡，结果显示：脂质体组的IgG抗体水平最高，抗体持续时间最长。将病毒融合蛋白插入脂质体双层之中制成病毒体佐剂，研究表明，加有流感病毒血凝素或甲肝病毒抗原的病毒体在人体中的免疫原性显著高于常规疫苗。脂质体还是一种有效的粘膜免疫佐剂，能诱导分泌型IgA（SIgA）的产生。Alzen等认为，脂质体疫苗经下呼吸道免疫雌性小鼠，除诱导全身性IgG和呼吸道SIgA分泌外，还可诱导@D分泌物中产生特异性 IgA，即远端粘膜区产生 SigA.Just等用脂质体作为甲肝疫苗（HA）佐剂，肌肉注射健康人群，免疫后14天脂质体一HA免疫人群血清阳转率为100%，而用含铝佐剂的HA疫苗免疫人群组血清阳转率为71％。又据报道，一种非磷酸化脂质体（Movasome vesicle），作为两种禽类疫苗佐剂，安全有效。这种非磷酸化脂质体由双氯乙烷十六烷基醚，胆固醇和油酸组成。Movasome是目前研制的一种新型脂质体样系统用于粘膜免疫，要比常规脂质体好。该系统为非磷脂的亲水脂分子，在体内的稳定性比常规脂质体好，而且价廉，易制备。
l．4免疫刺激复合物（ ISCOM）
是由抗原、皂甙、胆固醇和磷脂组成的疏水性笼状结构。ISCOM疫苗能活化免疫系统的所有三种细胞，即辅助性T细胞，细胞毒性T细胞和B细胞。它既可激发细胞介导的免疫反应，又可刺激体液免疫。还能克服母源抗体的封闭作用并可用于通过粘膜途径提程抗原。ISCOM具有产生全面免疫应答的能力，显示出优越的免疫学价值。由于ISCOM产生有效免疫所需的抗原很少，有可能成为多价亚单位疫苗的有效性剂。

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1．  5硒和维生素E
近年发现硒（Se)对人体和动物的免疫功能有多方面的影响，李敬报道了NaZSeO3作为猪瘟兔化弱毒疫苗的强化剂。魏建忠等研究表明，新城疫含硒油佐剂疫苗接种肉鸡的增重、血硒含量及HI抗体水平均显著高于非含硒新城疫油性剂疫苗的接种。杨鸿等报道，在基础日粮不缺硒的条件下，在疫苗饮水免疫时，于水中短时添加适量硒（约0．50-d．75mgKg），可明显增强雏鸡红细胞免疫粘附功能和促进雏鸡生长。邓桦等给1日龄雏鸡饲喂硒饲料（含硒0．18mg/Kg），并以饮水方式进行新城疫首免和二免，各试验组分别于二次免疫前2天起连续3天以亚硒酸钠饮水给硒。结果表明，试验组鸡的新城疫HI抗体滴度显著高于不加硒对照组鸡。姚金水报道了用ViTE－Se注射液作为蛋用雏鸡的免疫增强剂，均取得较好的效果。还有报道将硒和VE加到ND灭活苗中，结果表明，硒和VE是理想的ND油佐剂灭活苗中的免疫调节剂，免疫鸡HI效价较高，维持时间也长，个体间差异小。国外有人将维生素E（VE）加到油乳剂苗中，可增强免疫细胞的功能和增殖能力。另据报道，当疫苗中佐剂VE含量达20％和30％时，它能提高对NDV\EDS76V和IBDV的体液免疫反应。
1．6霍乱毒素B亚单位佐剂
霍乱毒素（CT）是由霍乱弧菌产生的分子量为84KD的肠毒素,由1个A亚单位（CTA）和5个B亚单位（CTB）形成的五聚体共价连接而成。CTA为毒性亚单位，CTB为无毒的受体结合亚单位，可以和所有有核细胞膜上的神经节着脂（GMI）受体结合。hdmgren等研究表明，CT及CTB是一种较强的免疫佐剂，当CT或CTB与不相关抗原一同经粘膜途径免疫动物时，可大大增强机体对特异性抗原的特异性粘膜Iga免疫应答和系统IgG免疫应答。Takada等以伪狂犬病毒糖蛋白（gb）作为抗原，将其与纯化的CTB混合后一同经鼻腔免疫小鼠，同时将gb单独免疫小鼠.结果表明免疫的小鼠都能诱导产生局部和系统抗体应答，但以CTB作为佐剂的免疫组，不论是鼻腔冲洗液还是血清中的抗体滴度均明显的高于单独gb免疫组. WU Hy等以免疫性很弱的链球菌表面蛋白抗原（AgUl/II）作为免疫原，对CTB的免疫佐剂活性和蛋白抗原载体进行了研究。又通过化学方法将CTB与Agi/ II偶连形成的偶连蛋白CTB－Agi/11或CTB与Agi/ 11混合物。经鼻腔和胃肠途径免疫小鼠，结果两种免疫途径均能在血清和分泌物中诱导出较强的抗Agi/ 11特异性IgG和IgA抗体应答。Tamura等用流感病毒疫苗（HAV）或HAV＋CTB鼻腔免疫小鼠。结果单独免疫HAV只诱导低满度（ZS）的抗HAV的血凝抑制抗体（HI）、而HAV＋CTB组的HI满度高达211。Oien等用呼吸道包涵体病毒（HRV）保护性抗原嵌合FG糖蛋白以CTB作为佐剂鼻腔免疫小鼠，并以铝胶作为佐剂经非肠道途径免疫的小鼠作为对照进行了实验。结果表明，铝胶佐剂组不产生局部抗体免疫应答，但两种免疫途径均能诱导产生对下呼吸道病毒感染提供保护作用的抗HRV血清抗体，而鼻腔免疫途径则能诱导产生对上呼吸道的病毒感染提供保护的粘膜抗体应答，表明CTB是一种良好的粘膜佐剂。ToChikubo。等将CTB和牛血清白蛋白（BSA）混合后分别经鼻内和口服途径免疫小鼠，鼻内免疫可产生高水平的BSA特异性血清和粘膜IgA抗体应答，而口服免疫仅产生中度水平的BSA特异性IgA应答。 Shi Chenhua等应用基因重组技术获得CTB与乙性肝炎病毒PreS2抗原决定簇的融合蛋白，将此融合蛋白肌肉免疫小鼠可诱导出抗PreS2的特异性抗体，加入其他佐剂后并不能进一步增加融合蛋白的免疫应答反应，表明融合蛋白中的CTB起到了佐剂和输送载体作用，为构建新一代基因工程疫苗提供了良好的基础。
1．  7氧化甘露聚糖
据澳大利亚科学家报道，氧化偶连到蛋白抗原上的甘露聚糖（oxidised mannan）可作为很好的粘膜反应佐剂，诱导粘膜及血清抗体的产生。研究人员通过鼻腔免疫甘露聚糖氧化偶连的抗原后，发现甘露聚糖可明显增加血清IgA、IgG以及粘膜IgA的产生，而且可在眼泪、@D分泌物和唾液等粘膜分泌物中检测到抗体。但是氧化偶连是甘露聚糖之佐剂作用所必需，简单将甘露聚糖与蛋白抗原混合，或将与蛋白偶连的甘露聚糖还原后都无免疫佐剂作用。甘露聚糖在诱导血清IgA以及@D和唾液分泌IgA的能力好于常用的霍乱毒素CT。
2、存在问题及展望
以上所述的佐剂种类繁多，效果也是明显的，但它们也有一些不可避免的缺点，如脂质体的稳定性有待提高，氧化甘露聚糖与抗原结合方式局限，CTB发挥佐剂作用的机理不清楚，蜂胶佐剂注射部位形成肿块等问题。另外一些佐剂由于制作繁琐，价格昂贵也限制了它们的推广使用。
免疫佐剂研究的主要趋势：多来源、多途径开发出低廉、高效、速效、长效的新型性剂，并探索性剂的作用机理。多糖类物质作为增强机体免疫功能的药物已有大量研究，而作为免疫佐剂的研究仅限于对微生物来源的脂多糖和葡萄糖。事实上，多糖是一类十分重要的生物活性物质，一些多糖分别或同时具有调节淋巴细胞、吞噬细胞、白细胞介素、抗体水平以增强免疫功能；一些多糖可经化学修饰形成多孔微颗粒，具有浓缩和储存抗原的作用。多糖微粒可耐受胃肠道的降解，可发展成口服免疫载体。因此，以多糖类物质为佐剂，既可发挥其增强免疫作用，又具有运载抗原、促进抗原提程的佐剂活性，这是研究性剂的新趋势。