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CIK细胞对肝癌术后患者生存率影响的观察
CIK细胞对肝癌术后患者生存率影响的观察
医药论坛杂志 2008年12月 第29卷 第24期
卢冰,李德宇,张晓
河南省人民医院肝胆外科 郑州市 450003
CIK细胞是人外周血单个核细胞经体外激活、培养后获得的一群同时表达CD3和CD56分子的异质细胞,兼有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点[ 1 - 2 ] ,其生物学特点为临床的肿瘤生物治疗提供了广阔前景。为探讨C IK细胞对肝癌患者术后生存期的影响,选择自2002年10月- 2005 年12月住院的肝癌患者进行临床观察,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料 本组30例肝癌患者,男22例,女性8例,年龄(29~61)岁,中位年龄(42 ±216)岁。TNM分期: Ⅱa11例, Ⅱb14例, Ⅲb5例,均经CT、手术和病理检查确诊。随机分为手术加C IK组(C IK组) 12例和单纯手术组(对照组) 18例,所有患者观察前1月未行抗肿瘤治疗, 3月前未使用过免疫增强剂及激素类药物。
1.2 主要试剂 PE标记鼠抗人CD4、CD8抗体,F ITC标记鼠抗人CD25、CD3抗体,同型对照分别为PE标记鼠抗人IgG1免疫球蛋白, F ITC标记鼠抗人IgG1免疫球蛋白均为美国公司产品。
1.3 方法
1.3.1 C IK细胞制备及回输[ 3 - 4 ] 抽取外周血20ml,利用密度梯度离心法分离并收集单个核细胞,用RPM I - 1640完全培养基洗涤3次,调整细胞到1 ×106 /ml,加入IFN - γ1000u /ml, 24h后加入rh IL - 2 1000u /ml, anti - D3McAb50ng/ml,孵箱中常规条件培养,以后隔天换液同时补加rh IL - 2 1000u /ml。培养21d收集细胞,经毒理、热原试验和细菌培养、真菌培养阴性合格后,回输细胞总数为116 ×101 0,悬浮于含500g/L 人血白蛋白生理盐水250ml内,分别于术前、术后分4次回输给患者。
1.3.2 流式细胞仪检测 抽取清晨空腹静脉血2ml (EDTA抗凝) ,取不同荧光标记的单克隆抗体各20uL,分别加入100uL抗凝外周血,室温下孵育15min,加红细胞裂解液, PBS洗涤2次,用流式细胞仪(BD公司)检测, Cell quest软件分析数据,记录阳性细胞百分率。
1.3.3 观测指标及疗效判定 观测指标包括两组患者机体外周血淋巴细胞亚群( CD3+ T、CD3+CD4+ T、CD3+ CD8+ T)的免疫状态及生存期。
1.4 统计学处理 运用SPSS 8.0统计学软件对各组数据进行分析,免疫结果差异行t检验,两组生存曲线行Log - rank检验, P < 0105有统计学意义。
2 结果
2.1 机体免疫状态 对照组和CIK组治疗后患者机体细胞免疫总体水平无统计学意义,但在亚细胞水平上免疫水平差异显著; C IK组治疗后患者体内诱导辅助T细胞(CD3+ CD4+ T)及细胞毒性杀伤效应细胞(CD3+ CD8+ T)均比对照组增高,有显著性差异,见表1。
2.2 生存期 随访2年,对照组和CIK组的生存率分别为16.67%和25% ,中位生存时间分别为9个月和18 个月,两组有显著性差异(χ2 = 3.876,P = 0.049) (见图1) 。
3 讨论
CIK细胞兼有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤作用,其杀瘤作用主要通过以下三个途径:在体内细胞因子作用下,C IK细胞大量释放具有细胞毒性的胞浆颗粒到胞外,直接破坏瘤细胞以达到溶瘤作用;活化的CIK细胞还可分泌多种细胞因子( IFN - γ、TNF - α和IL - 2等)调节免疫系统对瘤细胞杀伤起到调理作用;活化C IK细胞还可表达FasI从而诱导肿瘤细胞凋亡。本研究发现:肝癌患者手术治疗前、后联合给予CIK过继免疫治疗,患者体内肿瘤特异性免疫杀伤细胞水平明显增高,说明经过免疫强化后,患者体内免疫水平处在较高且平稳的免疫激活水平,有利于效应细胞联合化疗药物发挥对肿瘤细胞及术后残存癌细胞的杀伤作用,提高治疗效果[ 4 - 5 ] 。经过联合治疗后患者近期死亡率明显下降,治疗后中位生存期可达18个月,表明联合免疫治疗在术后对患者体内瘤细胞增殖有明显抑制作用。应用C IK疗法可使肝癌患者外周血免疫细胞增殖加强,增强其抗肿瘤免疫活性,延长肝癌患者生存时间。手术联合应用CIK治疗效果显著优于单纯手术治疗,可望为肝癌综合治疗提供新的方法。
研究证明,每50-500个具有免疫功能的淋巴细胞能杀伤1个肿瘤细胞,由此推算,即使动员全身的免疫淋巴细胞的功能,也不过大约能消灭手指尖大小的一个肿瘤。所以,生物治疗从理论上讲,只适合手术切除肿瘤以后或经放化疗后肿瘤已经明显缓解的病例,用以消灭残留的癌细胞。
对于瘤体巨大的晚期肝癌病人,生物治疗并无实际帮助。瘤体甚小的早期肝癌,从理论上说可以采用生物治疗,但从疗效的可靠性来说还应尽量考虑手术切除。 |
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