关于CIK免疫疗法的讨论，会有新的希望吗？

Sunshine2009

最近听病友提起CIK(Cytokine-induced killer),中文译名为细胞因子诱导的杀伤细胞.不知道有没有病友试过这个疗法，效果怎么样?希望有做过这个治疗的病友提供经验，好让大家多点选择去治疗，谢谢！



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不知道，我也想了解，不过我想一项新技术效果怎么样，可能还不会有人能说明白

changzhen

CIK细胞的基础与临床研究进展（转）
海军总医院学报2009 年3 月第22 卷第1 期

马学斌,马　骢
(海军总医院检验科,北京100048)

　    随着肿瘤对人类生存健康的威胁日益严重,应对肿瘤的治疗模式也发生着日新月异的变化,各种肿瘤治疗的新药物、新技术、新方法层出不穷,其中细胞生物治疗已经初露锋芒,成为肿瘤生物治疗中重要的发展方向。继淋巴因子激活杀伤细胞(LA K) 、浸润肿瘤淋巴细胞( TIL) 及CD3 单抗激活的杀伤细胞(CD3A K) 后,细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer ,CIK) 的杀瘤作用日益受到重视。CIK 细胞最早是1991 年由美国斯坦福大学Schmidt Wolf 等[1 ] 首次报道。他们发现在多种细胞因子(γ干扰素、CD3 单抗、白介素21 和白介素22)作用下,外周血淋巴细胞可以被定向诱导并大量增值成为肿瘤杀伤细胞。由于该种细胞同时表达CD3 和CD56 两种膜蛋白分子,因此具有T 淋巴细胞强大的抗瘤活性自然杀伤细胞(N K) 的非主要组织相容性复合体(MHC) 限制性杀瘤的优点。与其他过继性免疫治疗细胞相比,具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广、副作用小、对正常骨髓造血影响轻微等优点。因此,应用CIK细胞被认为是新一代肿瘤过继免疫治疗的首选方案。

1 　多种细胞因子协同作用诱导CIK细胞

1. 1 　抗CD3 单克隆抗体( CD3McAb ) 　抗CD3McAb 作为一种有丝分裂促进剂可促进细胞增殖。20 世纪80 年代初研究者们就发现抗CD3 抗体或抗T 细胞多体( TCR) 抗体能模拟生理配体体外激活静止T 细胞,使之大量增殖,表达IL22R ,产生内源性白细胞介素-2 ( IL-2) 。抗CD3 单抗具有抗肿瘤转移的作用。抗体抑制恶性肿瘤的生长可能是免疫增强的效果,肿瘤特异性T 细胞数量增多,活性增强,同时内源性细胞因子的诱生放大了这种作用。抗CD3McAb 不仅在CIK 细胞培养过程中起着重要作用,在提高CIK细胞对白血病及淋巴瘤的杀伤敏感性上同样具有促进作用。

1. 2 　γ-干扰素　γ-干扰素( IFN-γ) 是由CD4 + 或CD8 + 细胞产生的同源二聚体糖蛋白,可通过多种途径直接或间接发挥抗肿瘤作用,增强N K、巨噬细胞以及细胞毒性T 细胞(CTL) 的活性。在诱导CIK细胞形成过程中加入IFN-γ 可降低IL-2 用量; 同时, IFN-γ加入的顺序与细胞毒活性密切相关,先加入IFN-γ后加入IL-2 可提高细胞毒活性。这是因为先加入IFN-γ可促使外周血单核细胞( PBMC) 上IL-2 受体数量增加,从而有效地激活效应细胞。

1. 3 　白细胞介素-1 　白细胞介素-1 ( IL-1) 主要由激活的单核巨噬细胞产生。IL-1 的体内抗肿瘤作用机制是增强T 细胞及增加肿瘤浸润淋巴细胞的数量和功能。IL-1 可以介导外周血单个核细胞上表达IL-2 受体,与IFN-γ、CD3McAb 合用时可以明显提高CIK 的细胞毒效应,但IL-1 对CIK 细胞扩增不起作用。

1. 4 　白细胞介素22 　白细胞介素22 ( IL22) 是T 淋巴细胞分泌的一种细胞因子(由133 个氨基酸组成的多肽,相对分子质量约为15 ×103 ) 。它是人体免疫应答的核心物质,具有免疫增强、抗肿瘤和抗感染等作用。临床上已用于肾癌、黑色素瘤、淋巴瘤、肺癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肠癌、膀胱癌、头颈部肿瘤、白血病及癌性胸腹水等病症的治疗。与放疗、化疗比较, IL22 对正常细胞毒副作用轻微,能减轻肿瘤患者的疼痛,提高患者生活质量。此外结核病、肝炎、艾滋病、性病、成瘾性吸毒者及其他免疫功能低下患者均可使用IL-2 。CIK 细胞的体外增殖需要外源性细胞因子如IL-2 、IL-7 、IL-12 等的辅助。外源性IL-2 、IL-7 、IL-12 可以显著促进淋巴细胞的生长,而对CIK细胞的细胞毒作用无影响[2 ] 。

CIK细胞是多种细胞因子共同诱导培养的一群异质细胞群,多种细胞因子的作用是相互协同的,单一因子对效应细胞的增殖及细胞毒活性无作用或者小于多种细胞因子的联合作用。联合作用的机制是最终共同激活静止T 细胞,提高细胞表达IL22 受体和产生IL22 的能力,启动自分泌途径IL22 依赖的T细胞激活反应。

2 　CIK细胞杀伤靶细胞的机制

    目前的研究显示,CIK 可通过3 种途径发挥杀瘤、溶瘤的作用。①CIK 细胞对肿瘤细胞的直接杀伤作用:靶细胞表面分子与效应细胞表面的相应受体结合。Schmidt Wolf 等[ 3 ] 证实CIK 细胞的细胞毒活性可被抗淋巴细胞功能相关抗原-1 (L FA-1) 或抗细胞间黏附分子-1 ( ICAM-1) 的单克隆抗体所阻滞,提示上述细胞表面黏附分子在CIK 细胞识别肿瘤过程中起关键作用。Mehta 等[4 ] 研究发现, 当CIK细胞被激活时通过FcR 使L FA21 和ICAM21的结合状态从低亲和力转为高亲和力,同时向细胞间排出含有α2氮2甲苯碳酰基2左旋2赖氨酸硫甲苯酯(BL T) 的胞浆毒性颗粒。这些颗粒能够直接穿透封闭的靶细胞进行胞吐,从而导致肿瘤细胞的裂解。使用主要组织相容性复合体(MHC) Ⅰ类和Ⅱ类抗体不能阻滞CIK 细胞对靶细胞的杀伤作用,说明CIK细胞的杀伤作用具有非MHC 限制性。②进入体内活化的CIK细胞可分泌多种细胞因子, 如IL-2 、IFN-γ、TNF-α等,不仅对肿瘤细胞有直接抑制作用,而且还可通过调节免疫系统间接杀伤瘤细胞。Kornacker 等[5 ] 在用CIK治疗慢性淋巴细胞白血病(CLL) 的研究中发现CIK 分泌的IFN2γ 能促使CLL 细胞上ICAM21 的表达,从而能提高细胞毒效应细胞所诱导的凋亡。此外, CIK 细胞还能分泌IL22 、IL26 、TNF2α及巨噬细胞集落刺激因子( GM2CSF) 等一些细胞因子,增强细胞毒作用。③诱导肿瘤细胞凋亡及坏死。CIK细胞能活化肿瘤细胞凋亡基因,使得FL IP、Bcl22 、Bcl2xL 、DAD1 和survivin基因表达上调。此外,CIK细胞表达的Fasl 可诱导肿瘤细胞凋亡,但由于此细胞有抗凋亡基因的表达,因此在体内能抵抗Fasl 阳性肿瘤细胞对CIK 的反作用。故CIK能对肿瘤细胞发挥持久的溶瘤作用。Sun 等[6 ] 在研究CIK细胞对MGC2803 胃癌细胞株诱导凋亡作用及机制中证明:随着CIK 细胞与胃癌细胞效靶比增加及作用时间延长,抑制率明显增强;同一作用时间不同效靶比之间差异有统计学意义( P < 0101) ,同一作用时间同一效靶比之间差异也有统计学意义( P < 0101) 。扫描电镜观察结果:在效靶细胞混合培养5 h 后,可见效靶细胞的相互接触,靶细胞表面有孔洞形成;共培养14 h 后,多数靶细胞发生凋亡,细胞表面可见许多直径不一的圆形凋亡小体及孔洞;共培养24 h 后,可见靶细胞遭到严重破坏,细胞发生破裂,CIK 实验组p53 、p16 、C-myc 、Bcl-2 蛋白随作用时间延长表达均下降,Bax 蛋白表达上调。

3 　CIK细胞的试验研究

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3 　CIK细胞的试验研究

    目前,已经广泛开展了针对多种肿瘤细胞系和活体肿瘤组织应用CIK 细胞的动物实验和临床前期试验,并有一些相关报道。Wang 等[7 ] 在研究中发现,健康志愿者的CIK细胞扩增能力要显著高于肿瘤患者CIK细胞的增值,CIK细胞群体中CD3 + 、CD56 + 双阳细胞数增值能力远远高于其他细胞,是这群细胞中主要的效应细胞。动物实验表明,CIK细胞的抗肿瘤效应远高于对照组及LA K 细胞组。Int rona 等[8 ] 比较了CIK 细胞对N K 敏感的K562细胞株的杀伤力与对白血病细胞的杀伤力是相同的。Finke 等[9 ] 在实验中将IL27 基因转到CIK 细胞内,发现转染了IL27 的CIK 细胞较未转染的CIK细胞的增值活性显著增高,并且出现了分泌细胞因子TNF ,而仅仅在培养液中添加IL-7 的CIK 细胞则未出现这种分泌细胞因子的改变。杀伤性检测中也发现转染后的CIK 细胞对多种肿瘤细胞的杀伤力显著增高。Nagaraj[10 ] 将包含人IL22 基因片段的重组质粒用电穿孔法导入CIK细胞,并与树突状细胞(DC) 共同孵育后治疗胰腺癌,体外检测发现转染后CIK细胞在增殖率和细胞杀伤活性上均高于未转染细胞。Li 等[11 ] 将多药耐药基因(MDR-1) 转入CIK细胞后,CIK 细胞获得了多药耐药性,并且转染后的CIK细胞仍然保持原有的肿瘤细胞杀伤活性,这样CIK 细胞的免疫治疗和化疗可以同时进行,从而扩大了CIK 细胞治疗的应用范围。Zhang等[12 ] 在体外建立了耐药细胞株Bel-7402/ R ,来自肝癌患者的CIK 对敏感株(Bel-7402/ S) 及耐药株(Bel-7402/ R) 的细胞毒作用分别是33 %～68 %(平均5017 %) 和37 %～64 %(平均5-13 %) ,两组没有显著性差异( P > 0105) ;而对正常肝脏细胞的细胞毒作用低于10 % ,表明CIK细胞对正常的肝脏细胞没有副作用。Chan 等[13 ] 在CIK细胞的体外培养中加入生物特异性抗体,如抗CA125 的抗体、抗Her2的抗体等,发现加入抗体的CIK 细胞的细胞毒作用要显著高于不加抗体组,说明生物特异性抗体可以增强CIK 细胞的细胞毒作用,而这一作用是通过N KG2D 受体实现的。Wei 等[14 ] 的实验研究中发现,共同培养的DC-CIK细胞较单纯的CIK 细胞在增殖能力、效应细胞( CD3 + 、CD8 + 双阳细胞和CD3 + 、CD56 + 双阳细胞) 数量以及对白血病细胞的细胞毒作用等方面都显著增强。Joshi 等[ 15 ] 研究揭示了CIK细胞与DC 细胞之间存在着很重要的免疫调节关系:CIK细胞可以识别成熟的DC 细胞,成熟的DC 细胞可以诱导CIK细胞分泌IFN-γ ,而未成熟的DC 细胞则会被CIK 细胞选择性的杀死,这种作用是不依赖于TCR 的。

4 　CIK细胞的临床应用

    近年来, 体外扩增CIK 的技术日益成熟, 为CIK的临床应用打下了坚实的基础。国内外越来越多的机构、学者开始尝试应用CIK 治疗癌症患者。Shi[ 16 ] 应用自体CIK细胞治疗13 例肝癌患者,发现患者的免疫功能、生活质量都有提高;此外,接受化疗及CIK治疗的患者,其2 年生存率比单独接受化疗的患者有较大的提高。Weng 等[17 ] 在85 名接受过微创治疗的肝细胞癌患者中观察CIK 的疗效,发现微创技术治疗后再用CIK 治疗能提高肝癌患者的免疫力,减少癌症的复发。刘继斌等[18 ] 对53 例中晚期消化系统肿瘤患者进行CIK 治疗并随访3年,总缓解率为7316 % ,随访1 、2 年和3 年的生存率分别为9214 %、8310 %和7515 % ,临床症状治疗前后明显改善,生存质量评分显著提高。袁香庆等[19 ] 化疗联合CIK 治疗40 例转移性肾细胞癌患者,取得了满意的结果,疗效明显优于单独化疗或单独CIK治疗。李元元等[ 20 ] 用CIK 治疗12 例慢性乙肝患者,细胞回输治疗24 周后,病毒载量显著下降,患者外周血中髓样树突状细胞和浆细胞样树突状细胞功能明显提高。Schmidt Wolf 等[21 ] 将IL-2通过电转染CIK细胞,治疗肾细胞癌、大肠癌、淋巴瘤患者,观察到患者血浆中γ干扰素、GM-CSF 和β-TGF 显著升高,在治疗中患者血中淋巴细胞中CD3 阳性细胞明显增多,患者治疗后的外周血单个核细胞的细胞毒作用比治疗前有所增强。证实了CIK细胞转染IL-2 可以增强其远期疗效,而没有显著的副作用出现。与手术、放疗、化疗相比,生物治疗的特点之一是副作用小。CIK 治疗最常见的副作用是发热,多数可自行缓解,也可给予解热镇痛药退热。目前,认为生物治疗中患者中度发热是机体免疫功能正常反应的结果,该反应对治疗有益。其他少见的副作用有胸闷和恶心,尚未出现如过敏、肝肾功能衰竭等其他不良反应。

5 　CIK细胞的发展展望

    Thorne 等[ 22 ] 的最新研究显示,CIK 细胞与有溶瘤作用的病毒相结合能产生强大的协同抗肿瘤作用,可一定程度上克服靶向生物治疗中存在的递呈及定向等难题,有望成为一种更为有效的肿瘤治疗方法。CIK细胞过继免疫疗法作为一种新的治疗手段、治疗方案和标准,尚待进一步规范和统一,作用机制、毒副作用、应用时机、给药途径和方法等问题有待进一步探讨。但毫无疑问,细胞过继免疫治疗与手术、化疗、放疗有机结合,合理安排将对肿瘤治疗带来新的曙光。

changzhen

CIK细胞对肝癌术后患者生存率影响的观察

　医药论坛杂志　2008年12月　第29卷　第24期　

卢冰,李德宇,张晓
河南省人民医院肝胆外科　郑州市　450003

　  CIK细胞是人外周血单个核细胞经体外激活、培养后获得的一群同时表达CD3和CD56分子的异质细胞,兼有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点[ 1 - 2 ] ,其生物学特点为临床的肿瘤生物治疗提供了广阔前景。为探讨C IK细胞对肝癌患者术后生存期的影响,选择自2002年10月- 2005 年12月住院的肝癌患者进行临床观察,现报道如下。

1　资料与方法

1．1　临床资料　本组30例肝癌患者,男22例,女性8例,年龄(29～61)岁,中位年龄(42 ±216)岁。TNM分期: Ⅱa11例, Ⅱb14例, Ⅲb5例,均经CT、手术和病理检查确诊。随机分为手术加C IK组(C IK组) 12例和单纯手术组(对照组) 18例,所有患者观察前1月未行抗肿瘤治疗, 3月前未使用过免疫增强剂及激素类药物。

1．2　主要试剂　PE标记鼠抗人CD4、CD8抗体,F ITC标记鼠抗人CD25、CD3抗体,同型对照分别为PE标记鼠抗人IgG1免疫球蛋白, F ITC标记鼠抗人IgG1免疫球蛋白均为美国公司产品。

1．3　方法

1．3．1　C IK细胞制备及回输[ 3 - 4 ] 　抽取外周血20ml,利用密度梯度离心法分离并收集单个核细胞,用RPM I - 1640完全培养基洗涤3次,调整细胞到1 ×106 /ml,加入IFN - γ1000u /ml, 24h后加入rh IL - 2 1000u /ml, anti - D3McAb50ng/ml,孵箱中常规条件培养,以后隔天换液同时补加rh IL - 2 1000u /ml。培养21d收集细胞,经毒理、热原试验和细菌培养、真菌培养阴性合格后,回输细胞总数为116 ×101 0,悬浮于含500g/L 人血白蛋白生理盐水250ml内,分别于术前、术后分4次回输给患者。

1．3．2　流式细胞仪检测　抽取清晨空腹静脉血2ml (EDTA抗凝) ,取不同荧光标记的单克隆抗体各20uL,分别加入100uL抗凝外周血,室温下孵育15min,加红细胞裂解液, PBS洗涤2次,用流式细胞仪(BD公司)检测, Cell quest软件分析数据,记录阳性细胞百分率。

1．3．3　观测指标及疗效判定　观测指标包括两组患者机体外周血淋巴细胞亚群( CD3+ T、CD3+CD4+ T、CD3+ CD8+ T)的免疫状态及生存期。

1.4　统计学处理　运用SPSS 8.0统计学软件对各组数据进行分析,免疫结果差异行t检验,两组生存曲线行Log - rank检验, P < 0105有统计学意义。

2　结果

2．1　机体免疫状态　对照组和CIK组治疗后患者机体细胞免疫总体水平无统计学意义,但在亚细胞水平上免疫水平差异显著; C IK组治疗后患者体内诱导辅助T细胞(CD3+ CD4+ T)及细胞毒性杀伤效应细胞(CD3+ CD8+ T)均比对照组增高,有显著性差异,见表1。

2．2　生存期　随访2年,对照组和CIK组的生存率分别为16.67%和25% ,中位生存时间分别为9个月和18 个月,两组有显著性差异(χ2 = 3.876,P = 0.049) (见图1) 。

3　讨论

    CIK细胞兼有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤作用,其杀瘤作用主要通过以下三个途径:在体内细胞因子作用下,C IK细胞大量释放具有细胞毒性的胞浆颗粒到胞外,直接破坏瘤细胞以达到溶瘤作用;活化的CIK细胞还可分泌多种细胞因子( IFN - γ、TNF - α和IL - 2等)调节免疫系统对瘤细胞杀伤起到调理作用;活化C IK细胞还可表达FasI从而诱导肿瘤细胞凋亡。本研究发现:肝癌患者手术治疗前、后联合给予CIK过继免疫治疗,患者体内肿瘤特异性免疫杀伤细胞水平明显增高,说明经过免疫强化后,患者体内免疫水平处在较高且平稳的免疫激活水平,有利于效应细胞联合化疗药物发挥对肿瘤细胞及术后残存癌细胞的杀伤作用,提高治疗效果[ 4 - 5 ] 。经过联合治疗后患者近期死亡率明显下降,治疗后中位生存期可达18个月,表明联合免疫治疗在术后对患者体内瘤细胞增殖有明显抑制作用。应用C IK疗法可使肝癌患者外周血免疫细胞增殖加强,增强其抗肿瘤免疫活性,延长肝癌患者生存时间。手术联合应用CIK治疗效果显著优于单纯手术治疗,可望为肝癌综合治疗提供新的方法。

kite2888

CIK在北京302医院住院部的墙上有简介，好多年前就有了，效果应该一般，不然早就应该见诸报端，吵得那么凶，炒作嫌疑很大

changzhen

原帖由 kite2888 于 2009-8-1 23:08 发表
CIK在北京302医院住院部的墙上有简介，好多年前就有了，效果应该一般，不然早就应该见诸报端，吵得那么凶，炒作嫌疑很大

    同意楼上的说法：研究证明，每50-500个具有免疫功能的淋巴细胞能杀伤1个肿瘤细胞，由此推算，即使动员全身的免疫淋巴细胞的功能，也不过大约能消灭手指尖大小的一个肿瘤。所以，生物治疗从理论上讲，只适合手术切除肿瘤以后或经放化疗后肿瘤已经明显缓解的病例，用以消灭残留的癌细胞。

    对于瘤体巨大的晚期肝癌病人，生物治疗并无实际帮助。瘤体甚小的早期肝癌，从理论上说可以采用生物治疗，但从疗效的可靠性来说还应尽量考虑手术切除。

Sunshine2009

想也是，如果那么有效，早就开展了，国内这类 的病人这么多，一点也不担心没有病源，估计还是这个疗法本身的问题，谢谢LS的介绍，辛苦了。

sxyx

我刚开始试用这项技术。如有成效，我愿意告诉大家。

sxyx

不过，我看了关于CIK的技术介绍，我的情况并没有这么严重，只是很轻微的携带，希望对此了解深的朋友能告诉我一下，我是否适用这项技术，对身体有没有副作用。谢谢！