聊聊慢性乙肝治疗，先从思路转换说起

刚必复

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换个思路

我上面举了Chisari实验室的研究，看了令人沮丧：即便是启动了一个Th1到了耐受体内碰到抗原还是很快丧失了功能。这个结果于我开始提到的关于Th1不受耐受调控的说法不符（没有人看出来？我有些失望）。那么到底是哪个说法对呢？到底形成了的Th1会不会受到耐受的调控？仔细看一下Chisari的试验有个漏洞，就是关于Th1的定义。当然我们都知道Th1细胞是在见到抗原的时候分泌伽马干扰素。根据这个性质来判定他们的细胞是很多实验室的习惯，但不是很严格。真正的Th1是经过第一，第二和第三信号系统激活形成的。看看Chisari的试验，他们的细胞是从免疫的小鼠脾脏取出来的记忆细胞，可以是Th1记忆细胞，但不是在体外用Th1标准激活的真正的Th1靶效应细胞。那么如果是真正的Th1靶效应细胞转导到耐受体内会是什么结果呢？我们在看一个不同的模型：Lichtman的试验室是做心脏自身免疫研究的。为了研究方便，他们把一个外源的鸡白蛋白（OVA）基因在小鼠的心肌细胞表达，作为靶抗原。因为是天生的表达，所以OVA抗原就是“内源”的了，受到耐受保护。怎么见得呢？比如给正常小鼠用佐剂加OVA免疫可以得到抗体和迟发免疫反应（DTH），但对转基因（耐受）的小鼠免疫就得不到任何应答。然后他们通过体外把针对OVA的T细胞用各种条件包括标准的Th1条件激活，然后转入携带抗原的OVA转基因小鼠。这样我们就可以比较Th1和非Th1靶细胞对抗原在耐受环境下的作用。试验发现真正的Th1在转入耐受体内后可以引发对抗原的强烈攻击造成心肌损伤以至死亡，而非Th1细胞则没有致病的效果。这就说明如果真的搞成了Th1的靶效应，即使是在耐受的条件下也可以发挥靶细胞的功能（包括杀伤）。我在想，如果Chisari试验中使用了体外按照Th1条件激活后再转入耐受体内的方法，他应该会看到Th1靶细胞对肝脏细胞更加持久的攻击吧。
但是与Chisari发现的不一样，Lichtman发现转入耐受体内的Th1靶效应细胞不可以扩增。由于这个原因，造成心肌的损伤需要大量的细胞数。最近他们又进一步发现，如果在输入的T细胞中阻断了一个叫CTLA－4的受体通路，则输入的T细胞还可以扩增。把两个因素结合起来形成四种T细胞：1）正常非Th1；2）正常Th1；3） CTLA－4缺失的非Th1；4）CTLA－4缺失的Th1。把这四周T细胞分别输入耐受体内进行对比，他们看到如下趋势：从致病的效果来说，最有效的是4），再次是2）；再次是3）；没用的是1）。这个结果就与很多其他关于耐受和打破耐受的研究对上了。这个是下次的话题。

刚必复

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刚必复

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家巧儿

又有新帖了，继续关注

lsr1969

等.........

刚必复

希望坛子里更多大侠参与

换个思路

这一段是接着昨天的最后，解释那个试验的结果。

（15）耐受的细胞外和细胞内机制
耐受的意义是说在对某一个抗原耐受的体内，对这个抗原的免疫应答就被抑制了。具体到试验观察，就是用同样的抗原去免疫，即便是在最佳的免疫环境（共刺激因子加上危险信号）也得不到应答。比如乙肝病毒的转基因模型和以上说过的心肌细胞的OVA转基因模型。那么从细节和分子角度，耐受是如何实现这个目的的呢？我们关心这个是因为我们想找到如何在一个耐受（或部分耐受）的环境下引发一个病毒清除应答，所以最好知道我们面对的敌人。我说说对耐受启动和维持的理解。
耐受的启动需要没有激活的抗原呈递，就是缺少一些共刺激因子（CD80，CD86，OX40，CD40L等等），不一定全部都没有，很可能是缺少部分因子。实际上发现耐受的启动和应答一样，最好是通过抗原呈递细胞比如像树突细胞来完成。我们可以想象未成熟的（或者说未激活的）树突细胞提取了抗原后碰到识别那个抗原的T细胞。这个过程是在淋巴结里发生的，可以大大提高相遇的机会，有点像不认识的人结伴出游，大家在收费站外面的广场集合见面。T细胞识别抗原靠特异性的T细胞受体（第一信号），树突细胞还提供一部分第二信号，不会很强，但强到足以“激活”对面的T细胞产生扩增。我们需要理解这是一个正常的免疫保护自身抗原不受攻击的过程，所以会有T细胞的某些动作，包括初步的扩增和接下来的分化。分化的方向是朝着变成抑止性T细胞，但真正变成有靶细胞效应的抑止性T细胞大概还要靠在没有危险信号的环境下识别靶抗原。这好像是一个“再证实”的过程。
耐受的效应是通过细胞对细胞和分泌抑止性因子来实现的。比如现在知道抑制型T细胞可以分泌一些抑止性因子（白介素10，TGF－β等），这些因子都不是只作用于单一的细胞或过程，而是影响面很广，让人看不清到底它们能干什么。但站在远一点来看，这些抑止性因子其实有一个共性，就是拮抗炎症（anti-inflammation），说白了就是“维稳”不要“闹事”。这与抑止性T细胞的使命是吻合的。抑止性T细胞还有一个目前知道很少但很只要的功能，就是“教育”抗原呈递细胞，保证这些细胞不激活，不“闹事”，然后通过这些细胞反过来进一步“教育”新的T细胞不要激动“闹事”。这样的结果就是一个未成熟的抗原呈递启动了抑止性T细胞，后者转身“调教”抗原呈递细胞，变成抑止性抗原呈递细胞。这些细胞再进一步“调教”未成熟的或个别“闹事”的T细胞，保证了对这个抗原的不应答，也就是我们看到的耐受。
除了靠专业的抑止性T细胞和抗原呈递细胞，就是激活的T细胞上也存在分子水平的“耐受”机制，随时准备滑向耐受。比如我们现在知道所有激活的T细胞都表达一个叫做CTLA－4的受体（我们上面的例子最后提到了这个受体）。这个受体是为了抑制T细胞扩增的，就是在Th1上也会出现这个受体。所以现在同一个激活的T细胞上有两个受体识别同一个抗原呈递和靶细胞上的共刺激因子：一个受体（CD28）是管激活和扩增的，另一个是CTLA－4 是管抑制扩增的。那么两个受体，又都是在同一个激活的T细胞上，又转达两个截然相反的信号，到底听谁的？原来CTLA－4和CD28受体虽然识别同一个配体（CD86），但CTLA－4的亲和力远高于CD28，就是说在CD86表达很低的时候，只有CTLA－4可以识别它，而CD28“看不见”它。那我们来看下列两种情况：一种是Th1的启动和维持。由于CTLA－4只在激活后的T细胞表达，Th1从未成熟（未激活）的T细胞启动不会受到CTLA－4的干扰。那么启动之后就有了CTLA－4，再碰上相同的抗原呈递细胞会发生什么呢？由于激活的抗原呈递细胞上CD86的表达高，所以理论上CD28和CTLA－4都可以识别。从目前的观察来看，这时候以CD28信号传递为主，就是说是继续扩增。这就是Th1得以延续的条件。但如果碰到了靶细胞，CD86的表达一般很低，那么就只有CTLA－4可以识别和传导一个停止扩增的信号了。因此当Th1的靶效应细胞识别了靶细胞的时候，该细胞因此受到扩增抑制的可能性很大。 为什么要这样？为什么对一个应答要进行内在的随时下调？这可能与免疫的进化，证实与再证实以及自我保护有关，毕竟靠这样的机制到目前为止免疫系统出色地完成了防御和保护的任务。当然有例外，乙肝，艾滋病和其他慢性感染。。。。。
我们转会来看上一次留下的悬念：四种识别OVA抗原的T细胞：1）正常非Th1；2）正常Th1；3） CTLA－4缺失的非Th1；4）CTLA－4缺失的Th1，输入到OVA耐受的小鼠体内，造成了对抗原的不同程度的攻击。以效率来排：4>2>3 (1无效)。2代表了一个正常的Th1靶效应细胞，但同时表达CTLA－4受体。这个细胞在数量大（ 5百万）的时候，可以引起对心肌细胞（抗原靶细胞）的攻击造成心肌损伤，以至死亡。所以我们可以再次证实真正的Th1靶细胞是不受细胞外耐受环境调控的。但还是受到细胞内的分子耐受调控，因为这些细胞在碰到靶细胞（心肌细胞）之后，虽然实施了杀伤，但没有明显扩增（试验中观察），所以需要很多，有“一锤子买卖”的意思。3不是真正Th1，但像Th1，因为可以分泌伽马干扰素。但它没有CTLA－4，所以不存在抑制扩增的问题。这个细胞看到抗原有明显的扩增行为，但对靶细胞的攻击却是暂时性的，受到了外部耐受环境的调控，很快失去了伽马干扰素的分泌（很像Chisari看到的现象）。而最有效的4就不同了：即具有Th1靶效应细胞对外部耐受环境的抵抗，又具有缺少CTLA－4而导致的内部耐受机制的丧失。其结果就造就了一个超强的Th1应答。这个应答不但识别靶细胞，持续地分泌伽马干扰素，而且还可以由靶细胞支持扩增，得到更多的Th1靶细胞。所以与2不同，只要输入50万（十分之一）数量的4就可以达到至死的效果。
再看Chisari的试验结果，我们就明白为什么会是那么沮丧：第一，他们使用了免疫记忆细胞。这些细胞没有激活之前不表达CTLA－4受体，虽然这些细胞在激活后分泌伽马干扰素，说明他们有Th1的靶效应功能，但它们不一定具备真正Th1所具有的抗耐受环境调控的能力。在一个耐受体内可能会很快受到抑制而丧失伽马干扰素的分泌。第二，它们由于开始激活之前没有表达CTLA－4，所以在碰到抗原受到激活时会有一定的扩增，直至CTLA－4的表达最终造成刹车。就是说，Chisari输入到耐受体内的应答细胞即受到外部的耐受调控，又受到细胞内的耐受调控，所以没有看到Lichtman试验中的效果。我们很多的试验都是走了Chisari的路子，很少的试验走了Lichtman的路子。不是说光是乙肝研究，其他很多研究包括肿瘤免疫都是这个地方出了错误，滑向了一个错误方向。当然，这是我的观点，那些“热火朝天”的试验室和科学家不一定同意这个结论。那是后话，以后在讨论吧。

FORRESTFU

情节有点紧张和精彩了，呵呵。加油。

刚必复

除FORRESTFU大侠常来看看外，其他的大虾也多发表意见啊