影响乙肝病毒复制的基因序列

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影响乙肝病毒复制的基因序列



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    据Hepatology(1999,29∶939)载　日本Dno－Nita等报告，HBV DNA聚合酶(DNA－P)保守序列的酪氨酸(Y)、蛋氨酸(M)、天冬氨酸(D)、天冬氨酸(D)基序(YMDD)中的M被其他氨基酸取代，可影响HBV的复制及其对拉米夫定的耐药性。



    Dno－Nita等从10例肝硬化病人血清提取HBV DNA进行扩增，再分别以异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、赖氨酸(K)、精氨酸(R)、苏氨酸(T)置换YMDD中的M，再以DNA印迹杂交在2.0 Kbp处显示单链HBV DNA带(HBV复制的中间产物)。在野型与检测的7个变异株中，仅野型与I、V、A、L 4个变异株能显示该单链带，表明有复制能力，K、R、T变异株未见单链带，表明无复制能力。单链带定量显示YIDD、YVDD和YADD复制能力比野型小，而YLDD复制能力比野型大。



    将有复制能力的4个变异株与野型转染HuH－7细胞，再加入拉米夫定，以观察拉米夫定对YMDD基序变异株HBV的作用。与未加拉米夫定的对照组相比，加入拉米夫定后野株、YADD、YLDD单链带下降67％～96％，而YIDD、YVDD的单链带未减少，表明这2个变异株对拉米夫定耐药。



    由于表面基因与DNA－P基因完全重叠，故YMDD变异亦导致HBsAg氨基酸的取代，从而影响HBsAg的分泌。在转染HuH_7细胞的培养基中，A、K、T变异株不分泌HBsAg，而I、V、L、R变异株分泌HBsAg。有复制能力的4个变异株中仅YADD不分泌HBsAg，而无复制能力的3个变异株中，仅YRDD分泌HBsAg。拉米夫定对野型和分泌HBsAg变异株(I、V、L和R)转染细胞培养基的HBsAg水平无影响。免疫细胞染色显示，在转染野型的HuH_7细胞胞浆中HBsAg呈弥散性分布，而转染A、K、T不分泌HBsAg株的HuH_7细胞则不然，未经转染的HuH_7细胞胞浆无HBsAg染色。



    研究者认为，①拉米夫定是治疗HIV感染有效的逆转录酶抑制剂，近来用于治疗慢性HBV感染。研究证明，耐拉米夫定HBV的逆转录酶YMDD基序存在氨基酸取代现象。②YMDD基序是DNA－P的高度保守区。在有复制能力的克隆株YMDD基序的M位有一个疏水氨基酸(I、V、A或L)，而无复制能力的克隆株M位有一个亲水基氨基酸(K、R或T)。③如M被取代可导致引物—模板复合物的定位及dNTP结合能力的改变，从而影响复制能力。④YMDD基序中1个氨基酸被取代(I或V取代M)可使dNTP结合紧密而不与拉米夫定结合，从而对拉米夫定产生耐药性，即I或V取代YMDD基序中的M后，就有可能识别拉米夫定(dCTP类似物)和dCTP。⑤加拉米夫定的样本HBsAg水平没有改变，可能是由于拉米夫定仅抑制HBV的逆转录步骤而不抑制转染HBV DNA表面基因的转录与翻译。卢玉摘译





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