乙型肝炎病毒基因分型的研究现状

2002落叶

乙型肝炎病毒(HBV)属嗜肝DNA病毒科嗜肝病毒素，它是已知的引起人类疾病的最小DNA病毒。HBV感染呈世界性分布，有血清学证据表明全世界约有20亿人曾经或持续感染乙肝病毒。1988年Okamoto首先提出了乙肝病毒基因分型法，近年来，随着分子生物技术的发展，人们对乙肝病毒基因型进行了大量研究。本文对乙型肝炎病毒基因型及临床方面研究进展综述如下

1 HBV基因型
1．1 HBV基因型概况 1988年Okamoto(1)从无症状携带者的血清中克隆出3株adw亚型的HBV DNA序列，比较它们的同源性，发现它们之间的差异为3．9％ ～5．6％。而与美国的2株adw亚型的HBV DNA序列比较，发现它们之间的差异为8．3％ ～9．3％。Okamoto根据不同基因型之间差异≥8％ ，同基因型之间的同源性>92％为界限，将18株HBVDNA序列分为A、B、c、D 4种基因型，从而提出了基因型概念。Noxde等(2)对32例HBV患者S基因序列测序结果分析，发现了两个新的基因型E、F。Stuyvre等(3)在研究来自法国和美国的慢性乙肝患者血清标本时，发现了一个新的基因型G型。2002年Arauz Ruiz(4)对10株HBV进行全基因测序，发现其中3株虽与F型相近，但与F型又有明显不同。故命名为H型。根据HBV全基因核甘酸序列异源性8％ ，或
S基因区核甘酸序列异源性4．2％，HBV基因型可分为A、B、C、D、E、F、G、H 8型。

1．2 HBV基因型分布在世界不同地区基因型分布不同，A型为全世界分布，B型、C型主要分布在亚洲，D型主要分布在美洲、南欧、澳大利亚和中东，E型主要分布在非洲，F型分布于美洲土著人和波利尼西亚，G型分布在美洲，H型在美国发现。在我国，许军等(5)对广东省廉江市284例慢性HBV感染者检测表明，基因型构成以c型和B型为主，两者分别为C型占73．2％ ，B型占26．2％ ，仅各有1例为D型和B、C混合型。在长江以南地区，以基因型B型为主占55％ ，长江以北以C型为主占81．6％ 。基因型C在全国各地均有流行，而E、F、G、H 4种基因型未发现。

1．3 HBV基因型分析方法

1．3．1 全基因序列测定根据HBY病毒核酸异源性≥8％进行分型

1．3．2 S基因序列测定Norder等(2)于1992年发现S基因序列的变化同全基因序列变化一致，从而简化了HBV DNA基因分析方法，同时发现了两个新的基因型E、F。且被全基因测序所证实。

1．3．3 聚合酶链反应一限制性酶长度多态性分析(PCR—RFCP)：Lindn(6)建立了S基因的PCR—RFLP基因型分型方法，首次可区分A—F6种基因型。是目前常用的基因分析法。

1．3．4 单克隆抗体酶联免疫吸附测定(ELISA)法；Usuda等(7)制备前s2区域基因型特异性表位单克隆抗体，并用辣根过氧化物酶进行标记，该方法操作简单，适用于大规模的流行病学调查。

1．3．5 分子杂交法。

2 HBV基因型与血清型的关系及分布 根据HBV外膜蛋白第122～124位氨基酸(d／y决定族)第139～147位氨基酸(a决定族)以及第159～160位氨基酸(W／r决定族)的变化，将HBV分为adw、adr、ayw和ayr四个亚型，其中，W抗原决定族又可分为wl、W2 、W3 和w4。加上q决定族HBV可以分为9个血清型。不同的血清亚型可属于同一基因型，同一血清亚型又可分布于不同基因型。

3 HBV基因型与变异
3．1 基因型与1896位变异，前c区nt1896的变异，使前c区第28位氨基酸的UGG变为终止密码子UAG，即G—A突变，从而使前G区启动的编码终止，病毒无法表达HBeAg，在血清上表现为HBeAg阴性，但HBV DNA阳性，抗一HBe阳性。这一变异在B、C、D型中较常见，而A型少见。这是由于基因A型的1858位的c与1896位G配对，排拆该位点A的选择变异。相反，B、D、E和部分c型HBV 1858位的T，可与1896位的A变异配对，形成稳定的发卡结构。因此非A型特别是D型，前c区突变株较多L 。

3．2 基本核心启动子(BCP)AI726T和GI764A变异，被称为双突变。Orito等(10)发现双突变在基因型C中明显比B型多见，而与HBeAg或抗一HBe无关。

2002落叶

4 HBV基因型与病情Kao等(11)研究表明HBV×蛋白与肝癌的发生、发展、侵袭、转移都有密切关系。在台湾地区，绝大部分肝癌患者感染的HBV为B型基因型或c型基因型，其中50岁以下的肝癌与B型基因相关性最大。HBV感染后不同的临床类型，其发病机制较复杂，但不同基因型感染后，可能与HBV滴度高低及HBeAg阳性与否有关。HBeAg阳性者中其基因型分布明显不同，A型为68％ ，B型1％ ，C型15％ ，D型19％ ，E型2％ ，F型2％ 。有文献报道，感染c型HBV者中HBV DNA阳性率明显高于感染B型感染者，并且c型感染者血清中病毒滴度也明显高于B型感染者，且B型感染者早于c型感染者l0年发生HBeAg血清转阴，故c型感染者长期高水平的HBV DNA易导致病变加重。随着分子生物学发展，对HBV基因型，基因变异的研究将更加深入，从而对HBV的发病机制和治疗提供有益帮助。

参考文献
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