肝癌复发与转移的基础研究现状

不死鸟

肝癌复发与转移的基础研究现状 顾公望 周汉高 　　肝细胞癌(HCC)无论“早切”、“再切”、“二期切”或“肝移植”均遇到复发和转移的问题。肝癌根治性切除后5年复发率为61.5%，小肝癌为43.5%[1],提示攻克肝癌复发转移有重要意义。 一、研究概况 　　肝癌复发和转移的实验研究包括癌细胞（尤其是侵袭性相关因素、粘附等）、细胞外基质、肿瘤血管、机体免疫、实验性干预治疗等方面。已建立了裸鼠人肝癌高转移模型(LCI-D20)和低转移模型(LCI-D35)。LCI-D20模型的肝内转移率、肺转移率和淋巴转移率均可达100%；其染色体90%为异倍体；已传30余代，仍保持转移的特性，与LCI-D35比，LCI-D20癌组织中见p53突变、c-fos、c-jun、N-ras、H-ras、CD44呈高表达，nm23-H1呈低表达。不少癌基因、生长因子和其他因子与肝癌侵袭性呈正相关，如：p16(CDKN2)突变、p53突变、H-ras、c-erbB-2、mdm2、TGFα、EGF-R、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)等，转染H-ras癌基因后肝癌细胞转移潜能提高；发现nm23-H1/TIMP-2的表达与预后呈正相关。此外，微血管密度、血管内皮细胞生长因子(VEGF)与转移潜能呈正相关。关于转移的实验性干预，反义H-ras、抗CD 3/抗HBx的双特异抗体合并LAK治疗、基质金属蛋白酶抑制剂BB-94和血管生成抑制剂TNP-470等，在转移模型的实验性治疗中有抑制转移的作用。基因治疗无疑是一个重要方面，自杀基因和细胞因子基因(TNF基因)也曾在动物实验中证明有抑癌作用[1, 2]。 二、侵袭相关基因 　　1. H-ras基因：应用分子杂交和免疫组化法，对正常肝组织、浸润转移与非浸润转移性肝癌中H-ras癌基因的mRNA及其蛋白产物p21的表达进行检测。结果表明浸润转移性肝癌H-ras癌基因的mRNA水平及p21表达水平均明显高于非浸润转移性肝癌及正常肝组织[3]。H-ras癌基因能在体外诱导人肝癌细胞转移表型的产生，提高其转移能力。 　　2. CD44基因：CD44及其变异体是一组在免疫识别、淋巴细胞侵袭、细胞－细胞和细胞－基质交互作用中起重要作用的膜转移糖蛋白。Mattew等[4]对27例HCC患者利用直接免疫组化法研究了CD44的分布，发现CD44与肿瘤分化或增殖指数无相关性；而恶性肝细胞CD44上调作用与血管侵袭有关，提示CD44与HCC转移和预后有关。 　　3. mdm2基因：应用RT-PCR方法，研究mdm2基因在34例癌组织和19例癌周肝组织中的表达与HCC侵袭的关系。结果：mdm2基因表达值（均数±标准误）在癌组织中(50.18±5.24%)高于癌周肝组织(27.70±7.43%，P<0.05)，在侵袭性肝癌组织中(59.09±7.28%)高于非侵袭性肝癌组织(37.87±6.37%，P<0.05)，而在不同大小肝癌组及不同包膜状况肝癌组中mdm2基因表达值没有显著差别。结论：mdm2基因表达与HCC侵袭性有关[5]。 　　4. E-cadherin：日本学者从人HCC细胞系Li7中建立了二个亚系。经脾注射裸鼠后，亚系Li7HM产生多结节肝转移，而亚系Li7NM不产生。二维凝胶电泳和免疫印迹分析显示仅Li7NM表达微支肽，而缺乏E-cadherin表达，提示这个克隆遭受了上皮－间质转变。然后，他们将小鼠E-cadherin cDNA转染入Li7细胞，发现8/16例小鼠脾内注射后转染细胞形成肝转移，11/13例小鼠在肝内注射后形成肝肿瘤，而对照细胞系未见肿瘤。提示E-cadherin在HCC肝内转移过程中起重要作用。 　　5. 血管内皮细胞生长因子及其受体：采用RT-PCR技术，检测了43例HCC和癌周组织中VEGF及其受体(KDR)mRNA的表达。结果：①肿瘤组织VEGF mRNA表达为79%(34/43)，癌周组织表达仅为21%(9/43)；②肿瘤组织和癌周组织KDR的表达分别为93%(40/43)和88%(38/43)；③浸润生长和伴有癌栓肿瘤组织VEGF mRNA表达水平显著高于非浸润肿瘤(P<0.05)。结论：VEGF在HCC浸润和转移过程中发挥重要作用，肿瘤血管形成与HCC浸润与转移关系密切。 三、抑制转移基因 　　1. nm23基因：已发现人基因组中有两个nm23基因，分别用nm23-H1和nm23-H2表示。两个基因均位于17q21.3区位。Yamaguchi等[6]用抗人nm23-H1和nm23-H2单克隆抗体检测了25例肝癌。结果显示nm23-H1蛋白的表达与肿瘤大小、Edmondson组织病理分级、包膜侵袭等无关，但能抑制肝内转移。 　　2. Kai-1：Kai-1基因是最近发现的肿瘤转移抑制基因。采用RT-PCR方法检测了42例肝癌Kai-1基因的mRNA水平。结果肝癌Kai-1基因表达率为57.1%，在有肝内转移的肿瘤中Kai-1的表达率较无肝内转移的低(16.7%对63.9%，P<0.05)。提示Kai-1基因的转录水平降低可能与肝癌转移灶形成有关。 四、细胞外基质 　　通过对纤维联接蛋白受体(整合素α5β1)，纤维联接蛋白(FN)及其片段MAD2(恶性疾病相关DNA联接蛋白2)的研究，提示整合素α5β1和FN与肝癌分化有关，并影响肝癌的侵袭性与转移。Ⅰ、Ⅲ型胶原可限制肿瘤生长、浸润和进入血流导致转移，癌内Ⅰ、Ⅲ型胶原染色强阳性者，病人5年生存率明显高于中等阳性和弱阳性者[7]。 　　转移是一个多步骤的过程，贯穿着肿瘤细胞与宿主细胞及细胞外介质之间的粘附与脱粘附，细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在其中起重要作用。一般认为在正常组织中ICAM-1无表达，而在肝癌等肿瘤中表达阳性。 五、转移实验性干预 　　1.干预肿瘤血管形成：TNP-470是半合成的烟曲霉素类似物，具有较强的抗血管生成活性，能抑制多种肿瘤的生长和转移。夏景林等将高转移人肝癌模型(LCI-D20)的皮下肿瘤组织小块种植于BALB/c裸鼠皮下，将24只裸鼠随机分成两组。治疗组TNP-470口服，隔日一次，共8次。结果：第26天时，对照组、治疗组皮下瘤重分别为2.04±0.34g、0.98±0.34g(P<0.001)；两组AFP分别为768.6±282.3mg/L、93.4±58.6mg/L(P<0.001)。与治疗组相比，对照组肺转移率高，肺转移结节数目多，而且转移结节较大。提示TNP-470能显著抑制肝癌的生长和转移，而且没有明显的副作用。 　　2. 抑制基质金属蛋白酶：通过对MMP、MMP-2、MMP-9和金属蛋白酶相应的组织抑制物(TIMP-2、TIMP-1)的研究，揭示与HCC侵袭有关。因为这些酶参与包括基膜在内的细胞外基质降解过程。从23例进行部分肝切除的HCC病人中获得肿瘤及癌旁标本。就临床病理特征和mRNA表达的关系而言，有包膜浸润的HCC中MMP-9的mRNA表达显著高于无包膜浸润。MMP-2 mRNA在非肿瘤肝硬化肝组织中的表达显著高于慢性肝炎的非肿瘤组织。免疫组化检测结果表明，HCC细胞中MMP-9免疫反应性最强，尤其是肿瘤组织边缘细胞，提示MMP-9密切参与了HCC包膜浸润过程[8]。 作者单位：200435　上海市北医院 参 考 文 献 1 汤钊猷. 肝癌临床研究的进展与21世纪的展望. 上海医科大学学报, 1997, 24: 323-326. 2 汤钊猷. 肝癌复发转移的研究. 实用肿瘤杂志, 1997, 12: 3-5. 3 翁毅，林芷英，汪青. H-ras癌基因与肝癌浸润转移相关性的初步探讨. 肿瘤, 1997, 17: 43-45. 4 Mattew J, Hines JE, Obajuwa JD, et al. Expression of CD44 in hepatic cancer with blood vessel invasion. J Pathol, 1996, 179: 74-80. 5 邱双健，叶胜龙，吴志全，等. mdm2基因表达与肝细胞癌浸袭性关系. 中华肿瘤杂志, 1997, 19: 256-259. 6 Yamaguchi A, Urano T, Goi T, et al. Expression of human nm23-H1 and nm23-H2 protein in hepatocellular carcinoma. Cancer, 1994, 73: 2280-2286. 7 胡劲松，翟为溶，张月娥，等. 人肝细胞癌组织内Ⅰ、Ⅲ型胶原与预后的关系. 上海医科大学学报, 1997, 24: 347-350. 8 Arii S, Mise M, Harada T, et al. Overexpression of matrix metallo-proteinase 9 gene in hepatocellular carcinoma with invasive potential. Hepatology, 1996, 24: 316-322.