用序列特异性 ARCUS 核酸酶靶向乙型肝炎 cccDNA 以在体内消除

StephenW

用序列特异性 ARCUS 核酸酶靶向乙型肝炎 cccDNA 以在体内消除乙型肝炎病毒
Cassandra L Gorsuch 1、Paige Nemec 1、梅雨 2、Simin Xu 2、韩冬 2、Jeff Smith 1、Janel Lape 1、Nicholas van Buuren 2、Ricardo Ramirez 2、Robert C Muench 2、Meghan M Holdorf 2、Becket Feierbach 2 格雷格福尔斯 1 杰森霍尔特 1 温迪舒普 1 艾玛塞维尼 1 福雷斯特卡瑞克 1 罗伯特 V 布朗 1 阿莫德乔希 1 泰勒古德温 1 英 K 谭 3 保罗 J C 林 3 肖恩 C 森普尔 3尼尔·莱瑟伯里 1 、威廉·E·德莱尼 4 号 2 、德里克·詹茨 4 号、艾米·罗登·史密斯 4 号
隶属关系
隶属关系

    1
    Precision BioSciences Inc.，达勒姆，北卡罗来纳州 27701，美国。
    2
    吉利德科学公司，福斯特城，CA 94404，美国。
    3
    Acuitas Therapeutics，温哥华，BC V6T 1Z3，加拿大。
    4
    Precision BioSciences Inc.，达勒姆，北卡罗来纳州 27701，美国。电子地址：[email protected]。

    PMID：35581938 DOI：10.1016/j.ymthe.2022.05.013

抽象的

慢性乙型肝炎 (CHB) 的持续存在归因于病毒共价闭合环状 DNA (cccDNA) 的肝内池的维持，其充当复制所需的所有病毒基因产物的转录模板。目前用于 CHB 的核苷（酸）ide 疗法可防止病毒产生和传播，但对 cccDNA 或病毒基因的表达没有直接影响。我们描述了一种使用针对乙型肝炎病毒 (HBV) 基因组的高度特异性工程化 ARCUS 核酸酶 (ARCUS-POL) 的潜在治疗方法。 HBV 感染的原代人肝细胞中的瞬时 ARCUS-POL 表达导致 cccDNA 和乙型肝炎表面抗原 (HBsAg) 的显着降低。为了在体内评估 ARCUS-POL，我们开发了游离型腺相关病毒 (AAV) 小鼠和非人类灵长类动物 (NHP) 模型，其中包含一部分 HBV 基因组作为 cccDNA 的替代物。通过全身给药含有 ARCUS-POL mRNA 的脂质纳米颗粒实现了临床相关的递送。在小鼠和 NHP 中，我们观察到总 AAV 拷贝数和高靶向插入缺失频率显着减少。在支持 HBsAg 表达的小鼠模型中，循环表面抗原持续减少了 96%。总之，这些数据支持消除 cccDNA 以实现 HBV 治愈的基因编辑方法。

版权所有 © 2022 作者。由 Elsevier Inc. 出版。保留所有权利

StephenW

Targeting the Hepatitis B cccDNA with a Sequence-Specific ARCUS Nuclease to Eliminate Hepatitis B Virus In Vivo
Cassandra L Gorsuch  1 , Paige Nemec  1 , Mei Yu  2 , Simin Xu  2 , Dong Han  2 , Jeff Smith  1 , Janel Lape  1 , Nicholas van Buuren  2 , Ricardo Ramirez  2 , Robert C Muench  2 , Meghan M Holdorf  2 , Becket Feierbach  2 , Greg Falls  1 , Jason Holt  1 , Wendy Shoop  1 , Emma Sevigny  1 , Forrest Karriker  1 , Robert V Brown  1 , Amod Joshi  1 , Tyler Goodwin  1 , Ying K Tam  3 , Paulo J C Lin  3 , Sean C Semple  3 , Neil Leatherbury  1 , William E Delaney 4th  2 , Derek Jantz  4 , Amy Rhoden Smith  4
Affiliations
Affiliations

    1
    Precision BioSciences Inc., Durham, NC 27701, USA.
    2
    Gilead Sciences, Inc., Foster City, CA 94404, USA.
    3
    Acuitas Therapeutics, Vancouver, BC V6T 1Z3, Canada.
    4
    Precision BioSciences Inc., Durham, NC 27701, USA. Electronic address: [email protected].

    PMID: 35581938 DOI: 10.1016/j.ymthe.2022.05.013

Abstract

Persistence of chronic Hepatitis B (CHB) is attributed to maintenance of the intrahepatic pool of the viral covalently closed circular DNA (cccDNA), which serves as the transcriptional template for all viral gene products required for replication. Current nucleos(t)ide therapies for CHB prevent virus production and spread but have no direct impact on cccDNA or expression of viral genes. We describe a potential curative approach using a highly specific engineered ARCUS nuclease (ARCUS-POL) targeting the Hepatitis B virus (HBV) genome. Transient ARCUS-POL expression in HBV-infected primary human hepatocytes produced substantial reductions in both cccDNA and Hepatitis B surface antigen (HBsAg). To evaluate ARCUS-POL in vivo, we developed episomal adeno-associated virus (AAV) mouse and non-human primate (NHP) models containing a portion of the HBV genome serving as a surrogate for cccDNA. Clinically relevant delivery was achieved through systemic administration of lipid nanoparticles containing ARCUS-POL mRNA. In both mouse and NHP, we observed a significant decrease in total AAV copy number and high on-target indel frequency. In the case of the mouse model, which supports HBsAg expression, circulating surface antigen was durably reduced by 96%. Together, these data support a gene editing approach for elimination of cccDNA toward an HBV cure.

Copyright © 2022 The Author(s). Published by Elsevier Inc. All rights reserved.

StephenW

https://doi.org/10.1016/j.ymthe.2022.05.013

newchinabok

我这辈子看不到这药，目前一期药都和我没半毛关系了

齐欢畅