微滴数字 PCR 检测为临床应用提供肝内 HBV cccDNA 定量工具

StephenW

微滴数字 PCR 检测为临床应用提供肝内 HBV cccDNA 定量工具
林早苗 1 2 , 矶川雅典 1 , 川岛圭吾 1 , 伊藤恭子 1 , Natthaya Chuaypen 3 , Yuji Morine 4 , Mitsuo Shimada 4 , Nobuyo Higashi-Kuwata 5 , Takehisa Watanabe 2 , Pisit Tangkijvanich 3 , Hiroaki Mitsuya 5 6 7 , Yasuhito田中 8 9
隶属关系
隶属关系

    1
    日本名古屋市名古屋市大学医学研究生院病毒学和肝脏科。
    2
    熊本大学生命科学学院胃肠病学和肝病学系，1-1-1 Honjo, Chuo-ku, Kumamoto, 860-8556, Japan。
    3
    泰国曼谷朱拉隆功大学医学院肝炎和肝癌卓越中心。
    4
    德岛大学外科，日本德岛。
    5
    日本东京，国家全球健康与医学研究所中心难治性病毒感染系。
    6
    美国马里兰州贝塞斯达国家癌症研究所国家癌症研究所艾滋病毒和艾滋病恶性肿瘤分部实验逆转录病毒学科。
    7
    日本熊本熊本大学医院临床科学系。
    8
    日本名古屋市名古屋市大学医学研究生院病毒学和肝脏科。 [email protected]。
    9
    熊本大学生命科学学院胃肠病学和肝病学系，1-1-1 Honjo, Chuo-ku, Kumamoto, 860-8556, Japan。 [email protected]。

    PMID：35136096 DOI：10.1038/s41598-022-05882-9

抽象的

共价闭合环状 DNA (cccDNA) 的持续存在是治疗慢性乙型肝炎 (CHB) 的主要障碍。在这里，我们使用液滴数字 PCR (ddPCR) 进行 cccDNA 定量。 cccDNA 特异性 ddPCR 显示出较高的准确性，cccDNA 检测的动态范围为 101 至 105 个拷贝/测定。 ddPCR 比 qPCR 具有更高的敏感性、特异性和精确性。 ddPCR的结果与24只HBV感染的人肝嵌合小鼠（PXB-小鼠）的血清HB核心相关抗原和HBsAg（HBsAg）密切相关。我们证明，在恩替卡韦治疗后的 2 只 PXB 小鼠中，尽管治疗后每个肝细胞的 cccDNA 含量降低，但在肝脏再增殖期间总 cccDNA 含量没有变化。在 6 例 HBV 相关肝细胞癌患者中，ddPCR 在肿瘤和非肿瘤组织中均检测到 cccDNA。在 13 名使用聚乙二醇化干扰素 α-2a 的 HBeAg 阴性 CHB 患者中，在第 48 周时，配对活检的 cccDNA 含量在病毒学应答 (VR) 方面比在非 VR 中更显着降低 (p = 0.0051)。有趣的是，在 HBsAg 清除的 VR 中，cccDNA 水平最低，但在治疗后仍可检测到。总体而言，ddPCR 显示 cccDNA 含量在肝细胞增殖过程中是稳定的，并且即使在血清 HBsAg 清除后仍保持在可量化的水平。

© 2022。作者。

StephenW

Droplet digital PCR assay provides intrahepatic HBV cccDNA quantification tool for clinical application
Sanae Hayashi  1   2 , Masanori Isogawa  1 , Keigo Kawashima  1 , Kyoko Ito  1 , Natthaya Chuaypen  3 , Yuji Morine  4 , Mitsuo Shimada  4 , Nobuyo Higashi-Kuwata  5 , Takehisa Watanabe  2 , Pisit Tangkijvanich  3 , Hiroaki Mitsuya  5   6   7 , Yasuhito Tanaka  8   9
Affiliations
Affiliations

    1
    Department of Virology and Liver Unit, Nagoya City University Graduate School of Medical Sciences, Nagoya, Japan.
    2
    Department of Gastroenterology and Hepatology, Faculty of Life Sciences, Kumamoto University, 1-1-1 Honjo, Chuo-ku, Kumamoto, 860-8556, Japan.
    3
    Center of Excellence in Hepatitis and Liver Cancer, Faculty of Medicine, Chulalongkorn University, Bangkok, Thailand.
    4
    Department of Surgery, Tokushima University, Tokushima, Japan.
    5
    Department of Refractory Viral Infections, National Center for Global Health and Medicine Research Institute, Tokyo, Japan.
    6
    Experimental Retrovirology Section, HIV and AIDS Malignancy Branch, National Cancer Institute, National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA.
    7
    Department of Clinical Sciences, Kumamoto University Hospital, Kumamoto, Japan.
    8
    Department of Virology and Liver Unit, Nagoya City University Graduate School of Medical Sciences, Nagoya, Japan. [email protected].
    9
    Department of Gastroenterology and Hepatology, Faculty of Life Sciences, Kumamoto University, 1-1-1 Honjo, Chuo-ku, Kumamoto, 860-8556, Japan. [email protected].

    PMID: 35136096 DOI: 10.1038/s41598-022-05882-9

Abstract

The persistence of covalently closed circular DNA (cccDNA) poses a major obstacle to curing chronic hepatitis B (CHB). Here, we used droplet digital PCR (ddPCR) for cccDNA quantitation. The cccDNA-specific ddPCR showed high accuracy with the dynamic range of cccDNA detection from 101 to 105 copies/assay. The ddPCR had higher sensitivity, specificity and precisely than qPCR. The results of ddPCR correlated closely with serum HB core-related antigen and HB surface antigen (HBsAg) in 24 HBV-infected human-liver-chimeric mice (PXB-mice). We demonstrated that in 2 PXB-mice after entecavir treatment, the total cccDNA content did not change during liver repopulation, although the cccDNA content per hepatocyte was reduced after the treatment. In the 6 patients with HBV-related hepatocellular carcinoma, ddPCR detected cccDNA in both tumor and non-tumor tissues. In 13 HBeAg-negative CHB patients with pegylated interferon alpha-2a, cccDNA contents from paired biopsies were more significantly reduced in virological response (VR) than in non-VR at week 48 (p = 0.0051). Interestingly, cccDNA levels were the lowest in VR with HBsAg clearance but remained detectable after the treatment. Collectively, ddPCR revealed that cccDNA content is stable during hepatocyte proliferation and persists at quantifiable levels, even after serum HBsAg clearance.

© 2022. The Author(s).

StephenW

https://www.nature.com/articles/s41598-022-05882-9.pdf

chaojiwanglei

这个是不是说明干扰素确实有效？

StephenW

回复 chaojiwanglei 的帖子

不是

snowxyxy

药物治疗对减少肝里的ccDNA数量没啥用大家明白了。“ ddPCR 显示 cccDNA 含量在肝细胞增殖过程中是稳定的” ， 说明啥？感染的肝细胞繁殖中不增加还算不错的消息吧？至少没成倍，不好的是也耗不掉？那就是cccDNA 含量比例下降？