基因编辑（gene editing）

齐欢畅

简介编辑 语音
基因编辑（gene editing），又称基因组编辑（genome editing）或基因组工程（genome engineering），是一种新兴的比较精确的能对生物体基因组特定目标基因进行修饰的一种基因工程技术或过程。
早期的基因工程技术只能将外源或内源遗传物质随机插入宿主基因组，基因编辑则能定点编辑想要编辑的基因。基因编辑依赖于经过基因工程改造的核酸酶，也称“分子剪刀”，在基因组中特定位置产生位点特异性双链断裂（DSB），诱导生物体通过非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HR）来修复DSB，因为这个修复过程容易出错，从而导致靶向突变。这种靶向突变就是基因编辑。
基因编辑以其能够高效率地进行定点基因组编辑， 在基因研究、基因治疗和遗传改良等方面展示出了巨大的潜力。
技术方法编辑 语音
同源重组
同源重组（Homologous recombination）是最早用来编辑细胞基因组的技术方法。同源重组是在DNA的两条相似（同源）链之间遗传信息的交换（重组）。通过生产和分离带有与待编辑基因组部分相似的基因组序列的DNA片段，将这些片段注射到单核细胞中，或者用特殊化学物质使细胞吸收，这些片段一旦进入细胞，便可与细胞的DNA重组，以取代基因组的目标部分。这种方法的缺点是效率极低，且出错率高。
核酸酶
基因编辑的关键是在基因组内特定位点创建DSB。常用的限制酶在切割DNA方面是有效的，但它们通常在多个位点进行识别和切割，特异性较差。为了克服这一问题并创建特定位点的DSB，人们对四种不同类型的核酸酶（Nucleases）进行了生物工程改造。它们分别是巨型核酸酶（Meganuclease）、锌指核酸酶（ZFNs），转录激活样效应因子核酸酶（TALEN）和成簇规律间隔短回文重复（CRISPR / Cas9）系统 [1-2]  。ZFN、TALEN和巨型核酸酶被Nature Methods选为2011年度方法 [3]  。 CRISPR-Cas系统被科学界选为2015年度最佳突破 [4]  。
巨型核酸酶
巨型核酸酶是一种脱氧核糖核酸内切酶，其特征在于它的识别位点较大（12至40个碱基对的双链DNA序列）。因此，该位点通常在任何给定的基因组中仅发生一次。因此，巨型核酸酶被认为是最特异的天然存在的核酸酶。
锌指核酸酶
锌指核酸酶是一个经过人工修饰的核酸酶，它通过将一个锌指DNA结合结构域与核酸酶的一个DNA切割结构域融合而产生。通过设计锌指结构域就可以实现对目的基因的特定DNA序列的靶向切割，这也使得锌指核酸酶能够定位于复杂基因组内的独特的靶向序列。通过利用内源DNA修复机制，锌指核酸酶可用于精确修饰高等生物的基因组。
转录激活样效应因子核酸酶
TALEN是经过基因工程改造后的可以切割特定DNA序列的限制酶。TALEN是通过将一个TAL效应子DNA结合结构域与核酸酶的一个DNA切割结构域融合而获得的。TALENs可以被设计成与几乎任何所需的DNA序列结合，因此当与核酸酶结合时，DNA可以在特定位置进行切割 [5]  。
成簇规律间隔短回文重复
CRISPR-Cas是原核生物免疫系统，赋予原核生物对如存在于质粒和噬菌体中的外来遗传物质的抗性，是一种获得性免疫系统 [6]  。携带间隔序列的RNA有助于Cas（CRISPR相关）蛋白识别并切割外源致病DNA。其它RNA指导的Cas蛋白切割外源RNA [7]  。
CRISPR-Cas系统是应用最广泛的基因编辑工具。
核酸酶的精确度和效率
在上述几种核酸酶中效率最低的是巨型核酸酶，受到其DNA结合元件和切割元件制约，它在每1,000个核苷酸中才能识别一个潜在的靶标 [8]  。开发ZFN克服了巨型核酸酶的局限性，ZFN在每140个核苷酸中可有一个识别位点 [8]  。但因为DNA结合元件的相互影响，巨型核酸酶和ZFN两种方法的精确度都是不可预测的。因此，需要高度专业知识和冗长且昂贵的验证过程。 TALEN是最精确和特异的核酸酶，比前两种方法有更高的效率。因为DNA结合元件由一系列TALE亚基组成，每个亚基具有识别独立于其他亚基的特定DNA核苷酸链的能力，从而产生具有高精度的更高数目的靶位点。生产一个新的TALEN核酸酶大约需要一周时间和几百美元 [8]  。与TALE核酸酶相比，CRISPR核酸酶的精确度略低。这是由于CRISPR-Cas需要在一端拥有一个特定核苷酸以产生CRISPR修复断裂双链的指导RNA。但CRIPSR-Cas已被证明是最快捷、最便宜的方法，只花费不到两百美元和几天的时间 [8]  。CRISPR对ZFN和TALEN方法的一个主要优点是可以使用其~80nt CRISPR sgRNA直接定位不同的DNA序列，而ZFN和TALEN方法都需要对定位到每个DNA序列的蛋白质进行构建和测试 [8]  。
活性核酸酶的脱靶效应可能会在遗传和生物水平上产生潜在的危险。研究发现，ZFNs往往比TALEN方法或CRISPR-Cas具有更多的细胞毒性，而TALEN和CRISPR-Cas的方法往往具有最高的效率和较少的脱靶效应 [9]  。这些核酸酶中，TALEN方法精确度最高 [8]  。
技术应用编辑 语音
基因编辑已经开始应用于基础理论研究和生产应用中，这些研究和应用，有助于生命科学的许多领域，从研究植物和动物的基因功能到人类的基因治疗。下面主要介绍基因编辑在动植物上的应用。
动物基因的靶向修饰
基因编辑和牛体外胚胎培养等繁殖技术结合，允许使用合成的高度特异性的内切核酸酶直接在受精卵母细胞中进行基因组编辑。 CRISPR -Cas9进一步增加了基因编辑在动物基因靶向修饰的应用范围。CRISPR-Cas9允许通过细胞质直接注射（CDI）从而实现对哺乳动物受精卵多个靶标的一次性同时敲除（KO） [10]  。
单细胞基因表达分析已经解决了人类发育的转录路线图，从中发现了关键候选基因用于功能研究。使用全基因组转录组学数据指导实验，基于CRISPR的基因组编辑工具使得干扰或删除关键基因以阐明其功能成为可能 [11]  。
植物基因的靶向修饰
植物基因的靶向修饰是基因编辑应用最广泛的领域。首先可以通过修饰内源基因来帮助设计所需的植物性状。例如，可以通过基因编辑将重要的性状基因添加到主要农作物的特定位点，通过物理连接确保它们在育种过程中的共分离 [12]  ，这又称为“性状堆积”。其次，可以产生耐除草剂作物。比如，使用ZFN辅助的基因打靶，将两种除草剂抗性基因（烟草乙酰乳酸合成酶SuRA和SuRB）引入作物 [13]  。再次，可以用来防治各种病害如香蕉的条纹病毒 [14]  。
此外，基因编辑技术还被应用于改良农产品质量，比如改良豆油品质 [15]  和增加马铃薯的储存潜力。
技术突破编辑 语音
2019年8月27日，美国科学家借助基因编辑技术CRISPR-Cas9，制造出了第一种经过基因编辑的爬行动物——一些小型白化蜥蜴，这是该技术首次用于爬行动物。由于白化病患者经常有视力问题，因此，最新突破有助于研究基因缺失如何影响视网膜发育。 [16]
2020年12月11日，日本厚生劳动省通过其国内首个基因编辑食品的销售申请。这是一种基因编辑的西红柿，含有更多营养成分γ-氨基丁酸，预计最早将于2022年上市销售。领导研究的筑波大学教授江面浩说，基因编辑能大幅缩短作物品种改良时间，可以将原来需要10年的品种改良时间缩短到约1年半。 [17]
未来发展编辑 语音
未来的一个重要目标必须是提高核酸酶的安全性和特异性，提高检测脱靶事件的能力，掌握预防方法。ZFNs中使用的锌指很少完全特异，有些还可能引起毒性反应。对ZFN的切割结构域进行修饰可以降低毒性 [18]  。
此外，要加强对DNA重组和DNA修复机制的认识。
CRISPR的简易性和低成本，使得其获得广泛的研究和应用。由于其精确性和效率，CRISPR和TALEN都有望成为大规模生产中的选择。
疾病治疗编辑 语音
阿尔茨海默病
2021年8月，由香港科技大学副校长叶玉如领导的团队研发出一种新型全脑基因编辑技术，在小鼠模型中证明可改善阿尔茨海默病的病理症状，有潜力发展成阿尔茨海默病的新型长效治疗手段。 [22-23]
研发争议编辑 语音
对首例基因编辑婴儿的社会质疑
2018年11月，中国科学家贺建奎在深圳宣布，他们团队创造的一对名为露露和娜娜的基因编辑婴儿已顺利诞生。这对双胞胎的一个基因经过修改，使她们出生后就能天然抵抗艾滋病。这个世界首例基因编辑婴儿的横空出世，迎来了从科学家群体到普通民众对人类实施基因编辑伦理的正当性甚至事件真实性的普遍质疑 [19]  。
法律规定编辑 语音
2020年12月26日，第十三届全国人民代表大会常务委员会第二十四次会议通过《中华人民共和国刑法修正案（十一）》，在刑法第三百三十六条后增加一条，作为第三百三十六条之一：“将基因编辑、克隆的人类胚胎植入人体或者动物体内，或者将基因编辑、克隆的动物胚胎植入人体内，情节严重的，处三年以下有期徒刑或者拘役，并处罚金；情节特别严重的，处三年以上七年以下有期徒刑，并处罚金。” [20]
2021年2月22日最高人民法院审判委员会第1832次会议、2021年2月26日最高人民检察院第十三届检察委员会第六十三次会议通过的《最高人民法院最高人民检察院关于执行，<中华人民共和国刑法>确定罪名的补充规定（七）》规定了非法植入基因编辑、克隆胚胎罪罪名。 [21]
词条图册 更多图册
概述图册
概述图册(2)
解读词条背后的知识 查看全部

硅谷密探 财经领域创作者
返老还童将成真，斯坦福教授解说“生命编程”技术
如果有一天，艾滋病、乙肝等从地球上消失。如果秃头、肥胖、近视都能够被治疗。如果有一天，我们可以做到上述这样的“生命编程”，那么很多疾病我们将不再感到害怕。最近，亓磊的团队和斯坦福医学院临床医生合作，使用编程的方式来解决骨再生的问题。
2016-11-08546

硅谷密探 财经领域创作者
超速行驶的基因编辑，终于有了“刹车”装置
去年沸沸扬扬的贺建奎“改造双胞胎女婴”事件，谴责声言犹在耳。不过，没有什么能够阻挡，人类对“上帝之手”的向往。事实上，高光过后的基因编辑技术，还在以激进的方式进行着。
2019-07-24383

知识分子 国内领先的科学媒体平台
基因编辑技术在医学应用中大显身手
自2012年，第三代基因技术CRISPR/Cas9被发明以来，它已在全球各地分子生物实验室里广泛地应用。CRISPR/Cas9将在医学应用发挥巨大的作用。本系列上一篇文章请见《基因编辑技术CRISPR的发展简史：从发现到爆油炸》。第三代基因技术CRISPR/Cas克服了传统基因操作的周期长、效率低、应用窄等缺点。
2018-03-23238

知识分子 国内领先的科学媒体平台
若无任何转基因：基因编辑作物在中国该如何监管
转基因，让很多人恐惧的是把外源基因转入农作物，例如杀虫的所谓“毒蛋白”，从而持极端反对态度，即使是在科学界公认没有安全问题的时候。2001年国务院颁发的农业转基因生物安全管理条例最近或将面临新的调整，站在十字路口中国基因编辑作物前途如何？
2018-04-19229

科学探索 提供最新科学新闻与趣图
遗传学家，基因编辑技术可改变一切！
因此，世界许多遗传学家和生化学家普遍认为，这是一项可以改变所有人生命及地球上一切事物的技术，也是一项可以改变未来一切的伟大技术。不过，该技术也面临许多伦理问题
2017-06-03206
1/2
参考资料
1.  Esvelt, K.M., Wang, H.H．Genome-scale engineering for systems and synthetic biology ：Molecular Systems Biology，2013：9 (1), 641. doi:10.1038/msb.2012.66
2.  Puchta, H., Fauser, F．Gene targeting in plants: 25 years later：The International Journal of Developmental Biology，2013：57 (6–8), 629–637. doi:10.1387/ijdb.130194hp
3.  Method of the Year 2011   ．Nature Methods ．2011.12.28[引用日期2019-08-14]
4.  Breakthrough of the Year: CRISPR makes the cut  ．Science．2015.12.17[引用日期2019-08-14]
5.  Boch, J．TALEs of genome targeting：Nature Biotechnology，2011：29 (2), 135–136. doi:10.1038/nbt.1767
6.  Redman, M., King, A., Watson, C., King, D．What is CRISPR/Cas9? Archives Disease in Childhood. ：Education and Practice Edition ，2016：101 (4), 213–215
7.  Mohanraju, P., Makarova, K.S., Zetsche, B., Zhang, F., Koonin, E.V., van der Oost, J．Diverse evolutionary roots and mechanistic variations of the CRISPR-Cas systems：Science ，2016：353 (6299), aad5147. doi:10.1126/science.aad5147
8.  Boglioli, E., Magali, R．Rewriting the book of life: A new era in precision gene editing：Boston Consulting Group (BCG)，2015
9.  Kim, H., Kim, J.S．A guide to genome engineering with programmable nucleases：Nature Reviews Genetics，2014：15 (5), 321–334. doi:10.1038/nrg3686
10.  Ross, P.J., George, W.S., Rajput, S., Daigneault, B.W．Embryonic POU5F1 is Required for Expanded Bovine Blastocyst Formation：Scientific Reports，2018：8 (1), 7753. doi:10.1038/s41598-018-25964-x
展开全部
学术论文 内容来自
邱仁宗.    基因编辑技术的研究和应用:伦理学的视角． 《 VIP 》 ， 2016   殷利眷，胡斯奇，郭斐.    CRISPR-Cas9基因编辑技术在病毒感染疾病治疗中的应用． 《 中国遗传学会|中国科学院遗传与发育生物学研究所 》 ， 2015   李聪，曹文广.    CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术研究进展． 《 cnki 》 ， 2015   孟泽松，王飞飞，王光林等.    CRISPR/Cas9基因编辑技术在肿瘤研究及治疗中的应用． 《 cnki 》 ， 2016   黄妤，王世春.    CRISPR/Cas:新一代基因编辑技术． 《 生命的化学 》 ， 2015