具有定點偶聯功能的HBc病毒樣顆粒的製備與表徵 [中文]

StephenW

[Preparation and characterization of HBc virus like particles with site-directed coupling function]
[Article in Chinese]
Di Liu  1 , Bo Li  1 , Cheng Bi  2 , Hongping Qiao  1 , Xiaoying Wu  1
Affiliations
Affiliations

    1
    Department of Biology and Center for Veterinary Medicine, Taiyuan Normal University, Jinzhong 030619, Shanxi, China.
    2
    Faculty of Science, The University of Sydney, New South Wales 2006, Australia.

    PMID: 32748602 DOI: 10.13345/j.cjb.190534

Abstract in En , Chinese

乙型肝炎病毒核心蛋白HBc，可在体外自组装形成二十面体对称结构的病毒样微粒VLPs。VLPs可将外源序列重复且高密度地展示在表面，VLPs 进入机体后能够快速诱导机体产生针对外源性抗原的特异性体液免疫及细胞免疫应答，具有极强的免疫原性与生物活性。因此，HBc-VLPs 可以作为一种安全、有效的疫苗载体。文中设计了一种能够实现与抗原定点偶联的HBc-VLPs， 并开发了一套高效制备HBc-VLPs 的方法。通过定点突变技术，使翻译后的多肽序列第80 位氨基酸由Ala 变为Cys，在HBc-VLPs的主要免疫显性区域引入一个定点交联位点，构建了原核表达载体pET28a(+)-hbc，表达、纯化获得了高纯度的HBc(A80C) 单体蛋白；在PB 缓冲体系中，HBc(A80C) 蛋白自组装形成HBc-VLPs 纳米粒子。粒度仪的测定结果表明，HBc-VLPs 纳米微粒的平均粒径为29.8 nm，透射电子显微镜观察到HBc-VLPs 形成粒径约为30 nm 的球形微粒，其形态与天然的HBV 微粒相似。以流感病毒M2e 抗原肽为模式抗原，通过Sulfo-SMCC 氨基-巯基双功能交联剂，将M2e 定点连接于HBc-VLPs 通过突变引入的Cys 残基处，制备了M2e-HBc-VLPs 模式疫苗，通过细胞荧光示踪，验证了HBc-VLPs 结构的完整性与M2e 的正确交联。动物免疫实验表明该疫苗能够有效刺激小鼠产生抗原特异性的IgG 抗体，验证了疫苗载体HBc-VLPs 的有效性。研究结果为HBc-VLPs 作为疫苗载体的研究奠定了基础， 能够促进HBc-VLPs 载体疫苗的研发以及HBc-VLPs 在其他领域的应用。.

Keywords: hepatitis B virus core protein; site directed coupling; vaccine vector; virus-like particles.