Toll樣受體雙重作用激動劑是PBMC產生的細胞因子的有效誘導劑

StephenW

Toll-like receptor dual-acting agonists are potent inducers of PBMC-produced cytokines that inhibit hepatitis B virus production in primary human hepatocytes
Vaclav Janovec  1   2 , Jan Hodek  2 , Kamila Clarova  2 , Tomas Hofman  1   2 , Pavel Dostalik  1 , Jiri Fronek  3   4 , Jaroslav Chlupac  3   4 , Laurence Chaperot  5 , Sarah Durand  6 , Thomas F Baumert  6   7 , Iva Pichova  2 , Barbora Lubyova  2 , Ivan Hirsch  8   9   10 , Jan Weber  11
Affiliations
Affiliations

    1
    Department of Genetics and Microbiology, Faculty of Science, Charles University, BIOCEV, 25150, Vestec, Czech Republic.
    2
    IOCB & Gilead Research Center, Institute of Organic Chemistry and Biochemistry of the Czech Academy of Science, 16610, Prague, Czech Republic.
    3
    Transplantation Surgery Department, Institute for Clinical and Experimental Medicine, 14021, Prague, Czech Republic.
    4
    Department of Anatomy, Second Faculty of Medicine, Charles University, 15006, Prague, Czech Republic.
    5
    CNRS UMR5309, Inserm U1209, CHU Grenoble Alpes, IAB, EFS, Université Grenoble Alpes, 38000, Grenoble, France.
    6
    Inserm, Institut de Recherche Sur Les Maladies Virales Et Hepatiques UMRS 1110, Universite de Strasbourg, 67000, Strasbourg, France.
    7
    Pole Hepato-Digestif, Institut Hospitalo-Universitaire, Hopitaux Universitaires de Strasbourg, 67000, Strasbourg, France.
    8
    Department of Genetics and Microbiology, Faculty of Science, Charles University, BIOCEV, 25150, Vestec, Czech Republic. [email protected].
    9
    IOCB & Gilead Research Center, Institute of Organic Chemistry and Biochemistry of the Czech Academy of Science, 16610, Prague, Czech Republic. [email protected].
    10
    Institute of Molecular Genetics of the Czech Academy of Sciences, 14220, Prague, Czech Republic. [email protected].
    11
    IOCB & Gilead Research Center, Institute of Organic Chemistry and Biochemistry of the Czech Academy of Science, 16610, Prague, Czech Republic. [email protected].

    PMID: 32728070 DOI: 10.1038/s41598-020-69614-7

Abstract

Recombinant interferon-α (IFN-α) treatment functionally cures chronic hepatitis B virus (HBV) infection in some individuals and suppresses virus replication in hepatocytes infected in vitro. We studied the antiviral effect of conditioned media (CM) from peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) stimulated with agonists of Toll-like receptors (TLRs) 2, 7, 8 and 9. We found that CM from PBMCs stimulated with dual-acting TLR7/8 (R848) and TLR2/7 (CL413) agonists were more potent drivers of inhibition of HBe and HBs antigen secretion from HBV-infected primary human hepatocytes (PHH) than CM from PBMCs stimulated with single-acting TLR7 (CL264) or TLR9 (CpG-B) agonists. Inhibition of HBV in PHH did not correlate with the quantity of PBMC-produced IFN-α, but it was a complex function of multiple secreted cytokines. More importantly, we found that the CM that efficiently inhibited HBV production in freshly isolated PHH via various cytokine repertoires and mechanisms did not reduce covalently closed circular (ccc)DNA levels. We confirmed our data with a cell culture model based on HepG2-NTCP cells and the plasmacytoid dendritic cell line GEN2.2. Collectively, our data show the importance of dual-acting TLR agonists inducing broad cytokine repertoires. The development of poly-specific TLR agonists provides novel opportunities towards functional HBV cure.
Grant support

    GA17-15422S/Grantová Agentura České Republiky
    SVV 260426/Grantová Agentura, Univerzita Karlova
    CZ.1.05/1.1.00/02.0109/European Regional Development Fund
    LQ1604/Ministry of Education, Youth and Sports of the Czech Republic
    ANR-10-LABX-0028_HEPSYS/Agence Nationale de la Recherche

StephenW

Toll樣受體雙重作用激動劑是PBMC產生的細胞因子的有效誘導劑，可抑制人類原代肝細胞中的乙型肝炎病毒產生
瓦茨拉夫·賈諾維奇1 2，揚·霍德克2，卡米拉·克拉羅瓦2，托馬斯·霍夫曼1 2，帕維爾·多斯塔利克1，吉里·弗羅內克3 4，賈羅斯拉夫·丘帕克3 4，勞倫斯·夏佩羅5，莎拉·杜蘭德6，托馬斯·F·鮑默特6 7，伊娃·皮喬娃2， Barbora Lubyova 2，伊万·赫希（Ivan Hirsch）8 9 10，揚·韋伯（Jan Weber）11
隸屬關係
隸屬關係

    1個
    查爾斯大學理學院遺傳與微生物學系，BIOCEV，25150，捷克共和國維斯泰克。
    2
    IOCB和吉利德研究中心，捷克科學院有機化學與生物化學研究所，16610，捷克布拉格。
    3
    14021，捷克共和國布拉格，臨床和實驗醫學研究所移植手術科。
    4
    查爾斯大學第二醫學院解剖學系，捷克共和國布拉格15006。
    5
    CNRS UMR5309，Inserm U1209，CHU格勒諾布爾阿爾卑斯山，IAB，EFS，格勒諾布爾阿爾卑斯大學38000，法國格勒諾布爾。
    6
    法國，斯特拉斯堡大學，Inserm，Rescheche Sur Les Maladies Virales Et Hepatiques UMRS 1110，Universite de Strasbourg，67000。
    7
    斯特拉斯堡大學醫院的大學醫院大學波蘭人Hepato-Digestif，67000，法國史特拉斯堡。
    8
    查爾斯大學理學院遺傳與微生物學系，BIOCEV，25150，捷克共和國維斯泰克。 [email protected]。
    9
    IOCB和吉利德研究中心，捷克科學院有機化學與生物化學研究所，16610，捷克布拉格。 [email protected]。
    10
    捷克科學院分子遺傳研究所，14220，捷克共和國布拉格。 [email protected]。
    11
    IOCB＆Gilead研究中心，捷克科學院有機化學與生物化學研究所，16610，捷克共和國布拉格。 [email protected]。

    PMID：32728070 DOI：10.1038 / s41598-020-69614-7

抽象

重組干擾素-α（IFN-α）治療在功能上可治愈某些個體的慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染並抑制病毒在體外感染的肝細胞中的複制。我們研究了由Toll樣受體（TLR）2、7、8和9激動劑刺激的外周血單個核細胞（PBMC）的條件培養基（CM）的抗病毒作用。我們發現PBMC的CM由雙作用TLR7刺激/ 8（R848）和TLR2 / 7（CL413）激動劑比單作用TLR7（CL264）或TLR9刺激的PBMC中的CM更能有效抑制HBV感染的原代人肝細胞（PHH）的HBe和HBs抗原分泌（CpG-B）激動劑。 PHH對HBV的抑製作用與PBMC產生的IFN-α的量無關，但它是多種分泌細胞因子的複雜功能。更重要的是，我們發現通過各種細胞因子庫和機制有效抑制新鮮分離的PHH中HBV產生的CM並沒有降低共價閉合環（ccc）DNA水平。我們用基於HepG2-NTCP細胞和漿細胞樣樹突狀細胞系GEN2.2的細胞培養模型證實了我們的數據。總的來說，我們的數據顯示了雙重作用的TLR激動劑誘導廣泛的細胞因子庫的重要性。多特異性TLR激動劑的開發為功能性HBV治愈提供了新的機會。
贈款支持

    GA17-15422S /GrantováAgentura捷克共和國
    SVV 260426 /GrantováAgentura，Univerzita Karlova
    CZ.1.05 / 1.1.00 / 02.0109 /歐洲區域發展基金
    LQ1604 /捷克共和國教育，青年和體育部
    ANR-10-LABX-0028_HEPSYS /法新社

StephenW

https://www.nature.com/articles/s41598-020-69614-7.pdf