人肝细胞的分裂也会引发cccDNA 的大量丢失

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人原代肝细胞增殖和预防乙肝病毒再感染可有效清除核 内cccDNA：体内研究
原创 GUT肝脏时讯 GUT肝脏时讯 2018-07-30


Lena Allweiss,Tassilo Volz,Katja Giersch,Janine Kah,Giuseppina Raffa,Joerg Petersen,Ansgar W Lohse,ConcettaBeninati,Teresa Pollicino,Stephan Urban,Marc Lütgehetmann,Maura Dandri

本期负责人：茅益民  上海交通大学医学院附属仁济医院消化内科

审校：黄力毅  广西医科大学附属第一医院传染病科  

翻译：贾红宇  浙江大学医学院附属第一医院感染科

摘要

目的：不分裂的肝细胞细胞核中共价闭合环状DNA（covalently closed circular DNA, cccDNA）的稳定性是HBV 持续存在的关键决定因素。与之相反，对动物嗜肝病毒的研究表明，肝细胞的增殖更新可减少cccDNA 的载量，但对HBV 感染的人原代肝细胞（primary human hepatocytes, PHHs）在体内的增殖能力以及在分裂的PHH 中的cccDNA 表达情况尚缺乏了解。本研究旨在探讨人肝细胞分裂在体内对cccDNA稳定性的影响。

方法：将HBV 感染的人源化小鼠的肝细胞连续移植至单纯小鼠受者体内，诱导PHH 增殖。采用定量PCR、免疫荧光和RNA 原位杂交技术检测细胞增殖和病毒学变化。通过凝胶分离和深度测序分析病毒整合情况。

结果：PHH 的增殖显著降低了所有感染标志物水平，包括cccDNA（ 中位数2.4log/PHH）。值得注意的是，细胞分裂导致子细胞cccDNA 稀释和肝内cccDNA 缺失。然而，HBV 能在散在的、不增殖的人肝细胞中存活，且随着肝细胞增殖减弱，病毒学标志物水平会反弹。这是因为使用受体抑制剂myrcludex-B 或核苷类似物治疗阻止了病毒的传播和肝内cccDNA 的积累，而导致静息的PHHs 再感染。在供体和受体小鼠中均检测到病毒整合，但似乎对抗原的产生没有作用。

结论：研究结果表明，即使没有细胞溶解机制的参与，人肝细胞的分裂也会引发cccDNA 的大量丢失。这一过程可能是急性感染具有自限性的基础，因此应考虑将肝细胞分裂与受体抑制剂联合应用于未来抗HBV 的治疗策略中。

Proliferation ofprimary human hepatocytes and prevention of hepatitis B virus reinfection efficientlydeplete nuclear cccDNA in vivo