重磅EASL2019：新研究发现cccDNA几个月内便可完成全面更新

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EASL2019：新研究发现cccDNA几个月内便可完成全面更新
2019-04-04来源：一诺医学作者：略晓薛

目前慢性乙型肝炎使用标准治疗方法治愈率较低被认为是由于无法消除患者的cccDNA病毒池。目前尚不清楚这种持久性是由于cccDNA的寿命还是由于重新感染或细胞内扩增而获得有效补充导致的。

Assembly Biosciences公司等机构研究人员通过优化方法以分析慢乙肝患者血清和肝脏活组织检查中不同的cccDNA，pgRNA和病毒DNA群体。设计泛基因型引物以扩增HBV逆转录酶（RT）基因。

来自snapfrozen肝脏活组织检查的HBV cccDNA通过改良的Hirt方法提取，用T5核酸外切酶消化，通过PCR扩增。 用QIAamp MinElute病毒试剂盒从Hirt提取流中纯化肝内rcDNA和HBV RNA。

使用QIAamp MinElute Virus试剂盒从患者血清中提取HBV DNA和pgRNA。将等分试样用DNase I消化并用作RT-PCR的模板。

使用SequencherTM软件（基因代码）分析PCR和RT-PCR片段的Sanger测序结果，并通过TAcloning后的群体测序或基于克隆的测序计算拉米夫定/替比夫定抗性（NucR）突变的百分比。

回顾性地监测NucR突变的出现和消失，作为来自两个临床研究（EFFORT和ML18376）的配对患者肝脏和血清样品的患者组中cccDNA转换/进化的敏感遗传标记。

对于这种遗传方法的成功至关重要，研究人员发现在血清pgRNA，肝内HBV RNA和cccDNA样本中发现的群体序列之间存在密切关系，在肝活检样本不可用的时间点验证血清RNA作为cccDNA序列的替代标记。

观察到的NucR病毒变异体（DNA）的变化表明野生型pgRNA和cccDNA群体几乎完全更新，观察到一些病人血清HBV DNA，pgRNA和cccDNA群体在WT和NucR群体之间在短短3-4个月内转换。

影响适合度的补偿性突变可能是突破性患者中完整病毒遗传更新所观察到的时间线范围。 在所有病例中，如先前预测的那样，周转率是在几个月而不是如先前所测量的几年。

综上，血清pgRNA被验证为cccDNA群体的替代遗传生物标志物。 总体而言，cccDNA池似乎是动态的，现有种群迅速衰减，并在短短3-4个月内完成周转。 这些发现支持了可以完全抑制病毒复制并抑制新cccDNA分子再生的方案的有限治疗期的潜力。



来源：2019EASL 论文集THU-216

Rapid turnover of HBV cccDNA in nucleoside-treated chronic hepatitis B patients during drug resistance emergence and breakthrough

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血清pgRNA被验证为cccDNA群体的替代遗传生物标志物。 总体而言，cccDNA池似乎是动态的，现有种群迅速衰减，并在短短3-4个月内完成周转。 这些发现支持了可以完全抑制病毒复制并抑制新cccDNA分子再生的方案的有限治疗期的潜力。

hp121

总而言之，是个好消息？？

newchinabok

hp121 发表于 2019-4-4 16:10
总而言之，是个好消息？？

不太认可，如果是真实的，核苷药用5—10年了病人，几乎没有cccdna，为什么还不能治愈，停药还会反弹呢？

fuke

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完全抑制病毒复制并抑制新cccDNA分子再生

newchinabok

fuke 发表于 2019-4-4 17:02
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完全抑制病毒复制并抑制新cccDNA分子再生

完全抑制是一句空话，很难做到。核苷没有完全抑制，核苷加核衣壳，我想也不能完全抑制，所以如果耗尽cccdna，治愈，就不是几个月能做到的。

fuke

核衣壳可以抑制ccdna再生，现在的新药越来越接近本源了。治愈不是梦。

sky8989

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多少年了?咋就没出现呢。

齐欢畅

可以通过cccdna的解旋/复位抑制剂来控制病毒。cccdna要产生蛋白时，需要转录rna，如果抑制cccdna解旋，或者抑制cccdna的解旋复位，就可以使cccdna得到抑制。
而且cccdna似乎存在一种动态平衡，自动补充，普通的病毒dna和cccdna之间存在互相转化的平衡，抑制病毒复制，可以使平衡向减少cccdna的方向移动。

StephenW

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如果TDF / ETV可以100％抑制逆转录,也没有新的 cccdna. newchinabok是对的.

还有"cccDNA几个月内便可完成全面更新" 仅适用于更换cccDNA的!
药物抗性突变不会同时发生在所有感染的肝细胞中, 只会发生在少数感染的肝细胞中.这项研究表明突变的hbvdna可以在肝脏中快速传播，突变的hbvdna（cccDNA）可以在几个月内取代现有的未突变的cccDNA.

该研究未显示无新的cccDNA, cccDNA可在几个月内消除.