AASLD2017在研乙肝新药之衣壳抑制剂篇

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盘点】AASLD2017在研乙肝新药之衣壳抑制剂篇（1）
原创 2017-10-24 略晓薛 HeparSpace
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昨天，我们把在本届美国肝病学会年会上发表的一类在研乙肝新药——病毒进入抑制剂的信息进行了简要的归纳。病毒进入抑制剂主要是针对乙肝病毒进入肝细胞前阶段，主要作用是阻断 HBV 暴露后感染的蔓延。

今天我们来看在本届肝病年会上公布的另一类在研乙肝新药信息——HBV 衣壳抑制剂（capsid inhibitor），这类药物主要通过干扰病毒DNA蛋白的遮蔽来实现对乙肝病毒的控制。

一 、AB-423

AB-423 是 Arbutus 公司研发的一款用于慢乙肝治疗的口服、具有高度选择性的HBV 衣壳抑制剂。临床前研究结果表明，AB-423 对HBV复制表现出有效抑制作用，AB-423 调节细胞核中 cccDNA 池的作用是针对 HBV 循环生命周期的两个不同阶段：rcDNA 衣壳化和 cccDNA 的形成。与核苷（酸）类似物（恩替卡韦和替诺福韦）和RNAi制剂（ARB-1467和ARB-1740）在细胞培养系统中的联合用药研究显示出相加/协同抗病毒活性。

在本次年会上 Arbutus 公司公布了该药在 AB-423-001 研究中的单剂量队列研究结果（编号：917）。该研究为评估 AB-423 单剂量和多剂量递增用药在健康志愿者中的安全性、耐受性和药代动力学（PK）研究。

AB-423-001 研究是一项在志愿者中进行的随机双盲、安慰剂对照单剂量和多剂量递增研究。纳入的志愿者年龄在18-55岁之间，BMI 指数在18-32 kg/m2之间。每个单剂量队列包含8名受试者，其中6名为用药人员，另有2名安慰剂对照人员，AB-423的用药剂量分别为12.5,37.5, 100 和 200mg。受试者用药后在室内进行观察72小时，之后可以户外活动并随访至第14天。通过身体检查，生命体征，临床实验室参数，ECG和不良事件报告，在整个研究过程中不断监测受试者的安全性。收集用药72小时内的血样进行 AB-423 和主要代谢物 ARB-168554，ARB-168711 和 ARB-168735 的药代动力学检测。通过有效的LC / MS / MS方法获得血浆浓度。派生非隔室PK，并通过剂量制备总结统计量。



所有受试者（32名）均为男性，平均年龄为 35.6岁，平均 BMI 为 25.6 kg/m2。大多数为白人（90.6％），非西班牙裔或拉丁裔（78.1％）。试验过程中没有出现死亡，严重不良反应事件或因为不良反应事件终止研究的受试者。其中在6名受试者中有7次不良反应事件报道考虑跟 AB-423 有关。所有的不良反应时间均为轻度和/或在截止随访的第14天前获得解决。最常报告的AE为松散/软粪便（N = 2）。没有临床相关的实验室，心电图或生命体征或身体检查结果异常。AB-423 的单剂量最大浓度（Cmax）和浓度 - 时间曲线下面积（AUC）在很大程度上与 200mg 成正比（如上表）。ARB-168554，ARB-168711和ARB-168735 的代谢率分别在各个剂量水平中分别为2.0,0.6和0.8。

上数据表明，AB-423在单次剂量高达200mg时仍表现出具有良好的耐受性，同时具有跟表观剂量成比例的PK。有利的安全性和PK特征支持更高剂量和多剂量AB-423给药的进一步研究评估。

二、GLS4JHS（编号：920）

GLS4JHS 是一种新型的二氢嘧啶类抗病毒药物，该药物能够干扰乙肝病毒的核心颗粒的组装。其结构和抗HBV机制类似于Bay41-4109。由于 CYP3A4 酶的诱导，GLS4JHS 单独用药不能达到预期的血液中抗病毒效果的浓度。利托那韦（Ritonavir）可以抑制肝酶从而改善GLS4JHS的暴露，降低剂量和使用频率，进而提高抗HBV效果。为评估 GLS4JHS 联合 Ritonavir 的抗病毒活性，耐药性，药代动力学（PK），安全性和耐受性，来自吉林医科大学第一附属医院的研究人员进行了一项双盲，随机，平行，恩替卡韦对照研究。

24名慢性乙型肝炎病毒感染者按照1：1：1比例随机接受28天的GLS4JHS（120 mg QD，240 mgQD）联合利托那韦（100 mg QD）或恩替卡韦用药观察。评估了在40天内的抗病毒活性，药代动力学（PK），安全性和耐受性。

研究结果显示，28天治疗后，GLS4JHS 120 mg, 240mg 和恩替卡韦各组 HBV DNA 的平均下降分别为 -1.42, -2.13 和 -3.5 log10 ；HBsAg 下降分别为： -0.06, -0.14, -0.33 log10 IU/mL； HBeAg 分别下降为：-0.25, -0.30, -0.43 log10 IU/mL。大多数患者在最后一次治疗后出现病毒反弹。病毒反弹与治疗终止有关，特别是GLS4JHS组。PK曲线支持每日一次给药，在给药后2.5-3.4小时达到峰值血浆浓度，并且在最后一次剂量用药后的平均终末半衰期为64.3-67.3小时。在每日给药6天后达到稳态水平。不同组间的累积率相似（1.3-1.9），表明累积较低。GLS4JHS暴露（AUC和Cmax）和剂量之间的关系不是呈现线性的，斜率分别为0.55和0.84。在所有剂量组中GLS4JHS耐受性良好。大多数不良事件是轻度的，并且在没有治疗的情况下可以恢复或改善。生命体征，实验室或心电图参数没有显著的临床相关变化。

研究结论认为，GLS4JHS和利托那韦联合用药耐受性良好，并且在HBV慢性感染的患者中能使HBV-DNA水平快速和显著的降低。基于这些数据，推荐GLS4JHS 120mg用于在II期临床试验中进行进一步评价。

三、ABI-H0731

ABI-H0731 是Assembly公司在研的一种新型核心蛋白变构调节剂(CpAM)，能选择性的靶向病毒核心蛋白，该 HBV 蛋白涉及 HBV 生命周期中多个步骤包括 cccDNA 的形成。在基于细胞的测定中，ABI-H0731在亚微摩尔浓度下抑制HBV复制。

此次发表的结果为在48位健康志愿者（21-47岁）（50％男性，96％白种人）中评估了ABI-H0731的安全性，耐受性和药代动力学（PK）研究数据。5个序贯单递增剂量队列，每个队列含8名受试者（6：2 活性：安慰剂），分别每天接受 100,300（空腹和饭后），600和1000mg ABI-H0731 用药。随后，还评估了2组多剂量递增（7天）队列（800mg QD和800mg BD）。安全评估包括身体检查，不良事件（AE）监测，心电图和临床安全实验室（包括血液学，血清化学和尿分析）。安全评估包括身体检查，不良事件（AE）监测，心电图和临床安全实验室检测（包括血液学，血清化学和尿分析）。对所有队列的血浆取样进行强化PK检测。

ABI-H0731在所有队列中耐受性良好。所有患者均完成了研究给药和评估。没有药物相关的重度或严重临床治疗急性AE（TEAE）。认为可能相关的TEAE包括轻度头痛和短暂性皮疹（1名受试者为800 mg QD，2名受试者为800 mg BD）。TEAE均较为温和/或与研究药物无关。治疗中紧急实验室异常不常见，暂时性和/或被认为临床上不显著。PK结果表明，ABI-H0731被快速且广泛地吸收，消除半衰期为〜24小时。药物暴露显著超过体外EC50，平均最大浓度（Cmax）和曲线下面积（AUC 0-tau）值分别为654至14,900ng / ml和7,501至125,908ng.hr/mL。中等脂肪的膳食使Cmax增加约60％，AUCinf增加约45％。与其半衰期一致，在第1天和第7天之间分别观察到QD和BD剂量的〜1.8倍和2.9倍的积累。暴露通常以剂量比例的方式增加，在最高剂量水平下观察到的剂量比例吸收小于用药剂量。

ABI-H0731是一种新型，耐受性良好的CpAM，在空腹和饭后状态下具有良好的口服PK性质。 ABI-H0731口服给药导致血浆浓度预计会提供有效和延长的HBV复制抑制。ABI-H0731目前正在慢乙肝患者中开展Phase 1b期临床研究

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盘点】AASLD2017在研乙肝新药之衣壳抑制剂篇（2）
原创 2017-10-25 略晓薛 HeparSpace
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接上文，昨天我们介绍了在本次年会上公布的3款在研乙肝新药的消息，分别是衣壳抑制剂AB-423、GLS4JHS、ABI-H0731（详情请看：AASLD2017在研乙肝新药之衣壳抑制剂篇（1）），今天继续将剩余的几款衣壳抑制剂的消息进行介绍。

四、GLS4（编号：937）

杂环二氢嘧啶（HAP）化合物通过阻断HBV核心抗原（HBcAg）二聚体装入衣壳中来抑制乙型肝炎病毒（HBV）。然而，HAP对预先形成的HBV衣壳的稳定性和功能的影响尚未有深入理解，北京大学人民医院等研究机构的研究人员对该作用进行了研究，相关结果发表在了本次2017AASLD上。

通过使用HBV稳定表达的HepAD38细胞和非细胞生物物理测定来研究GLS4对HBV衣壳的组装和拆解的影响。在HBV感染的HepG2-NTCP细胞中评估GLS4和恩替卡韦（ETV）对形成共价闭合环状DNA（cccDNA）的抑制作用。

在HepAD38细胞中，GLS4诱导HBcAg的核周聚集和加速降解，随后高效阻断衣壳组装。值得注意的是，GLS4治疗还使得核衣壳在天然琼脂糖凝胶上迁移速度变慢，并且在细胞中能使解预先形成的衣壳快速降。核衣壳（NC）的进一步分析表明，GLS4特异性引起含有双链DNA的成熟NC的分解和降解，而含有pgRNA或单链DNA的未成熟NC不受影响。来自非细胞生物物理测定的数据表明GLS4可以直接诱导与Cp149蛋白质组装的预先形成的衣壳的破坏。基于HepG2-NTCP的HBV感染检测显示，病毒接种前用GLS4代替ETV治疗强烈抑制了cccDNA 的从头形成，并伴随降低了HBsAg和HBeAg的产生。

综合起来，在本研究中表明，GLS4可以双重调节HBV衣壳的装配和分解，对cccDNA形成的深度抑制效用优于核苷类似物。这种衣壳抑制剂的开发可能是实现更好地控制HBV感染的有利策略。

五、JNJ-379（编号：940）

JNJ-379 是一款 Janssen 公司的在研乙肝新药，在HBV复制细胞系以及HBV感染的PHH上能有效的抑制HBV复制。此外，当与病毒接种物一起添加时，JNJ-379对PHH中的细胞内HBV RNA和抗原分泌具有影响，表明该化合物能抑制cccDNA库的建立。

在已经完成的 Phase 1 期部分研究中显示，JNJ-379 在健康志愿者中剂量高达600mg QD 仍然耐受性良好，而在多剂量 150mg Bid 两天，随后继续使用100mg QD 药物耐受性依然良好。此次2017AASLD上公布的是该药用于慢乙肝患者中的 Phase 1 期研究中的抗病毒效用结果以及评估其对核心氨基酸（aa）取代的影响。

在一组53个不同的临床分离株（代表 HBV 基因型从 A-H）中测试了JNJ-379的抗HBV活性。基于从公共数据库获得的序列合成构建体，将其以1.1-和1.3mer克隆到pcDNA3.1骨架中，并在HepG2细胞的瞬时HBV复制测定中将其与基因型 D 参考构建体（NCBI ID V01460）进行比较并使用qPCR读出。 此外，在pTRE-HBVT 骨架中测试了具有CAM结合结构域突变的定点突变体。

结果显示，相较于基因型 D 序列，隔离区（N = 53）包含50个独特的HBV核心序列，其相互之间至少有1个aa发生变化，而在核心组装域（aa1-149）中具有1至21个aa发生变化。所有基因型的JNJ-379的中值EC 50值基因型分别为10nM至33nM之间，而对于基因型 D 参考构建体为17nM。在核心aa位置33（T33N）处具有多态性的一个分离物显示JNJ-379的EC 50值为5,160nM，而核苷（酸）类似物则仍保留完全活性。核心aa取代T33N，Y118F和T128I分别将JNJ-379抗HBV活性降低78-，6.9-和19-倍，而D29G，T33S，I105T和T114I导致2.1至2.9倍的下降。这些替代在来自公共数据库的7600个HBV核心序列中非常罕见，频率范围从T33N的0.03％到T114I的0.9％。JNJ-379对携带核苷（酸）类似物耐药突变的分离株以及具有基础核心启动子（BCP）和/或前核（PC）突变的分离株（分别为12,16和12nM的中值EC 50值）保留活性）。

从上数据表明，JNJ-379是一种有效的 HBV 衣壳装配调制剂（CAM），通常对广泛的多种基因型A-H临床分离物保持完全活性，包括存在核苷（酸）类似物耐药突变或BCP / PC突变。在29,33,105,114,118和128位置假定的HAP结合口袋内的HBV核心aa取代导致JNJ-379的活性降低。这些变异在HBV序列数据库中很少见。JNJ-379目前处于 phase 1期临床开发。

六、Arbutus 优化出效力更强的新一代衣壳抑制剂（编号：953）

核心蛋白的HBV前基因组（pg）RNA包膜的过程对于病毒复制是必需的，并且对于病毒基因组合成，感染性病毒粒子产生和维持核cccDNA水平至关重要。通过小分子衣壳抑制剂靶向衣壳装配在体外，体内和慢性乙型肝炎患者中转化为抗病毒活性，为开发与核苷（酸）类似物不同作用机制的新型抗HBV药物提供了有效的靶标。Arbutus 公司的研发人员已经优化了一系列拥有药物样专利的新型小分子衣壳抑制剂，并在体外和体内评价它们的抗病毒活性。

在HBV细胞培养模型中评估抗病毒活性，使用bDNA或qPCR测定进行定量检测，并使用细胞滴度球蛋白试剂进行细胞毒性测定。使用生物化学测定来评估化合物对衣壳装配的活性。 使用X射线晶体学来阐明核心蛋白CpY132A上的复合结合位点，并指导效能优化。使用HepAD38细胞培养系统测定化合物对HBV pgRNA壳化的作用。使用流体动力注射HBV小鼠模型测定选择类似物的体内抗病毒活性。

通过应用传统药物化学结构（利用活性关系和结构引导药物设计，以产生在50nM的病毒复制范围具有体外EC50值的化合物），优化出具有药物样专利和抗病毒效力的新型化学系列的衣壳抑制剂。HepAD38细胞的作用机制研究表明，该系列的代表化合物抑制了pgRNA的壳化，而不影响细胞内的pgRNA或核心蛋白水平。与组装缺陷型核心蛋白突变体结合的代表性化合物的X射线晶体学数据鉴定显示具有与其他已知衣壳抑制剂（即，在相同核心蛋白二聚体：二聚体界面处）相似的结合位点，并通过进一步的静电作用和增加的结合亲和力提供了改善的效力。在7天的流体动力注射HBV小鼠模型中，代表性化合物的口服给药显示出强烈的剂量依赖性抗病毒活性，血清HBV DNA与载体对照相比，具有高达〜2.5log降低。

上述结果表明，新型化学系列化合物代表新一代的衣壳抑制剂，在HBV模型系统中表现出良好的药物性质和抗病毒活性。