NIM811抑制实验性肝纤维化作用机制的研究

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NIM811抑制实验性肝纤维化作用机制的研究
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研究背景：肝纤维化是多种慢性肝病如病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪肝、中毒性肝病、自身免疫性肝病等疾病所共有的组织学变化,是肝脏损害后的一种修复过程,然而肝纤维化的进行性发展最终可导致肝硬化、肝癌等严重疾病,因此预防及治疗肝纤维化至关重要。NIM811(N-甲基-4-异亮氨酸环孢菌素,N-methyl-4-isoleucine cyclosporin)是环胞素A的结构类似物,却无环胞素A的免疫抑制作用,可在体外可发挥抗纤维化作用。

　　 因此,本研究初步探讨NIM811在体内是否也具有抗纤维化作用,及其可能作用机制。

　　 材料和方法

　　 1.动物实验采用雄性Wistar大鼠CCI4腹腔注射(6周)诱导肝纤维化模型,以不同剂量的NIM811灌胃预防给药。评价NIM811对于肝组织羟脯氨酸含量及肝病理组织学分级的治疗作用；提取肝组织mRNA、总蛋白,采用real-time PCR及western-blot方法分别检测NIM811对肝组织纤维化指标(Ⅰ型胶原、α-SMA、MMP13、TIMP-1)及TGF-β信号转导通路(TGF-β1、TβR-Ⅰ、p-Smad1/5/8、p-Smad2、p-Smad3、Smad7、Id1)的影响；

　　 2.观察NIM811对大鼠HSC-T6细胞系纤维增生的影响。采用MTT法观察NIM811对HSC-T6细胞抑制率的影响,选取细胞存活率>90％浓度作为后续实验所用的最高药物浓度。不同浓度NIM811作用于HSC-T6细胞18h,提取细胞总蛋白、mRNA,收集细胞上清,real-time PCR法检测细胞外基质相关基因(Ⅰ型胶原、MMP13、TIMP-1)的改变；采用ELISA方法检测HSC-T6细胞分泌到培养上清液中的Ⅰ型胶原、MMP13、TIMP-1蛋白含量及NIM811的干预作用；real-timePCR、western-blot方法分别检测HSC-T6细胞系α-SMA基因及蛋白的改变；

　　 3.在体外观察NIM811对TGF-β信号转导通路的影响。采用Real-time PCR方法检测NIM811对HSC-T6细胞TGF-β1 mRNA的影响,ELISA方法检测HSC-T6细胞分泌到培养上清液中TGF-β1蛋白含量及NIM811的干预作用。Real-timePCR及western-blot方法分别检测NIM811对HSC-T6细胞TGF-β信号转导通路指标(TβR-Ⅰ、Smad1、Smad7、Id1)基因及蛋白的影响。

　　 结果:

　　 1.在动物模型中,NIM811可以下调CCI4诱导的大鼠肝纤维化分级,降低肝组织羟脯氨酸含量,且NIM8110mg/kg组预防纤维化效果最显著。NIM811可抑制大鼠肝组织Col Ⅰ mRNA,下调肝组织中α-SMA mRNA及蛋白的表达。NIM81110mg/kg还可上调MMP13/TIMP-1 mRNA的比值。在对TGF-β信号转导通路的影响方面,NIM811可下调肝组织TGF-β1 mRNA、下调肝组织TβR-Ⅰ、Id1 mRNA和蛋白的表达,抑制p-Smad1/5/8、p-Smad2和p-Smad3蛋白,并上调Smad7蛋白的表达。

　　 2.NIM811可抑制HSC-T6细胞Col Ⅰ mRNA表达,下调细胞上清中Col Ⅰ蛋白含量；抑制HSC-T6细胞α-SMA mRNA及蛋白的表达,但NIM811未上调MMP13/TIMP-1 mRNA比值。

　　 3.在抗纤维化的机制研究中,NIM811可下调HSC-T6细胞TGF-β1 mRNA,下调细胞上清中TGF-β1蛋白的含量,同时抑制细胞TGF-β/ALK1/Smad1通路中TβR-Ⅰ、Smad1和Id1 mRNA及蛋白的表达,上调细胞Smad7 mRNA及蛋白。

　　 结论:

　　 1.NIM811可阻断CCI4诱导的大鼠肝纤维化的进展,发挥预防性抗纤维化作用,其抗纤维化作用与下调TGF-β通路有关；

　　 2.NIM811在体外能够抑制HSC-T6细胞Col Ⅰ及α-SMA的表达；

　　 3.NIM811可以通过抑制HSC-T6细胞的TGF-β/ALK1/Smad1通路而发挥抗纤维化作用。


作者         陈晶

学科专业        内科学(消化系病)

授予学位        博士

授予单位        首都医科大学

导师姓名        贾继东

学位年度        2010

关键词         实验性肝纤维化;肝星状细胞;转化生长因子-β1;信号转导

MeSH主题词         异亮氨酸(Isoleucine) 环孢菌素(Cyclosporine) 羟脯氨酸(Hydroxyproline) 转化生长因子(Transforming Growth Factors) 纤维化(Fibrosis)

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贾继东现任中华医学会肝病学分会主任委员、中国肝炎防治基金会 副理事长、中国免疫学会感染免疫分会副主任委员、亚太地区肝病学会（APASL）前任主席（2009-2010）

TSRI要不要拿CPI-431-32做下抗肺纤维化

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华世通与SCYNEXIS, Inc签署重大协议
来源： 2014-12-12 15:45:35

    2014年10月30日，SCYNEXIS, Inc.（美国纳斯达克：SCYX）对外公布，他们已与华世通生物医药科技有限公司签署授权协议。作为一家国际性的生物医药企业，华世通生物医药科技有限公司将拥有SCY-635及另外两个药物候选物用于治疗乙肝和丙肝的开发及商业化的专有权。

http://www.waterstonechina.com/newspage.aspx?id=8