AASLD2014:通过瞄准cccDNA的结合染色质修饰沉默乙肝病毒转录

StephenW

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Silencing HBV transcription by targeting cccDNA-bound chromatin modifiers
Gianna Aurora Palumbo1, Laura Belloni1,2, Sergio Valente4, Dante
Rotili4, Natalia Pediconi2,3, Antonello Mai4, Massimo Levrero1,2;
1Dept of Internal Medicine - DMISM, Sapienza University, Rome, Italy;
2IIT-Sapienza center for life nanoscience, Rome, Italy;
3Department of Molecular Medicine, Sapienza University, Rome, Italy; 4Dipartimento di Chimica e Tecnologia del Farmaco, Sapienza University, Rome, Italy

Background and Aims:
The HBV cccDNA is organized into mini-chromosomes by histone and non-histone proteins and HBV replication is regulated by the acetylation status of cccDNA-bound H3/H4 histones. We have previously shown that:
a) interferon-α inhibits HBV transcription/replication by favoring the recruitment to the minichromosome of class III Histone Deacetylase hSirt1 and histone methyltransferase Ezh2;
b) small compounds modulating these enzymatic activities may in part mimic IFNa-induced cccDNA silencing.
Here we further characterize the activity on cccDNA transcription of small compounds active on different classes of chromatin modifying enzymes.
Methods:
Capsid-associated HBV-DNA, cccDNA and pgRNA levels were assessed in HepG2 replicating HBV or in the inducible HepAD38 stable HBV cell line, left untreated or treated with:
a) a p300 and PCAF histone acetyltransferases (HAT) inhibitor,
b) a hSirt1 activator and
c) a JMJD3 histone demethylase inhibitor.
Recruitment of transcriptional cofactors and cccDNA bound histones modifications were assessed using the cccDNA ChIP assay.
Results:
The inhibition of PCAF/p300 HATs, stimulation of hSirt1/2 activity or inhibition of JMJD3 (i.e. potentiation of Ezh2 demthylase activity) affect to a
different extent pgRNA transcription and result in reduced HBV replication. HATs inhibitors reduce cccDNA-bound H4 acetilation and inhibit PCAF/p300 binding on the viral minichromosome, suggesting an autoregulatory loop involving p300- and PCAF- dependent histones acetylation and their binding to the cccDNA. The hSirt1/2 activator also induces a decrease in cccDNA bound H4 acetylation levels and modulates Sirt1 and Sirt2 binding to the minichromosome. Inhibition of JMJD3 enzymatic activity is mirrored by an increased recruitment of Ezh2 to the cccDNA.
Conclusions:
These results support the concept of an epigenetic approach with small molecules to modulate HBV transcription and replication.
Disclosures:
Massimo Levrero - Advisory Committees or Review Panels: Gilead, Jansen Cilag;
Speaking and Teaching: Roche, BMS, MSD
The following people have nothing to disclose: Gianna Aurora Palumbo, Laura
Belloni, Sergio Valente, Dante Rotili, Natalia Pediconi, Antonello Mai

StephenW

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通过瞄准cccDNA的结合染色质修饰沉默乙肝病毒转录
吉安娜极光Palumbo1，劳拉Belloni1,2，塞尔吉奥Valente4，但丁
Rotili4，纳塔利娅Pediconi2,3，安东内洛Mai4，马西莫Levrero1,2;
1Dept内科 -  DMISM，Sapienza大学，罗马，意大利;
2IIT - 萨皮恩扎中心，纳米科学的生活，罗马，意大利;
3Department分子医学，Sapienza大学，罗马，意大利; 4Dipartimento二化学ËTECNOLOGIA德尔Farmaco，Sapienza大学，罗马，意大利

背景和目的：
乙肝病毒cccDNA的分为微型染色体组蛋白和非组蛋白和HBV的复制是通过cccDNA的结合H3/ H4组蛋白乙酰化状态的调节。之前我们已经表明：
A）α干扰素抑制HBV的转录/复制了有利于招聘到III级组蛋白去乙酰hSirt1和组蛋白甲基EZH2的微染色体;
二）小分子化合物调节这些酶的活性可以部分模拟干扰素a-cccDNA的诱导沉默。
在这里，我们进一步确定对活跃在不同类别的染色质修饰酶的小分子化合物cccDNA的转录活性。
方法：
衣壳相关的HBV-DNA的cccDNA和pgRNA水平进行了评估在HepG2复制的HBV或在诱导型HepAD38稳定HBV的细胞系，不进行治疗或与处理：
一）P300和PCAF组蛋白乙酰转移酶（HAT）抑制剂，
b）在hSirt1活化剂和
C）JMJD3组蛋白去甲基化酶抑制剂。
转录辅因子和cccDNA的束缚组蛋白修饰的招聘用的cccDNA的ChIP实验评估。
结果：PCAF/ P300帽子的抑制作用，对hSirt1/2的活性或抑制JMJD3的刺激（即EZH2 demthylase活性的增强），影响到
不同程度pgRNA转录，从而导致减少HBV复制。的HATs抑制剂降低cccDNA的结合H4 acetilation，抑制PCAF/ P300上的病毒微染色体结合，这意味着一个涉及p300-自动调节循环，
PCAF-依赖性组蛋白乙酰化和它们的结合对的cccDNA。该hSirt1/2的活化剂也诱导cccDNA的减少势必H4的乙酰化水平和Sirt1的调制和SIRT2结合微染色体。 JMJD3酶活性的抑制是通过EZH2的增加招聘镜像
对cccDNA的。
结论：这些结果支持了小分子的表观遗传途径的概念来调节乙肝病毒的转录和复制
披露：
马西莫Levrero - 咨询委员会或审查小组：Gilead公司，扬森Cilag公司;
口语和教学：罗氏，拜耳，MSD
下面的人都没有透露：吉安娜极光帕隆博，劳拉
贝罗尼，塞尔吉奥·瓦伦特，但丁Rotili，纳塔利娅Pediconi，安东内洛麦

newchinabok

全世界科学家共同攻关。

咬牙硬挺

感谢分享，我们看到了科学在进步，特别是在国外的研究让病友看到希望

齐欢畅2

好文章。

newchinabok

HBV治疗新靶点
  乙型肝炎病毒（HBV）感染宿主后在肝内形成共价闭合环状DNA（cccDNA）, 无论是核苷（酸）类似物或是干扰素均不能清除肝细胞核内的cccDNA，导致病毒持续存在，停药后容易复发。
  德国普罗策（U. Protzer）等发现，激活淋巴毒素β受体（LTbR）可以在体外和体内显著抑制HBV复制。LTbR被激活后可活化NF-κB通路，诱导APOBEC3B表达，进而诱导cccDNA碱基序列突变，促其降解。与核苷（酸）类似物不同，LTbR激活剂停药后不会出现病毒反跳。研究还证明，LTbR活化可长期有效清除细胞中cccDNA，且不会损伤肝细胞。
  cccDNA在肝细胞核内以微染色体形式存在，受到表观遗传学机制的调节。意大利莱夫雷罗（M. Levrero）等发现，靶向组蛋白乙酰化和DNA甲基化的小分子化合物可以抑制HBV的复制，包括p300和PCAF组蛋白乙酰转移酶（HAT）抑制剂、hSirt1/2活化剂、JMJD3去甲基化酶抑制剂等。
  德国单德尔（M. Dandri）等指出，虽然肝细胞再生可以大幅稀释核内cccDNA的含量，但不能完全清除cccDNA，如果不进行抗病毒治疗，HBV感染就会再次复发。因此，在抗病毒治疗的基础上，如果能联合清除肝细胞核内cccDNA的药物，慢性HBV感染有可能成为下一个可以治愈的慢性病毒感染性疾病。

肝肠欲断

newchinabok，谢谢了！经你这么一翻译就看懂了，也知道全世界科学家共同在攻关！知道世界最前沿的消息，战友们曙光就在前面挺住！

肝肠欲断

LTBR是不是拉姆达？

StephenW

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LTbR是受体,表达在大多数细胞类型的表面上.

肝肠欲断

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是不是用拉姆达去激活LTBR？