难治性慢性乙肝患者干扰素信号途径的初步研究

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李咏  

【摘要】：目前我国乙肝患者人数众多,由乙肝病毒所致的慢性肝病及终末期肝病严重危害人们健康。而有效的抗病毒治疗则可以显著减少肝硬化、肝癌的发生。乙型肝炎的抗病毒治疗已成为国内、外专家的研究热点。目前乙型肝炎抗病毒药物主要以核苷类似物和干扰素为主。干扰素具有广谱抗病毒,免疫调节等作用。体外研究发现,干扰素与细胞表面干扰素受体结合,激活经典的JAK-STAT途径,并激活多种信号分子,从而诱导多种抗病毒蛋白而发挥抗病毒作用,其中以2,5寡腺苷酸合成酶(2’,5’-OAS),抗粘蛋白(Mx)等最为重要。Mx蛋白是干扰素诱导产生的分布于细胞质中的蛋白质,具有广谱的抗病毒活性,对正黏病毒、副黏病毒、布尼亚病毒、棒状病毒、小RNA病毒及乙肝病毒均有敏感的抗病毒作用。而2’,5’-OAS可以启动核酸水解酶,通过选择性地降解病毒mRNA发挥抑制病毒的作用。关于干扰素在慢性乙型肝炎患者体内发挥抗病毒及免疫调节作用的分子机制目前尚不十分清楚,且在临床治疗过程中存在干扰素抵抗或治疗无效的情况。为了深入研究干扰素信号通路和抗病毒效应分子,本文分别采用细胞模型和难治性慢性乙型肝炎患者的外周血单个核细胞,检测干扰素刺激后不同时间点干扰素信号分子和抗病毒蛋白表达情况,以进一步明确干扰素抗病毒作用机制。 我们选取HBV复制的肝癌细胞系HepG 2.2.15作为细胞模型,同时采用无病毒复制的肝癌细胞系HepG2细胞作为对照,用Real Time-PCR检测干扰素刺激后不同时间点(基线、6小时、12小时、24小时)这两种细胞干扰素抗病毒蛋白表达情况。临床研究患者的入组标准为已使用恩替卡韦治疗9-36个月,HBV DNA阴性但未发生HBeAg血清学转换。按照随机分组的原则将患者分到A组和B组。A组使用长效干扰素PEG-IFNα-2a规范治疗一年,B组继续使用恩替卡韦治疗一年。两组分别选取20名患者进行干扰素信号途径研究。我们在基线、4周、12周、24周采集外周血并提取PBMC。将PBMC分别提取蛋白和RNA,使用Real Time-PCR方法和Western-Blot方法研究相关信号分子和抗病毒蛋白的表达。 在细胞模型中,无HBV复制的肝癌细胞系HepG2和有HBV复制的肝癌细胞系HepG2.2.15细胞在干扰素刺激后6小时、12小时和24小时的Mx和2,5-OAS表达量与基线相比均有明显升高,峰值均在6小时。两种细胞相比较,HepG2细胞较HepG2.2.15细胞其抗病毒蛋白的增高幅度更为显著。在慢性乙肝患者中,A组在采用干扰素治疗后PBMC中相关信号分子和Mx,2’,5’-OAS的mRNA和蛋白水平均有增高。而使用核苷类似物治疗的B组患者的PBMC中干扰素信号分子STAT1和STAT2及其抗病毒蛋白Mx和2’,5’-OAS表达没有明显变化。 本研究说明在干扰素刺激后,HepG2和HepG2.2.15细胞干扰素介导的抗病毒蛋白的表达明显激活,但程度有一定差异,提示病毒复制是影响干扰素诱导有效抗病毒蛋白产生的因素。在NA治疗取得了病毒学完全应答,血清学应答不佳的慢性乙肝患者,联合/序贯干扰素治疗可以激活IFN信号通路并促进抗病毒蛋白Mx和2’,5’-OAS的表达而发挥重要的抗病毒作用,其深入的机制还有待进一步研究。本研究结果为此类难治性慢性乙肝患者的治疗策略的制订提供了新的理论依据。

【关键词】：信号途径 2'-5'寡腺苷酸合成酶 抗粘蛋白 慢性乙肝 干扰素
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R512.62

http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10487-1012014677.htm

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step1.NA
step2.+INF

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【经验】NA序贯IFN治疗
http://www.medlive.cn/forum/topic/27364
简要病史
患者，女，44岁，其父及兄长均为慢乙肝、肝硬化并肝癌近年先后去世，发现HBsAg阳性22年，反复肝功能异常5年。诊断为E抗原阴性慢乙肝。
治疗经过
2005年3月开始使用拉米夫定0.1g/d，治疗2年后出现YMDD变异；加用阿德福韦酯10 mg/d继续治疗2年，取得病毒学应答（HBV-DNA<1000 copies/mL）；重叠应用派罗欣（2009年3月起）135 μg/w3个月，停用拉米夫定和阿德福韦酯（停药后未出现病毒学和生化学反跳），继续单用派罗欣治疗。
治疗结局　　
用派罗欣治疗期间，HBsAg水平逐渐下降，至治疗60周时发生HBsAg血清学转换，并继续巩固治疗36周，总疗程长达96周。
治疗体会
在初始选用核苷（酸）类似物后，即便是按照目前的乙肝防治指南可以停药的病例，也有不少病例出现停药后复发的问题。因此对使用核苷类药物获得完全应答的病例，序贯使用派罗欣能获更持久的免疫控制，最终停药。鉴于IFN可以大大降低肝硬化、肝癌的发生率，对于有肝硬化或肝癌家族史的，应尽可能早期使用 IFN治疗。
精彩点评
从实际情况看，该患者的治疗非常成功。可得到几点提示：①避免停用NA后的复发，使用IFN序贯治疗可能是一个尝试；②IFN治疗可显著降低肝癌发生，因此，对于有肝癌家族史的患者，如经济条件许可，无IFN治疗禁忌，最好选择IFN治疗；③血清HBsAg定量检测有助于指导IFN的个体化治疗，对于HBeAg阴性慢乙肝患者，治疗过程中HBsAg定量持续稳定下降，患者的疗程可适当延长。
                   病例提供者：南方医院姜荣龙
　　                   点评：复旦大学附属华山医院张继明

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这个成功的病例非常有借鉴意义，或许是以后一个重要的研究方向。我们也有少量病例在停用NA后续以干扰素注射以减少复发的成功例子。但是何时应用、具体疗程尚不明确。

这个病例的成功也得力于患者的耐心配合，派罗欣治疗总疗程60周时发生HBsAg血清学转换，延长治疗至96周确实需要勇气与恒心。我国指南对于E抗原阴性慢乙肝的干扰素程疗的推荐意见是至少1年，可以根据应答情况和耐药性调整疗程。干扰素具有较高的HBsAg血清学转换率，这是其后续应用于核苷（酸）类似物治疗的用药根据。

StephenW

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"用派罗欣治疗期间，HBsAg水平逐渐下降，" - 这也是很重要,我觉得这鼓励病人继续这么长时间的干扰素治疗.