| 中药抗HBV和HCV研究新进展 -----The Advance of Studies on Anti-HBV and Anti-HCV Therapy with Chinese Herbs
来源： 作者：王宇明 发布时间：2012-3-28 14:38:05 阅读：30
通常，抗病毒药物针对病毒生命周期中的各个环节，包括病毒进入细胞、病毒脱壳并进入受感染细胞核、转录和复制、装配等。例如对于HBV来说，除了干扰素-α（IFN-α）主要起免疫调节，并对病毒蛋白合成的抑制起作用外，广泛应用的核苷（酸）类似物只针对DNA聚合酶起到抑制病毒复制的作用。
 ■王宇明 第三军医大学西南医院
通常，抗病毒药物针对病毒生命周期中的各个环节，包括病毒进入细胞、病毒脱壳并进入受感染细胞核、转录和复制、装配等。例如对于HBV来说，除了干扰素-α（IFN-α）主要起免疫调节，并对病毒蛋白合成的抑制起作用外，广泛应用的核苷（酸）类似物只针对DNA聚合酶起到抑制病毒复制的作用。考虑到HBV对已有的核苷（酸）类似物均具有耐药现象，故开发新的靶位或作用环节的药物具有十分重要的意义。目前发现，一些新的中草药提取物可有效抑制病毒复制而无严重肝毒性，特简介如下。
赛菊宁黄质（Helioxanthin）
柳杉属乔木，其根皮、树皮和枝叶具有解毒、杀虫、止痒及清热解毒等作用。赛菊宁黄质是从柳杉中提取的一种活性成分。Ying等研究了赛菊宁黄质类似物8-1在稳定产生HBV的肝癌细胞中的抗病毒效应后发现，赛菊宁黄质类似物8-1可抑制HBV RNA和蛋白表达以及野生型和拉米夫定（LAM）耐药病毒株的DNA复制。Ying等进一步分析发现该药通过降低肝细胞核因子（HNF）4α和HNF3β水平抑制HBV启动子活性。HNF4α和HNF3β在转录后受到影响，但HBV RNA和蛋白质的稳定性均无影响。这种影响主要发生在储存病毒的细胞中，这表明HBV可能致敏细胞且药物可选择性清除被感染的肝细胞。
台湾的一项研究发现，一种赛菊宁黄质（HE-145）可抑制肝癌细胞中HBV的基因表达及复制。研究结果显示，HE-145能在肝脏组织特异性地抑制HBsAg启动子Ⅱ（SPⅡ）和核心启动子（CP），而对HBsAg启动子Ⅰ（SPⅠ）和X基因启动子（XP）无抑制作用。体内试验表明HE-145抑制HBV核心启动子转录复合物的形成。由此推测，HE-145可能代表一类新型抗HBV药物，它们选择性地调节人体肝细胞的转录而抑制HBV基因表达和复制。
最近，Janmanchi等研究了赛菊宁黄质亚甲二氧基及内酯环修饰物的抗HBV活性，在合成并分析了一系列赛菊宁黄质类似物后发现32号化合物是最有效的抗HBV药物。它抑制HepA2细胞株HBsAg和HBeAg的产生；同时抑制野生型和LAM耐药型HBV的复制、转录及核心蛋白的表达。进一步的研究发现32号化合物选择性地抑制HBsAg、核心抗原和增强子Ⅰ等病毒启动子的活性。这种类型的化合物具有独特的作用模式，与现有的治疗药物不同，从而成为新的潜在抗HBV药物。
苦味叶下珠（Phyllanthus Amarus）
植物苦味叶下珠属大戟科油柑属，为一年生草本植物，雌雄同株。其味苦，性凉，具有平肝清热、利水解毒等功效，可应用于治疗泌尿生殖系、妇科、呼吸系统等疾病。近年研究显示，苦味叶下珠在体外可抑制HBV RNA转录，也表现出在慢性HBV携带者中治疗的潜力。Ott等发现该药通过减少C/EBP与HBV DNA的结合，特异性抑制HBV EnhⅠ的活性。
最近，Ravikumar等研究发现苦味叶下珠根的提取物可显著抑制HCV NS3蛋白酶，苦味叶下珠叶的提取物在体外对HCV NS5B聚合酶具有抑制作用。此外，苦味叶下珠根及叶的提取物可明显抑制HCV单顺反子复制子、HCV（H77S） RNA在培养细胞中的复制，且在Huh7肝癌细胞中用MTT法检测并未显示出细胞毒性。同时，研究发现苦味叶下珠根联合IFN-α在抑制HCV RNA复制方面具有协同作用。上述结果表明，苦味叶下珠具有抑制病毒活性的分子基础及体外效应，成为开发新型抗病毒药物的天然来源。
姜黄属（Curcuma）
姜黄属属于姜科，自然界已发现50余种，分布于亚洲东南部，国产本属植物的根茎及膨大的块根均可供药用，具有行气解郁、破瘀止痛等作用。Kim等证实姜黄属提取物在稳定产生HBV的HepG2.2.15细胞中有抗病毒作用。它可降低HBV RNA水平，从而抑制HBV抗原表达及病毒颗粒的产生。该提取物通过加强p53基因的转录和稳定性，导致P53蛋白的积聚，从而具有潜在抗病毒及抑制癌变作用。
姜黄素是从姜科、天南星科中的一些植物的根茎中提取的一种化学成分，是植物界很稀少的具有二酮的色素，为二酮类化合物。Rechtman等研究显示，天然酚类化合物姜黄素可有效抑制在肝癌细胞中稳定转染的HBV基因表达和复制，这种抑制作用通过下调饥饿诱导蛋白（PGC-1α）得以实现。姜黄素与LAM联合应用还具有抑制HBV表达的协同效应。研究结果提示，姜黄素可能作为以感染宿主为目标的靶向疗法，成为区别于与当前病毒靶向疗法的另一有效途径。
黄芩（Radix Scutellariae）
黄芩为唇形科植物，以根入药，含有黄芩苷元、黄芩苷、汉黄芩素、汉黄芩苷和黄芩新素等，具有显著的生物活性。Guo等对汉黄芩素的抗HBV活性进行了研究，显示其可抑制HBV与宿主肝细胞的细胞融合（阻断病毒侵入与释放），同时具有抑制HBV逆转录酶（RT）的活性以及抑制HBsAg、HBcAg、HBeAg的表达。此外研究还发现，黄芩苷能够有效地抑制HepG2.2.15细胞分泌HBV病毒抗原，提示黄芩苷可用于抗HBV治疗。近年，国内已有黄芩苷上市，据初步研究显示，黄芩苷联合其他抗病毒药物抗HBV治疗对HBV DNA的下降及HBeAg血清学转换具有协同作用，明显优于单药抗HBV治疗，且患者耐受良好。然而，目前关于黄芩苷单药抗HBV治疗的报道较少，且联合其他药物抗病毒治疗的临床样本较少，故仍需随机、大样本的临床研究验证。
刺槐（Acacia）
刺槐属于豆科树种，作为中草药，其皮、花及心材具有抗氧化、抗炎症等作用。台湾的一项研究发现，刺槐n-丁醇甲醇提取物能够抑制HCV复制评价体系中HCV RNA的复制；在HCV复制子报告体系中和IFN-α、特拉匹韦（Telaprevir）、2’-C-甲基胞苷（2’-C-methylcytidine）联合用药时均具有协同效应。进一步研究表明，该提取物通过下调核转录因子κB（NF-κB）的活性来抑制并降低环氧化酶-2（COX-2）的表达，从而抑制HCV RNA的复制。据此推测，刺槐可作为HCV感染者的保护性治疗药物。
桦树皮提取物（Birch Bark Extract）
桦树皮为桦木科植物白桦的外皮，药用价值很广，近年来，受到国内外学者的广泛重视。桦树皮化学成分复杂、药理作用多样，其提取物具有抗菌、抗肿瘤、降脂、利胆和保肝等作用。最近，Shikov等研究发现，桦树皮提取物除了具有保肝作用外，还具有抗HCV作用（表1）。研究显示，桦树皮提取物治疗慢性丙型肝炎可显著降低HCV RNA，这可能与抑制HCV与宿主肝细胞的细胞融合（阻断病毒侵入与释放）有关，但具体抗病毒机制尚需进一步研究。Freysdottira等的一项研究发现，桦树皮提取物可以调整树突状细胞与T细胞之间的相互作用，从而导致宿主免疫反应，而已知T细胞特别是细胞毒性T细胞（CTL）在抗病毒方面具有重要作用。这就为今后研究桦树皮的抗病毒机制提供了一个研究方向。
水飞蓟素（Silymarin）
中药水飞蓟素系由水飞蓟草种子提取的黄体甙，具有增强肝细胞膜稳定性，并可促进肝细胞再生的作用；国外常用于毒蕈中毒所致肝衰竭。近年研究显示，水飞蓟素具有抗HCV作用。2007年的一项研究对高度标准化的水飞蓟提取物在人体细胞中的抗炎症和抗病毒效应进行了评估。结果证实，水飞蓟素通过抑制人肝癌细胞中NF-κB的转录激活，以及人外周血单个核细胞中炎症因子的活化来发挥抗炎症作用；同时也提示，水飞蓟素尤其是联合IFN-α治疗时，对HCV感染具有预防和治疗效果。
水飞蓟宾是水飞蓟素的主要活性成分之一。Ferenci等将PEG-IFN-α+利巴韦林（RBV）无应答的丙型肝炎患者分成两组进行临床抗病毒研究，一组接受水飞蓟宾，10 mg·kg-1·d-1，静注7 d，并在治疗后第8天使用PEG-IFN-α+RBV治疗；另一组分别接受水飞蓟宾5 mg·kg-1·d-1、10 mg·kg-1·d-1、15 mg·kg-1·d-1和20 mg·kg-1·d-1，静注14 d，并在治疗第8天联合PEG-IFN-α+RBV综合治疗。第一组研究结果显示，静注水飞蓟宾后HCV RNA较基线显著下降（1.32±0.55）log IU/mL（P<0.001），停用水飞蓟宾后尽管使用了PEG-IFN-α+RBV，仍有6例患者出现HCV RNA的再度升高。第二组研究结果表明，静注水飞蓟宾后HCV RNA下降呈剂量依赖性，水飞蓟宾5 mg·kg-1·d-1（n=3）、10 mg·kg-1·d-1（n=19）、15 mg·kg-1·d-1（n=5）和20 mg·kg-1·d-1（n=9）静注7 d后HCV RNA较基线下降水平逐渐升高，下降值分别为（0.55±0.5）log IU/mL、（1.41±0.59）log IU/mL、（2.11±1.34） log IU/mL和（3.02±1.01）log IU/mL（图1、图2）。结果提示，水飞蓟宾对抗HCV无应答者具有较强的抗病毒作用，与PEG-IFN-α+RBV联合使用也取得较好效果，且在治疗过程中除了个别患者出现轻微的胃肠道症状外，尚未发现其他不良反应，其耐受性良好。然而，此临床研究样本较少，尚需大样本的随机临床研究验证。近来的一项研究显示，水飞蓟宾具有抑制HCV RNA依赖的RNA聚合酶的功能，可有效抑制HCV RNA及全基因组丙型肝炎病毒JFH-1的复制。提示其可作为特殊的抗HCV药物。
新近美国西雅图华盛顿大学Wagoner等也进一步研究了水飞蓟素的抗病毒活性，结果发现，水飞蓟素对于HCV细胞培养具有抗病毒感染的作用，表现在抑制病毒入侵、抑制RNA和蛋白表达以及抑制传染性病毒颗粒的生成等方面。研究发现，水飞蓟素并不直接阻断培养的HCV感染细胞结合至正常细胞，但其通过抑制多种病毒假颗粒的入侵及HCV假颗粒与脂质体的融合，来发挥抗病毒感染的作用。本研究中值得注意的一个发现是水飞蓟素和水飞蓟宾对HCV NS5B-RNA依赖的RNA多聚酶活性的抑制作用不同，同样使用体外抗病毒有效剂量的5~10倍时，水飞蓟素能抑制基因2a型JFH-1 NS5B-RNA依赖的RNA多聚酶活性，但水飞蓟宾却仅显示出极轻微的抑制作用（图3）。在该研究中，水飞蓟素被发现能抑制微粒体甘油三酯转运蛋白、载脂蛋白B分泌，抑制培养上清液感染性病毒颗粒的产生，同时也具有阻断细胞与细胞间病毒传播的作用。以上研究表明，尽管在体外实验中水飞蓟素已经被证实具有抑制NS5B聚合酶活性的作用，但其抗病毒的机制还包括阻断病毒对宿主细胞的入侵及细胞间的传播。
理想的抗HBV和HCV药物应具备以下条件：①具有强效抑制病毒复制的能力；②具有良好的安全性，可长期用药；③作用持久，停药无复发；④耐药变异几率低；⑤可激发宿主自身的抗病毒免疫活力；⑥可最终清除病毒。然而，迄今为止国内外尚无理想的抗HBV和HCV药物，多数价格昂贵、疗程长、不良反应多、停药后可发生反弹，且临床疗效远逊于理论设计。因此，上述提出的抗HBV和HCV的新药物新疗法，可能会克服病毒耐药等问题，且为抗病毒治疗提供了更多的药物选择。不过，目前研究结果是初步的，仍需大量临床探索研究验证。
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发表于 2012-3-30 20:14
