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High serum IL-21 levels after 12 weeks of antiviral therapy predict HBeAg seroco [复制链接]

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才高八斗

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发表于 2012-3-16 17:18 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
Research Article
High serum IL-21 levels after 12 weeks of antiviral therapy predict HBeAg seroconversion in chronic hepatitis B
  • Shi-Wu Ma1, 2, ,
  • Xuan Huang1, ,
  • Yong-Yin Li1,
  • Li-Bo Tang1,
  • Xiao-Feng Sun3,
  • Xiao-Tao Jiang1,
  • Yue-Xin Zhang3,
  • Jian Sun1,
  • Zhi-Hua Liu1,
  • William G.H. Abbott1, 4,
  • Yu-Hong Dong5,
  • Nikolai V. Naoumov5,
  • Jin-Lin Hou1, ,
  • 1 Hepatology Unit and Key Lab for Organ Failure Research, Nanfang Hospital, Southern Medical University, No. 1838, North Guangzhou Avenue, Guangzhou 510515, China
  • 2 Department of Infectious Diseases, Kunming General Hospital of PLA, Kunming 650032, China
  • 3 Department of Infectious Diseases, The First Affiliated Hospital, Xinjiang Medical University, Urumqi, China
  • 4 The New Zealand Liver Transplant Unit, Auckland City Hospital, Private Bag 92-024, Auckland, New Zealand
  • 5 Novatis Pharma AG, Basel, Switzerland
  • Available online 13 December 2011. See Editorial, pages 753–755.



Background & Aims

Interleukin-21 (IL-21) stimulates T cell and B cell responses and plays a role in control of chronic viral infections. The role of IL-21 in chronic hepatitis B virus (HBV) infection is not understood.

Methods

Serum IL-21 levels were measured by enzyme immunoassay in 75 HBeAg-positive chronic hepatitis B (CHB) patients undergoing telbivudine treatment. The findings were validated in 103 patients from a separate clinical trial of telbivudine. A complete response to telbivudine was defined as having both HBeAg seroconversion and serum HBV-DNA level <300 copies/ml by treatment week 52. The proportions of T-cells producing IL-21 and/or expressing programmed death 1 (PD-1) in peripheral blood mononuclear cells were assessed longitudinally during treatment by intracellular cytokine staining and flow cytometry.

Results

Median serum IL-21 levels at treatment week 12 were significantly higher in patients who did achieve vs. patients who did not achieve a complete response in both the initial (128.4 vs. 69.2 pg/ml, p = 0.003) and the validation (142.2 vs. 89.9 pg/ml, p = 0.004) trials. Serum levels of IL-21 (p = 0.005) or HBV-DNA (p = 0.003) levels at treatment week 12 independently predicted HBeAg seroconversion in the first year of treatment. The decrease in PD-1 expression on CD4+ and CD8+ T cells during the first 12 weeks on telbivudine treatment was not correlated with changes in IL-21 concentrations.

Conclusions

Serum IL-21 levels may be a biomarker for HBeAg seroconversion, and may contribute to individualization of antiviral therapy in HBeAg-positive CHB. IL-21 may also have a role in immunotherapy for CHB.


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才高八斗

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发表于 2012-3-16 17:19 |只看该作者
研究文章
高血清IL-21水平的抗病毒治疗12周后,预测慢性乙型肝炎HBeAg血清转换

    石武MA1,2,†
    轩Huang1,†
    永贤LI1
    李博Tang1
    萧锋Sun3
    萧陶江1,
    跃新Zhang3,
    建Sun1
    智华Liu1
    威廉G.H. abbott1,4,
    渝港Dong5,
    尼古拉五Naoumov5,
    金林电子邮件的通讯作者,通讯作者的联系信息,Hou1

    肝病1组和器官功能衰竭的研究重点实验室,南方医院,南方医科大学,1838号,广州大道北,广州510515,中国
    2,昆明,昆明650032,中国解放军总医院传染病部
    3部传染病,附属第一医院,新疆医科大学,乌鲁木齐,中国
    新西兰肝脏移植组,私人袋92-024,奥克兰,新西兰奥克兰市医院,
    5 Novatis制药公司,瑞士巴塞尔,

    2011年12月13日。看到编辑,页753-755。

背景与目的

白细胞介素21(IL-21)刺激T细胞和B细胞的反应,并在控制慢性病毒感染中扮演的角色。 IL-21在慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染的作用是不理解。
方法

75 HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者接受替比夫定治疗的酶免疫测定血清IL-21水平。 103例从一个单独的替比夫定的临床试验的结果进行了验证。被定义为HBeAg血清转换,血清HBV-DNA水平<300拷贝/毫升治疗52周替比夫定一个完整的响应。 T细胞产生IL-21和/或外周血单个核细胞中表达程序性死亡1(PD-1)的比例进行了评估,纵向在细胞内细胞因子染色和流式细胞仪的治疗。
结果

中位数在治疗12周时血清IL-21水平明显高于完全缓解患者没有达到与患者没有达到在初始(128.4与69.2皮克/毫升,P = 0.003)和验证(142.2与89.9皮克/毫升,P = 0.004)试验。血清IL-21水平(P = 0.005)或HBV-DNA水平在治疗12周(P = 0.003)的独立预测HBeAg的血清转换,在治疗的第一年。在减少的PD-1表达对CD4 +和CD8 + T细胞在替比夫定治疗12周,不与IL-21浓度的变化密切相关。
结论

血清IL-21水平,可能是一种生物标志物HBeAg血清转换,并可能导致HBeAg阳性慢性乙型肝炎的抗病毒治疗的个性化。 IL-21可能也有一个在慢性乙型肝炎免疫治疗中的作用。
缩略语
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发表于 2012-3-16 22:08 |只看该作者
 我国是全球乙型肝炎病毒(HBV)感染高流行区,HBV携带者超过1亿人,现症慢性乙型肝炎病人约3 000万,每年新增病例50万~100万[1-2]。尽管预防性HBV疫苗已经在全球广泛应用,但慢性持续性HBV感染率仍居高不下,严重威胁着人类的健康。目前,由于尚不清楚HBV感染后乙型肝炎慢性化的确切机制,所以无法制定出行之有效的治疗方案。因此,明确该机制,可望为乙型肝炎的临床治疗提供新的线索和可靠的理论依据。白细胞介素21(IL-21)是近年来发现的一种细胞因子,属于Ⅰ型细胞因子家族,主要是由CD4+T细胞合成和分泌。人类的IL-21基因定位于4q26-27,鼠类的IL-21基因位于3号染色体[3]。最近研究证实,在淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)慢性感染中,IL-21担负着重要作用,并与病毒的清除直接相关,这一重大发现为HBV慢性持续感染的研究带来了新的思路。本研究旨在探讨在慢性HBV感染过程中,IL-21担负着怎样的作用?对乙型肝炎特异性CD8+T细胞是否存在免疫调控作用?

  1对象与方法

  1.1研究对象

  慢性乙型肝炎病人32例(病人组),男20例,女12例;平均年龄(41.2±13.6)岁。病人均来自青岛市市立医院,诊断符合2000年全国第十次病毒性肝炎及肝病学术会议(西安)制定的标准,均排除合并肿瘤及自身免疫性疾病者。健康对照组29例,男18例,女11例;平均年龄(37.2±9.5)岁。

  1.2主要试剂和仪器

  美国BD公司产FACS Calibur型流式细胞仪。美国宝特公司产酶标仪。CD3-PE、CD8-FITC、IFN-γ-APC等均购自美国BD公司。HBV血清标志物ELISA检测试剂盒由上海实业科华科技有限公司提供。IL-21试剂盒购自美国TPI公司。

  1.3IL-21水平检测

  采用双抗体夹心ELISA方法检测受试者血清IL-21水平。取受试者血清及标准液各50 μL加入酶标板,37 ℃孵育30 min;每孔加酶标抗体50 μL,37 ℃孵育30 min。洗涤5次加底物显色;终止反应后,采用酶标仪测定吸光度(A)值,以A值计算IL-21水平。

  1.4外周血单个核细胞(PBMC)的提取

  将淋巴细胞分离液加入到10 mL尖底离心管中;用毛细吸管加入等量的倍比稀释血液,2 000 r/min离心25 min。使用毛细吸管轻轻吸取白膜层的PBMC,洗涤后使用含体积分数0.10胎牛血清的RPMI 1640培养液重悬细胞,培养于6孔板中备用。分为以下3组:IL-21刺激组(加入20 μL的IL-21)、IL-2刺激组(加入20 μL的IL-2)、未刺激组(不加IL-21和IL-2)。共孵育10 d后,检测CD8+T细胞的数量及功能。

  1.5流式细胞分析技术检测CD8+T细胞频率

  肝素抗凝的全血200 μL加2 mL PBS稀释后,1 000 r/min离心5 min;用吸管小心移弃上清液;分别加20 μL以PE标记的CD3、FITC标记的CD8抗体于全血细胞中,设置同型对照,混匀;室温避光孵育30 min;洗涤;加FACS裂解液,室温10 min;待细胞悬液变成真性溶液后洗涤2次;以10 g/L多聚甲醛200 μL重悬固定,流式细胞仪检测CD8+T细胞频率,BD FACS 专用FACSDIVA软件分析。

  1.6特异性肽刺激活化胞内IFN-γ染色

  3组孵育10 d后,分别加入20 μL以PE标记的CD3、FITC标记的CD8单克隆抗体及同型对照,室温避光孵育20 min;然后加入1× FACSTM穿透液500 μL,室温下避光孵育15 min;洗涤1次;分别加入20 μL荧光标记的IFN-γ抗体及同型对照,室温下避光孵育20 min;洗涤2次,重悬于10 g/L多聚甲醛溶液200 μL 中,上机检测。

  1.7统计学处理

  数据以±s表示,使用STATA 7.0及PPMS 1.5[4]统计软件进行统计学处理。多组间均数比较采用单因素方差分析,两组间均数比较采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。

  2结果

  2.1两组血清IL-21浓度比较

  对照组和慢性乙型肝炎病人组血清IL-21浓度分别为(196.33±114.56)、(274.18±106.22)ng/L,与对照组相比,病人组血清IL-21浓度明显增高(t=2.75,P<0.01)。

  2.2CD8+T细胞频率

  与未刺激组及IL-2刺激组相比,IL-21刺激组CD8+T细胞的频率明显增高,差异有显著性(F=59.27,q=11.39、14.11,P<0.05)。见表1。

  2.3CD8+T细胞胞内IFN-γ的检测

  与未刺激组及IL-2刺激组相比,IL-21刺激组CD8+IFN-γ+T细胞频率显著增高,差异有显著性(F=10.27,q=3.82、6.28,P<0.01)。见表1。表1各组CD8+T细胞和 CD8+IFN-γ+T细胞频率比较

  3讨论

  在HBV感染中,HBV作为嗜肝的DNA病毒,本身对肝细胞并没有损害;而在清除胞内HBV和肝细胞的损伤中均起关键作用的是CD8+T细胞,即细胞毒性T细胞 (CTL)。在急性HBV感染中,可激发强烈的、多克隆的表位特异性CTL反应;而在慢性感染中,这些反应是微弱的甚至缺失的,造成CTL反应低下的原因仍有待于研究[5-6]。传统理论认为,CD4+T细胞通过分泌IL-2,促进CD8+T细胞的增殖及免疫学效应。而在慢性乙型肝炎中,这种功能薄弱,于是有学者期望通过提高IL-2的分泌,改善CD8+T细胞的功能,促进病毒的清除,以期达到治疗目的,但是临床效果甚微,说明尚未找到其真正的作用靶标。

  近期研究结果提示,IL-21在慢性感染中可发挥免疫调控效应。在LCMV慢性感染模型中,若敲除IL-21基因可严重影响LCMV的清除[7-9]。这一重大发现为我们的研究带来新的思路。本研究结果显示,乙型肝炎病人血清中IL-21含量增高,提示其在HBV感染中担负着一定的作用。为揭示IL-21发挥免疫学效应的机制,本研究设置不同组观察其对CD8+T细胞数量的影响,结果显示,用IL-21刺激后,CD8+T细胞数量显著增高,且超过IL-2的刺激效应,说明CD4+T细胞可以通过分泌IL-21而刺激病毒特异性CD8+T细胞的增殖,这一新发现是对传统概念的突破。

  近年来研究结果提示,CD8+T细胞识别HBV感染肝细胞表面的靶抗原后,主要通过两种途径发挥免疫学效应。以往对HBV的清除机制主要倾向于CD8+T细胞对靶细胞的直接杀伤作用,即通过穿孔素和颗粒酶的释放等使病毒和感染细胞 “同归于尽”。近来越来越多的研究证据使这一传统学说受到挑战,目前认为CTL的非细胞损伤的病毒清除机制占优势地位。CD8+T细胞介导的细胞无损伤的病毒清除主要是通过细胞因子的释放,如IFN-γ和TNF-α等,达到清除病毒的目的[10-11]。为验证IL-21在促进CD8+T细胞数量增高时是否会改善其功能,本研究利用流式细胞分析技术并胞内细胞因子染色技术观察了IL-21对不同组CD8+T细胞胞内IFN-γ分泌情况的影响,结果显示,加入IL-21刺激后,CD8+T细胞分泌IFN-γ功能增强。

  综上所述,IL-21在慢性乙型肝炎中担负着重要的免疫调节效应,其通过改善CD8+T细胞的数量及功能,帮助清除病毒。本研究结果为慢性乙型肝炎的治疗提供了新的思路。

作者:马伟平1,何大馨2,钟丹丹1,张蓓1 作者单位:(1青岛大学医学院,山东 青岛266021;2青岛市市立医院)
http://www.yixue360.com/Front/Xu ... px?ArticleID=101637
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StephenW + 20 非常好.

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发表于 2012-3-17 07:30 |只看该作者
久病翻译的真好

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咬牙硬挺 发表于 2012-3-17 07:30
久病翻译的真好

不是俺翻译的,是转载来的,文章末尾就是网址.
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才高八斗

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发表于 2012-3-17 09:45 |只看该作者
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不是翻译。是两个不同的论文.
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