15/10/02说明:此前论坛服务器频繁出错,现已更换服务器。今后论坛继续数据库备份,不备份上传附件。

肝胆相照论坛

 

 

肝胆相照论坛 论坛 学术讨论& HBV English 存档 1 [转帖]乙型肝炎病毒学研究存在的问题及对策 ...
查看: 13310|回复: 26

[转帖]乙型肝炎病毒学研究存在的问题及对策

Rank: 10Rank: 10Rank: 10

现金
8470 元 
精华
23 
帖子
2623 
注册时间
2001-11-8 
最后登录
2021-1-1 

版主勋章 白衣天使

发表于 2007-4-8 05:52
乙型肝炎病毒学研究存在的问题及对策 成军
【关键词】 肝炎,乙型; 肝炎病毒,乙型; RNA干扰
Outlooks regarding the study of hepatitis B virus  CHENG Jun.
【Key words】     Hepatitis B;    Hepatitis B virus;    RNA interference
【First author’s address】   Institute of Infectious Diseases, Beijing Ditan Hospital, Beijing 100011, China
Email: [email protected]
1979年完成HBV DNA的基因克隆化以后,对于HBV的病毒学研究取得了很大的成就。根据HBsAg编码基因序列构建的各种表达系统获得的重组HBsAg蛋白作为疫苗,在HBV感染的免疫预防中发挥着十分重要的作用。由2拷贝HBV DNA头尾相接转染肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞建立的转染细胞模型,在研究HBV生物学特性和体外药物筛选中发挥了重要作用。关于HBV DNA聚合酶/逆转录酶的研究,成功地研发了拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦,以及即将上市的替比夫定、替诺福韦等核苷(酸)类似物,在慢性乙型肝炎的抗病毒治疗中发挥着十分重要的作用[1]。但是,作为一种结构高度致密、复杂的DNA病毒,HBV的病毒学研究还有许多领域没有取得实质性进展,还要进行长期的探索。
1.乙型肝炎病毒受体以及嗜肝特性的研究:作为一种具有包膜的DNA病毒,HBV感染靶细胞应该是通过靶细胞的膜受体进入到肝细胞之中。但是,长期以来,对于HBV的细胞膜受体一直没有公认的研究结果。20世纪80年代中期,曾经认为多聚人血清白蛋白受体可能是HBV感染肝细胞的受体,后来又研究了附加素V作为HBV受体的可能性,最近几年,由于证实了HBV包膜蛋白可与脂蛋白、载脂蛋白进行结合,因而推测HBV可能是借助HBV包膜结合的这类蛋白质与肝细胞特异性受体,即低密度脂蛋白受体的结合而进入肝细胞。但是这一观点还没有定论。如果能够阐明HBV进入肝细胞的受体,以及HBV感染肝细胞的机制,将对于阻断HBV感染新生的肝细胞具有十分重要的意义,可用于开发新的抗病毒治疗措施[2]。
HBV是一种嗜肝DNA病毒,但是其嗜肝特性的决定机制目前还不清楚。HBV特异性受体的分布可能是机制之一。但是慢性乙型肝炎患者PBMC中可以检测到HBV DNA,并有一定程度的复制。在胰腺、脑组织、肾组织等肝以外的细胞中发现HBV说明其具有相对的泛嗜性。也提示除了受体之外,还有其他的决定HBV嗜肝特性的生物学基础。张忠东等[3]曾经利用噬菌体展示技术研究发现只有在肝组织中具有高表达活性的羧肽酶N可特异性结合HBV核心基因启动子,维持该启动子的高转录活性,可能是肝组织支持HBV高活性复制的重要的分子生物学机制之一。这些特点的研究,有助于探索新的治疗方法。
2. HBV准种研究的意义:HBV DNA聚合酶/逆转录酶缺乏校正机制,因而造成子代病毒基因序列的微小差别,构成HBV准种的特点。准种的研究,揭示了抗病毒治疗中耐药产生的分子生物学机制,揭示了在抗病毒治疗中外在药物选择压力对于HBV准种群的影响。也为今后长期进行抗病毒治疗提出了新的难题。
RNA干扰(RNAi)是一项非常重要的基因沉默技术[4-6]。微小RNA(microRNA, miRNA)是一种内源性的单链小分子RNA,位于基因组非编码区,具有高度保守性、时序性和组织特异性。miRNA通常来源于长链RNA(约1000bp)的初始转录产物,即初始miRNA。初始miRNA分子在Drosha酶作用下形成带有茎环结构的前体miRNA。前体miRNA被转运到细胞质中,被Dicer酶酶切成小分子双链RNA,后者很快在解螺旋酶的作用下形成单链小RNA分子即成熟的miRNA。成熟的miRNA与Argonaute蛋白家族成员结合形成RNA诱导的沉默复合体。如果沉默复合体中的miRNA与靶mRNA不完全互补配对则引起靶基因在翻译水平上的抑制,如果完全互补配对则降解靶mRNA而发挥基因沉默作用[7]。这些新型的工具都可以作为未来的HBV感染抗病毒治疗的新方法,需要进行不断的探索。但是,也会受到HBV准种特点的困扰,无论RNAi还是miRNA的作用机制,都是序列依赖性的,我们究竟需要多少种RNAi、miRNA分子才能将全部的HBV准种群制服?这是一个严峻的挑战。
3. HBV病毒耐药的机制及克服:目前,IFNα和核苷(酸)类似物是慢性乙型肝炎抗病毒治疗的主要药物类型。核苷(酸)类似物具有口服方便、药物不良反应少、长期应用耐受性好、能够有效降低HBV病毒载量、显著阻断慢性乙型肝炎患者发展为肝硬化和肝细胞癌等,但是,长期应用也可产生程度不同的基因突变和耐药问题。从1999年第一个核苷类似物拉米夫定上市以来,已经有超过100万的中国慢性乙型肝炎患者曾经使用过拉米夫定,目前我们有大量的YMDD变异患者的治疗任务。关于核苷(酸)类似物耐药相关的HBV DNA基因突变位点已经积累了大量的研究资料,目前面临的挑战就是如何优化核苷(酸)类似物抗HBV的临床治疗方案,最大程度地降低耐药的发生,有效地解决耐药患者的临床治疗问题[8]。首先,拉米夫定治疗后YMDD变异者的抗病毒治疗,需要比较不同方案疗效的优劣。拉米夫定与阿德福韦酯重叠1~3个月后停用拉米夫定、拉米夫定联合阿德福韦酯治疗、换用恩替卡韦或聚乙二醇化干扰素治疗,究竟哪一个方案更好,目前还缺乏大宗对照病例的直接比较研究结果。疗程18个月以上的研究结果表明,尤其是对于HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者来说,出现YMDD变异以后,拉米夫定和阿德福韦酯的联合治疗方案,其疗效显著优于拉米夫定与阿德福韦酯重叠1~3个月后停用拉米夫定的治疗方案,而且还可以有效减少针对阿德福韦酯的耐药变异的发生。也有研究指出,一开始就联合治疗的策略,是减少核苷(酸)类似物耐药性的有效策略。为了避免交叉耐药的产生,应尽可能地避免单一核苷(酸)类似物的序贯治疗。目前认识到核苷(酸)类似物抑制HBV复制的速度和强度也与其耐药的产生有关。此外,与耐药有关的所谓的基因屏障和药物动力学屏障也是决定耐药产生的重要因素[9]。
总的来说,关于HBV耐药的机制和对策的研究仍然处于初步阶段。虽然目前我们还缺乏像细菌的体外药敏试验结果指导抗生素应用的技术平台,从药物敏感和抗药性两个不同的方面杜绝不合理的用药方案,但是,我们在没有预测敏感药物技术平台的条件下,可以进行耐药基因的检测,根据结果选择适当的药物,避免使用已经出现耐药的药物,以提高抗HBV的药物疗效[10]。不远的将来,可以建立针对HBV敏感药物与耐药有关的高通量检测的技术平台,对于临床抗病毒治疗进行具体指导,使慢性乙型肝炎的临床抗病毒治疗的研究提高到一个崭新的高度。
参  考  文  献
[1]Cheng J. Modern Progress of Clinical Medicine . Infectious Diseases. Beijing: Science and Technology Lecture Publishing House. 2006.
成军.现代临床医学内科进展-感染内科分册.北京:科学技术文献出版社.2006.
[2]Cheng J, Jia JD. Progress of Hepatology. Beijing: Chinese Medical Electric Audio & Vidoe Publishing House. 2006.
成军,贾继东.肝脏病学临床新进展.北京:中华医学电子音像出版社.2006.
[3] Zhang ZD, Cheng J, Zhong YW, et al. Cloning and characterization of a human hepatocyte protein, carboxypeptidase N, which binds and activates core promoter of hepatitis B virus. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi, 2003, 11: 1131-1134.
张忠东,成军,钟彦伟,等.羧肽酶N调节乙型肝炎病毒核心启动子表达活性的研究.世界华人消化杂志,2003,11:1131-1134.
[4]Cheng J. RNA Interference technique in the study of gene expression regulation. Zhonghua Ganzangbing Zazhi, 2004, 12: 557-558.
成军.RNA干扰在基因表达调控研究中的应用.中华肝脏病杂志,2004,12:557-558.
[5]Liu SA, Wei HS, Dong QM, et al. Inhibition of HBsAg and HBeAg secretion by RNA interference of the polymerase gene sequence of hepatitis B virus: an experimental study. Zhonghua Yixue Zazhi, 2005, 85 : 3079-3083.
刘顺爱,魏红山,董庆鸣,等.乙型肝炎病毒P区RNA干扰抑制2.2.15细胞乙型肝炎病毒表面抗原和e抗原分泌的实验研究. 中华医学杂志,2005,85:3079-3083.
[6]Cheng J, Liu Y, Wang L, et al. Progress of research on RNA interference and anti-viral therapy of hepatitis. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi, 2003, 11 : 1264-1266.
成军,刘妍,王琳,等.RNA干扰与抗肝炎病毒治疗前景的研究.世界华人消化杂志,2003,11:1264-1266.
[7]Jopling CL, Yi M, Lancaster AM, et al. Modulation of hepatitis C virus RNA abundance by a liver-specific MicroRNA. Science, 2005, 309: 1577-1581.
[8]Cheng J, Li L. Progress of combination anti-viral therapy. Zhonghua Chuanranbing Zazhi, 2003, 21: 157-160.
成军,李莉.抗乙肝病毒联合治疗方案的研究进展.中华传染病杂志,2003,21:157-160.
[9]Manolakopoulos S, Bethanis S, Elefsiniotis J, et al. Lamivudine monotherapy in HBeAg-negative chronic hepatitis B: prediction of response-breakthrough and long-term clinical outcome. Aliment Pharmacol Ther, 2006, 23: 787-795.
[10]Cheng J. Forcusing on the quasispecies researches of hepatitis B virus. Zhonghua Jianyan Yixue Zazhi, 2005, 28: 562-564.
成军.应重视对乙型肝炎病毒准种特点的研究和认识.中华检验医学杂志,2005,28:562-564.

《中华肝脏病杂志》版权
谨慎地、明确地、明智地应用当代最佳证据(资料),同时结合临床医师的个人专业技能和多年的临床经验,考虑患者的价值和愿望,将三者完美结合,制订出患者的治疗方案。面对病人我时常问自己我做到了多少

Rank: 4

现金
515 元 
精华
帖子
167 
注册时间
2004-1-1 
最后登录
2009-9-17 
发表于 2007-4-16 06:22
学习了!

Rank: 2

现金
203 元 
精华
帖子
3 
注册时间
2007-5-20 
最后登录
2009-4-3 
发表于 2007-5-23 12:45

好复杂,看的好难懂哦!!

你是天空的一片云,偶然间投影在我的波心,我为之压抑,为之欢喜,你却转瞬间消失了踪影。

Rank: 3Rank: 3

现金
291 元 
精华
帖子
37 
注册时间
2007-6-4 
最后登录
2009-5-4 
发表于 2007-6-28 02:35

很有意思、有启发性的文章。我希望加入杀灭乙肝病毒药物的研究。

Rank: 4

现金
451 元 
精华
帖子
28 
注册时间
2005-4-10 
最后登录
2017-11-16 
发表于 2007-7-14 12:34
政府立法保护乙肝病毒携带者会不会伤害其他人利益?我的回答:不会的。接种疫苗以后是很安全的。对于一部分人而言细胞免疫防线比较弱,可以要激发体液免疫-产生抗体来清楚病毒入侵,这样就给了一个病毒繁殖的窗口期,后果是急性肝炎,需要几个月就会完全好掉。还有一部分人细胞免疫防线很强,病毒进入血液循环就被清除掉了。可怜的是第三类人,也就是我们讨论的总人口10%:他们的细胞免疫能力弱,病毒进入初期不能清掉,尔后也不能产生抗体。原因是无TCR受体识别病毒的表面抗原,也没有体液免疫的B细胞科隆增殖。他们就是慢性感染者。请各位不要担心,只要你是成年人,只要你有抗体,只要你不属于这总人口中10%的易感染人群,你不会被感染的。对于绝大部分没有接种疫苗的成年人而言,感染后的后果是:1。大病一场,但是会彻底清除病毒的,原理是病毒被体液免疫清除需要时间,这个时间给了病毒增殖的机会;2。强大的细胞免疫将病毒繁殖阻断了。婴儿一定要及时接种疫苗。5-10%的人群接种疫苗也是没有效果的,可能是B细胞经过了选择,针对病毒表面抗原的B细胞早已凋亡了

Rank: 4

现金
1284 元 
精华
帖子
168 
注册时间
2007-6-26 
最后登录
2015-3-11 
发表于 2007-8-24 01:49
好难懂喔  但愿在不久的将来,有一天我们不再受这个病魔的折磨!

Rank: 9Rank: 9Rank: 9

现金
19775 元 
精华
帖子
8446 
注册时间
2006-1-6 
最后登录
2017-7-30 

管理员或超版 荣誉之星 白衣天使

发表于 2007-12-30 08:42
领教
目前的慢性乙肝患者,大多数死于盲目的治疗和过重的心理负担

Rank: 3Rank: 3

现金
229 元 
精华
帖子
12 
注册时间
2005-6-2 
最后登录
2008-3-2 
发表于 2008-3-2 08:19
学术上进展真慢啊

Rank: 9Rank: 9Rank: 9

现金
9671 元 
精华
帖子
12248 
注册时间
2009-10-14 
最后登录
2021-11-25 

神仙眷侣 如鱼得水 翡翠丝带 健康之翼

发表于 2008-3-24 11:08
不是很难懂。
尊敬的成教授们也只能总结问题,真正的英雄是那些在做药物的研发工作者们!!比如乙克的闻院士。可惜占世界50%HBVer的中国没有强大的研发团队。所以如此之慢!疫苗,干扰素,核苷类,那个不是国外的产物?
如果HBV有美国研发HIV那样的力度,肯定早有突破了。
温故中知新

Rank: 7Rank: 7Rank: 7

现金
5567 元 
精华
帖子
3764 
注册时间
2004-6-9 
最后登录
2017-11-16 
发表于 2008-4-1 17:57
老大政府不给钱啊咱有啥办法?动动啥不需要银子啊!
上班即在线但经常没空QQ515801715

肝胆相照论坛

GMT+8, 2024-3-28 17:21 , Processed in 0.020271 second(s), 12 queries , Gzip On.

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.