肝胆相照论坛

标题: HBV核心抑制剂NVR3-778的联合核苷类似物 [打印本页]

作者: newchinabok 时间: 2015-5-2 18:46 标题: HBV核心抑制剂NVR3-778的联合核苷类似物

Effect of the combination of the HBV core inhibitor NVR 3-778 with Nucleoside Analogs or other HBV core inhibitors on the inhibition of HBV DNA Replication in HepG2.2.15 cells

http://www.natap.org/2015/EASL/EASL_74.htm

作者: newchinabok 时间: 2015-5-2 18:47

HBVCURER能不能解释一下？

作者: zgct 时间: 2015-5-2 20:34

看不明白！

作者: zgct 时间: 2015-5-2 20:37

newchinabok 发表于 2015-5-2 18:47
HBVCURER能不能解释一下？

HBVCURER大神帮助解释下

作者: bigben446 时间: 2015-5-17 01:23

不同靶点协同用药好，就像hiv里面的鸡尾酒疗法一样

作者: baobao7676 时间: 2015-5-18 20:25

由于HBV核心（衣壳）蛋白在病毒复制和持久性的多重作用，HBV核心蛋白抑制剂通过抑制HBV DNA复制、病毒组装、补充cccDNA和肝脏再感染循环，具有提高持久应答率的潜力。 NVR3-778是一种HBV核心蛋白抑制剂，在体外抗HBV活性类似于强效核苷（酸）。

本文是关于核心蛋白抑制剂叠加核苷类药物的结果。结论是替诺福韦叠加性最好。

作者: 9病成医 时间: 2015-5-19 08:50

回复 baobao7676 的帖子

谢谢您的总结归纳！

作者: newchinabok 时间: 2015-5-19 09:10

http://www.prnewswire.com/news-r ... easl-300072093.html

作者: newchinabok 时间: 2015-5-19 09:10

Novira Therapeutics Announces Presentation of Preclinical Antiviral Data for NVR 3-778 at EASL
Oral presentation: "High antiviral activity of the HBV core inhibitor NVR 3-778 in the humanized UPA/SCID mouse model"

Poster presentation: "Effect of the combination of the HBV core inhibitor NVR 3-778 with nucleoside analogs or other HBV core inhibitors on the inhibition of HBV DNA replication in HepG2.2.15 cells"

Google+ Share with LinkedIn
DOYLESTOWN, Pa., April 27, 2015 /PRNewswire/ -- Novira Therapeutics, Inc., a privately held, clinical-stage biopharmaceutical company developing novel therapies for curative treatment of chronic hepatitis B virus (HBV) infection, today announced the presentation of preclinical antiviral data for its lead HBV core inhibitor candidate, NVR 3-778, at the 2015 annual meeting of the European Association for the Study of the Liver (EASL) in Vienna, Austria.

The antiviral activity of NVR 3-778 from studies performed in a humanized UPA/SCID mouse model was described in an oral presentation. As monotherapy given for a six week duration, NVR 3-778 showed HBV DNA suppression efficacy superior to pegylated interferon (PEG-IFN) and similar to that of the widely prescribed nucleoside analog entecavir. All mice responded to treatment and there was no evidence for drug resistance. The highest efficacy was observed in mice that received NVR 3-778 in combination with PEG-IFN, where all treated mice (n=11) reduced serum HBV DNA below the limit of quantitation.

In a poster session, Novira presented results from the combination of NVR 3-778 with nucleoside analogs lamivudine, tenofovir or entecavir in a cell-based model. These data showed additive and synergistic antiviral activity without cytotoxicity. NVR 3-778 also showed additive antiviral activity in combination with an HBV core inhibitor from another chemical class.

"The apparent synergy of NVR 3-778 in combination with PEG-IFN is very encouraging. This is the first time that we have seen a treatment with higher DNA suppression efficacy than entecavir in a humanized mouse model," said Klaus Klumpp, Ph.D., Novira's VP of Discovery and Biology. "Having access to a new class of Direct Acting Antivirals, or DAAs, enables the clinical testing of combination treatments that may significantly intensify the suppression of HBV production in the liver. Highly potent DAA combination treatment may be able to reduce the rate of new hepatocyte infection below that of infected hepatocyte clearance in HBV infected patients and may thereby lead to a clinically-relevant improvement in functional cure rates."

About NVR 3-778

NVR 3-778 is a small molecule, direct acting antiviral, for oral administration in patients with Chronic Hepatitis B (CHB) that inhibits the HBV core or capsid protein. HBV core is a novel and promising drug target with multiple activities required for viral replication and persistence. Inhibition of the HBV core protein function by NVR 3-778 offers the potential for more efficient suppression of virus production and replication, leading to improved durable viral suppression and functional cure rates. NVR 3-778 completed a Phase 1a clinical trial in 2014 and is currently enrolling a Phase 1b clinical trial.

About HBV

Hepatitis B infection presents a significant unmet medical need with an estimated 350 million people worldwide living with chronic HBV infection. A significant number of patients with chronic infection incur a higher risk of developing cirrhosis and cancer. It is estimated that 60% of hepatocellular carcinoma (liver cancer) is a direct consequence of HBV infection. Current drugs approved for the management of CHB include PEG-Interferon and nucleot(s)ides which can effectively suppress virus replication, but rarely lead to a cure.

About Novira Therapeutics

Novira Therapeutics, Inc., is a privately held biopharmaceutical company focused on discovery and development of first-in-class antiviral drugs for the treatment of chronic HBV infection (CHB), a global disease with a high level of unmet medical need. The company is employing innovative chemistry and biology technologies to discover small molecule inhibitors of the HBV core or capsid protein as well as other drugs with novel mode of action. The company's novel antivirals will offer the potential to address the limitations of current CHB therapies when used either as mono-therapy or in combination with existing standards of care.

作者: newchinabok 时间: 2015-5-19 09:11

Novira Therapeutics宣布临床前介绍抗病毒数据的NVR 3-778在EASL
口头陈述：“HBV核心抑制剂NVR 3-778的人性化UPA / SCID小鼠模型的高抗病毒活性”

海报介绍：“HBV核心抑制剂NVR 3-778与HBV DNA复制的HepG2.2.15细胞抑制核苷类似物或其它HBV核心抑制剂的组合的效应”

Google+分享与LinkedIn
DOYLESTOWN，霸，2015年4月27日/新华美通/ - 。Novira Therapeutics公司是一家私人持有，临床阶段的生物技术企业，开发创新疗法治疗治疗慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染，今天宣布的表现抗病毒的临床前数据的铅HBV核心抑制剂候选人，NVR 3-778，在欧洲协会为肝脏（EASL）在维也纳，奥地利研究2015年年度会议。

NVR 3-778从一个人性化的UPA / SCID小鼠模型进行研究的抗病毒活性在口头陈述中描述。作为单一疗法给予为六个为期一周，NVR 3-778表现出乙型肝炎病毒DNA的抑制效力优于聚乙二醇干扰素（PEG-IFN）和类似于广泛处方核苷类似物恩替卡韦。所有的小鼠对治疗有反应，并没有任何证据为耐药性。最高效力，观察在接受NVR 3-778结合PEG-IFN，小鼠，所有处理过的小鼠（n = 11）低于定量极限降低血清HBV DNA。

在海报会议，Novira提出的结果从NVR 3-778的组合的核苷类似物拉米夫定，替诺福韦或恩替卡韦在基于细胞的模型。这些数据显示，无毒性的添加剂和协同的抗病毒活性。 NVR 3-778还显示出与从另一种化学类的HBV核心抑制剂组合添加剂的抗病毒活性。

“NVR 3-778的与PEG-IFN组合的表观协同作用是非常令人鼓舞的。这是第一次，我们已经看到比恩替卡韦在人源化小鼠模型中越高的DNA抑制功效的治疗，”克劳斯Klumpp的中，Ph表示。 D.，发现和生物学Novira的副总裁。 “能够使用一类新的直接作用抗病毒药，或的DAA的，使得能够联合治疗的临床试验，可能显著加紧在肝脏HBV产生的抑制。高度有效的DAA组合治疗可以是能够减少的新肝细胞的比率下面是感染的肝细胞清除乙肝病毒感染者的感染，并可能由此导致的功能治愈率一个临床相关的改善。“

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 10:35

newchinabok 发表于 2015-5-2 18:47
HBVCURER能不能解释一下？

今天才看到你的这个帖子，答复晚了。下次你要是问我问题，麻烦@我一下，否则你点我的名我却看不到，你还以为我躲起来了，呵呵。

其实所谓组合效应，如果你去查一查之前在2.2.15以及其他细胞模型上的实验结果，会发现其实tenofovir+enticavir或者其他nucleoside+nucleotide的组合也有类似的“加强”效果，也就是所谓1+1>1。但是在实际治疗中，除非是多重耐药患者，是不会采用这种联合治疗方案的。

Novira关于人源化小鼠的大会报告当时我还问了一个问题。他们声称，其NVR 3-778+PEG-IFN的组合方案，是业界首次报道的一种优于Entecavir的降低HBV DNA效果的治疗方案。在其PPT中，他们显示了NVR 3-778，Entecavir，PEG-IFN，NVR 3-778+PEG-IFN这几种治疗的效果比较，显示NVR 3-778+PEG-IFN的效果最好，却故意没有和Entecavir+PEG-IFN的比较。很明显这是公司常用的一种惯用的“误导”宣传。因为实际上，Entecavir+PEG-IFN是所有组合中最好的，这点在临床中也得到了大量的验证。对于我的问题，他们并没有正面回答，可以理解。

NVR 3-778无疑是目前走的最快也看起来最有希望的core inhibitor，这点绝不否认。但之前大家对core inhibitor所寄予的厚望，并非只在单纯抑制病毒DNA复制上，而是其他核苷类药物做不到的方面，比如抑制cccDNA形成和修饰，抑制cccDNA的转录活性从而降低HBsAg和HBeAg，以及调节先天免疫激活等等。但很郁闷的是，这些关键效应，也是Novira此前所极力宣传的所谓核心优势，在包括动物实验在内的各种临床前模型中，并没有能直接体现出来。当然，眼下以及走到了临床阶段，相信一切未来会见分晓。可以很直白的说，如果在human trial上也体现不出差异来，无法检测到cccDNA或HBsAg的相关变化，那么NVR 3-778也就不会有什么实质前途了。

作者: hao2014 时间: 2015-5-19 10:36

这个也是个慢性子

作者: StephenW 时间: 2015-5-19 13:57

Extract from an article by Ju-Tao Guo, on the importance of comnination treatment

Jinhong Chang, Fang Guo, Xuesen Zhao, Ju-Tao Guo
5.1. Combination therapy with antivirals targeting multiple distinct steps of HBV replication

The key to the success of antiviral therapies against the infection of hepatitis C virus and human immunodeficiency virus is the combination therapy with antivirals targeting multiple distinct viral and/or host functions. Such a therapeutic approach improves antiviral efficacy and prevents emergence of drug-resistant viruses. However, treatment of chronic hepatitis B with combination therapies of two different nucleoside analogs or a nucleoside analog and pegIFN-α does not demonstrate significantly improved clinical benefits 75. Currently, compounds that inhibit HBV entry into hepatocytes 76, RNase H activity 77 and assembly of nucleocapsids 78, 79, 80 and 81 are under preclinical and clinical development ( Fig. 1 and Table 2). It is anticipated that combination therapies with nucleoside analogs and one or multiple of the novel antivirals should more potently suppress HBV replication and de novo cccDNA synthesis in all HBV infected cells, which could potentially improve the rate of functional cure. In absence of a functional cure, it is also expected that the combination therapies may improve the control of HBV replication in the minority of patients for whom nucleoside analog monotherapy is inadequate to suppress viral titers below the clinical detection limit 91. In addition, the combination therapy may make the antiviral drugs with low genetic barriers to resistance, such as lamivudine, retain effectiveness, which is particularly valuable in developing countries 92.

作者: StephenW 时间: 2015-5-19 13:59

本帖最后由 StephenW 于 2015-5-19 14:00 编辑

从郭涛文章中提取，对联合治疗的重要性

张金红，郭方，钱学森赵菊郭涛
5.1。联合治疗针对多个不同的步骤HBV复制的抗病毒药物

关键抗丙型肝炎病毒与人类免疫缺陷病毒感染抗病毒治疗的成功是中西医结合治疗与靶向多个不同的病毒和/或主机功能的抗病毒药物。这样的治疗方法改善抗病毒效力，并防止耐药病毒的出现。然而，治疗与两个不同的核苷类似物的组合疗法或核苷类似物和pegIFN-α的治疗慢性乙型肝炎的不演示显著改善的临床益处75.目前，抑制乙肝病毒进入肝细胞76化合物，RNA酶H活性77和组装核衣壳78，79，80和81正在临床前和临床开发（图1和表2）。可以预期，组合疗法与核苷类似物和一种或多种新颖的抗病毒药物应更有力地抑制在所有的HBV感染的细胞，这有可能改善功能治愈率HBV复制和从头cccDNA的合成。在不存在功能性治愈，还预期该组合疗法可以改善HBV复制的患者的少数为谁核苷类似物单一疗法不足以抑制低于临床检测限91.病毒滴度另外的控制下，组合疗法可能使抗病毒药物具有低耐药基因屏障，如拉米夫定，保留有效性，这是在发展中国家92特别有价值

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 14:01

本帖最后由 HBVCURER 于 2015-5-19 14:13 编辑

对于联合治疗，想象和猜测没有多大意义，得靠临床数据说话。

对于ETV+IFN，数据是现成的，类似的最新临床数据还有很多，就不多重复了。郭教授文中所引用的相关数据，大致是比较老旧的，受到先前实验设计和样本量的限制，眼下已经没有太多的参考价值了，认识总是在不断进步的。

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25348661

Hepatology. 2015 May;61(5):1512-22. doi: 10.1002/hep.27586. Epub 2015 Feb 27.
Adding pegylated interferon to entecavir for hepatitis B e antigen-positive chronic hepatitis B: A multicenter randomized trial (ARES study).
Brouwer WP1, Xie Q, Sonneveld MJ, Zhang N, Zhang Q, Tabak F, Streinu-Cercel A, Wang JY, Idilman R, Reesink HW, Diculescu M, Simon K, Voiculescu M, Akdogan M, Mazur W, Reijnders JG, Verhey E, Hansen BE, Janssen HL; ARES Study Group.

Abstract
Entecavir (ETV) is a potent inhibitor of hepatitis B viral replication, but long-term therapy may be required. We investigated whether adding on pegylated interferon (Peg-IFN) to ETV therapy enhances serological response rates. In this global investigator-initiated, open-label, multicenter, randomized trial, hepatitis B e antigen (HBeAg)-positive chronic hepatitis B (CHB) patients with compensated liver disease started on ETV monotherapy (0.5 mg/day) and were randomized in a 1:1 ratio to either Peg-IFN add-on therapy (180 µg/week) from week 24 to 48 (n = 85) or to continue ETV monotherapy (n = 90). Response was defined as HBeAg loss with HBV DNA <200 IU/mL at week 48. Responders discontinued ETV at week 72. All patients were followed until week 96. Response was achieved in 16 of 85 (19%) patients allocated to the add-on arm versus 9 of 90 (10%) in the monotherapy arm (P = 0.095). Adjusted for HBV DNA levels before randomized therapy, Peg-IFN add-on was significantly associated with response (odds ratio: 4.8; 95% confidence interval: 1.6-14.0; P = 0.004). Eleven (13%) of the add-on-treated patients achieved disease remission after ETV cessation versus 2 of 90 (2%) of those treated with monotherapy (P = 0.007), which was 79% (11 of 14) versus 25% (2 of 8) of those who discontinued ETV (P = 0.014). At week 96, 22 (26%) patients assigned add-on versus 12 (13%) assigned monotherapy achieved HBeAg seroconversion (P = 0.036). Peg-IFN add-on led to significantly more decline in hepatitis B surface antigen, HBeAg, and HBV DNA (all P < 0.001). Combination therapy was well tolerated.
CONCLUSION: Although the primary endpoint was not reached, 24 weeks of Peg-IFN add-on therapy led to a higher proportion of HBeAg response, compared to ETV monotherapy. Add-on therapy resulted in more viral decline and appeared to prevent relapse after stopping ETV. Hence, Peg-IFN add-on therapy may facilitate the discontinuation of nucleos(t)ide analogs. (Hepatology 2015;61:1512-1522).

而对于其他联合治疗方案，我之前也提到过，多靶点会有其优势，尤其是联合抑制病毒复制+抑制HBsAg+增强天然及特异性免疫反应或直接杀伤被感染细胞的策略，会有较大成功的希望。但这一切都得经受最基本的动物实验乃至临床实验的检验而非想当然。若是仅仅按照理论和猜想来，HBV早就被攻克了，又怎么会遭遇一次又一次的失败呢？这个道理很简单，但并不是所有人都能很容易的接受，人性使然吧。

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 14:37

本帖最后由 HBVCURER 于 2015-5-19 14:52 编辑

回头再来说说core inhibitor未来可能采用的联合治疗方案。实际上，连Novira自己都没有报道其在人源化小鼠模型中NVR 3-778+ETV的方案，仅仅只是报告了在2.2.15细胞水平的简单验证，想过这是为什么了吗？如果仔细看2.2.15细胞实验结果，会发现这种和核苷药物联合的协同效果非常非常有限，和两者间所使用的剂量配比也有直接的关系，在临床中的实际意义很小。在人源化小鼠的结果中，我们也没有看到除了DNA指标之外NVR 3-778显示出之前所宣称的各种优势效应，比如降低cccDNA或者HBsAg水平，激活先天免疫抗病毒反应等等，而这些其实才是各大公司所最为关注的所在。

作者: yelanglms 时间: 2015-5-19 15:13

HBVCURER 发表于 2015-5-19 14:37
回头再来说说core inhibitor未来可能采用的联合治疗方案。实际上，连Novira自己都没有报道其在人源化小鼠模 ...

请在七种武器里面说一说，现在有哪些有希望的方法。
让大家感觉有点希望。

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 15:29

yelanglms 发表于 2015-5-19 15:13
请在七种武器里面说一说，现在有哪些有希望的方法。
让大家感觉有点希望。
...

单打独斗全都没戏，联合治疗前景广阔。联合谁，怎么联合，目前是临床研究的热点；我没有现成的答案给你，只能猜测。

作者: StephenW 时间: 2015-5-19 15:47

回复 HBVCURER 的帖子

连Novira自己都没有报道其在人源化小鼠模型中NVR 3-778+ETV的方案，仅仅只是报告了在2.2.15细胞水平的简单验证，想过这是为什么了吗？如果仔细看2.2.15细胞实验结果，会发现这种和核苷药物联合的协同效果非常非常有限，和两者间所使用的剂量配比也有直接的关系，在临床中的实际意义很小

在细胞培养，不是活小鼠模型
1.效果如何, 可以看http://hbvhbv.info/forum/thread-1389018-1-1.html
2.技术上，为什核苷药物联合使用 - 在动物或细胞模型, 如果细胞不能自然HBV感染, 联合核苷药物反映真实情况(低HBVDNA，没有再感染)

联合核苷药物和联合干扰素不同性质, 很难比较.

作者: luckable 时间: 2015-5-19 15:49

回复 StephenW 的帖子

请问stephenw大哥，丙肝的特效药是联合治疗，还是单打独斗啊？

作者: StephenW 时间: 2015-5-19 15:52

回复 luckable 的帖子

丙肝的特效药是联合治疗，还是单打独斗啊？

单打功效 > 90%
联合治疗功效 > 99%

作者: luckable 时间: 2015-5-19 15:57

回复 StephenW 的帖子

好的，谢谢。说明确实是特效药，本身功效就高

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 16:20

StephenW 发表于 2015-5-19 15:47
回复 HBVCURER 的帖子

连Novira自己都没有报道其在人源化小鼠模型中NVR 3-778+ETV的方案，仅仅只是报告了 ...

你可能没有明白我的意思。Novira在EASL上还有一个专门的人源小鼠上的效果报告，前面有人已经贴过了。在这个报告中，他们比较了NVR 3-778，ETV，NVR 3-778+IFN的结果，我可以很肯定的告诉你，他们在实验中也同时做了NVR 3-778+ETV，ETV+IFN，但是这些结果他们是不会拿出来秀的，原因不说相信你也明白。

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 16:25

本帖最后由 HBVCURER 于 2015-5-19 17:26 编辑

StephenW 发表于 2015-5-19 15:52
回复 luckable 的帖子

丙肝的特效药是联合治疗，还是单打独斗啊？

但是FDA就是不批Sofosbuvir monotherapy，这是为什么呢？Like the other
DAAs, sofosbuvir should not be prescribed as monotherapy. 医生也都是根据指南这么来操作的。

HBV要比HCV复杂很多，monotherapy会有戏吗？每个人的观点可能会不同，但是之前网友也贴过很多业界达人的观点，在这个问题上是离奇的高度一致。

作者: StephenW 时间: 2015-5-19 16:30

回复 HBVCURER 的帖子

我明白你的意思。我只是不完全同意.

专门的人源小鼠 - 许多种, 你知道他们的"专门的人源小鼠" 可以被HBV自然感染?免疫系统多么相似人的免疫系统?

作者: StephenW 时间: 2015-5-19 16:47

luckable 发表于 2015-5-19 15:57
回复 StephenW 的帖子

好的，谢谢。说明确实是特效药，本身功效就高

更正.
单打(sofosbuvir )功效 - 60%(临床试验), 未经FDA批准.
sofosbuvir + 老药ribavirin 治愈 > 90%.

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 17:02

本帖最后由 HBVCURER 于 2015-5-19 17:29 编辑

回复 StephenW 的帖子

1.效果如何, 可以看http://hbvhbv.info/forum/thread-1389018-1-1.html
2.技术上，为什核苷药物联合使用 - 在动物或细胞模型, 如果细胞不能自然HBV感染, 联合核苷药物反映真实情况(低HBVDNA，没有再感染)

1. 效果如何，千万别只去看结论，那些是公司希望你看到的经过加工的，请仔细看具体的图表和数据以及下面的说明。尽管他们可以选择性的展示部分数据来“引导”你得出他们想让你得出的结论，但数据本身不会造假。

2. Novira的真正卖点是抑制病毒DNA复制之外的种种机制。低HBVDNA，没有再感染，这个单纯的核苷药物已经做的很好了，如果你比较TDF+ETV，效果也是类似的。

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 17:04

本帖最后由 HBVCURER 于 2015-5-19 17:30 编辑

StephenW 发表于 2015-5-19 16:30
回复 HBVCURER 的帖子

我明白你的意思。我只是不完全同意.

他们的人源化小鼠，里面用的就是来自人的肝细胞重建的liver。你可以理解为小鼠体内长了一个人肝。这个模型很多公司都在用，模型本身完全可以支持我所说的那几种特殊效应的检测，相信这也是Novira为什么要用这个模型的原因。但是，他们却没有报道相应的结果，作为同行，我非常能够理解。

作者: luckable 时间: 2015-5-19 17:10

HBVCURER 发表于 2015-5-19 17:02
回复 StephenW 的帖子

1.效果如何, 可以看http://hbvhbv.info/forum/thread-1389018-1-1.html

哭哭。。
看完以后，感觉好没前景

作者: StephenW 时间: 2015-5-19 17:53

HBVCURER 发表于 2015-5-19 17:02
回复 StephenW 的帖子

1.效果如何, 可以看http://hbvhbv.info/forum/thread-1389018-1-1.html

It is anticipated that combination therapies with nucleoside analogs and one or multiple of the novel antivirals should more potently suppress HBV replication and de novo cccDNA synthesis in all HBV infected cells, which could potentially improve the rate of functional cure.

我非常同意上述观点.
"抑制病毒DNA复制之外的种种机制" (cccDNA的影响)是额外效益.

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 18:08

本帖最后由 HBVCURER 于 2015-5-19 18:18 编辑

StephenW 发表于 2015-5-19 17:53
It is anticipated that combination therapies with nucleoside analogs and one or multiple of the no ...

"It is anticipated"

说实话，这不过是炒冷饭罢了。其实多年前同样是在2.2.15上，各种NAs的彼此间的联合治疗方案也是类似的结果，也是类似的“anticipated”。有兴趣可以看看大牛Zoulim的相关总结：
http://jac.oxfordjournals.org/content/55/5/608.full

“more potently suppress HBV replication and de novo cccDNA synthesis”，前者效果“slight to moderate”，也仅仅只是细胞水平的效果罢了，而后者眼下则完全没看到。你之前贴过Novira主页上那个精彩纷呈的机制解析图，每个都很关键都很重要，为啥现在就都变成额外效益了？

作者: StephenW 时间: 2015-5-19 18:32

HBVCURER 发表于 2015-5-19 17:04
他们的人源化小鼠，里面用的就是来自人的肝细胞重建的liver。你可以理解为小鼠体内长了一个人肝。这个模 ...

"Because human hepatocyte chimeric mice (来自人的肝细胞重建的liver) are immunocompromised, they are not suited for vaccine studies or evaluation of immune responses"
“因为人肝细胞的嵌合小鼠（来自人的肝细胞重建的肝脏）的免疫功能低下，它们不适合用于疫苗研究的免疫应答或评价”

2.6. Humanized Mice with Human Immune System and Liver Tissues
Due to the absence of a functional immune system, the above-described uPA/scid and
Fah−/−Rag2−/−Il2rg−/− mouse models support HBV infection but no liver disease is observed [48,53]. To reproduce human immune response to HCV in a small animal model, Washburn et al. developed humanized mice reconstituted with human immune system and liver tissues (AFC8-hu HSC/Hep) [68].
They used Balb/C Rag2−/−γC-null mice that were genetically engineered to express a fusion protein of
FK506 binding protein (FKBP) and caspase 8 with inducible suicidal activity in hepatocytes under the
control of albumin promoter (AFC8). Co-transplantation of human CD34+ hematopoietic stem cells
and human hepatocyte progenitors into the transgenic mice treated with FKBP dimerizer allowed for the successful engraftment of immune cells and hepatocytes. AFC8-hu HSC/Hep became infected with HCV in the livers, generated a human immune T cell response against the virus, and developed hepatitis and fibrosis [68]. Thus, HBV infection experiments using these mice are expected to uncover heretofore unsuspected virologic and immunologic aspects of HBV infection."
2.6。人性化的小鼠与人类免疫系统和肝脏组织
由于不存在的功能性免疫系统，在上述的uPA / SCID和
FAH - / - 的Rag2 - / - IL2RG - / - 小鼠模型支持HBV感染，但没有肝脏疾病观察[48,53]。至
重现的小动物模型，沃什伯恩等人于HCV的人免疫应答。发达
与重建人体免疫系统和肝脏组织（AFC8虎HSC / HEP）[68]人性化的小鼠。
他们使用的Balb / C的Rag2 - / - 这是基因工程化以表达的融合蛋白γC无效的老鼠
FK506结合蛋白（FKBP）和caspase 8具有可诱导的自杀行为下的肝细胞
控制白蛋白启动（AFC8）的。共移植人CD34 +造血干细胞的
和人类肝细胞祖细胞与FKBP dimerizer治疗的转基因小鼠允许
免疫细胞和肝细胞的成功植入。 AFC8虎HSC /酷感染了
丙型肝炎病毒在肝，产生针对病毒人免疫T细胞应答，并且开发
肝炎和纤维化[68]。因此，使用这些小鼠HBV感染实验有望揭开
迄今没有料到的病毒学和HBV感染的免疫学方面。

我不是专家, 我想选择的小鼠模型在解释结果是重要的.
Using this model{来自人的肝细胞重建的live], Belloni et al demonstrated that IFN-α suppresses HBV replication through the mechanism of epigenetic control of cccDNA function and transcription [60]
采用这种模式{来自人的肝细胞重建的实时]，贝罗尼等人证实，IFN-α通过表观遗传调控cccDNA的功能和转录[60机制抑制HBV的复制].
因此干扰素可掩盖NVR3-778的效果.

作者: StephenW 时间: 2015-5-19 18:37

HBVCURER 发表于 2015-5-19 18:08
"It is anticipated"

说实话，这不过是炒冷饭罢了。其实多年前同样是在2.2.15上，各种NAs的彼此 ...

"各种NAs的彼此间的联合治疗方案" 和NAs联合核心抑制剂, 应该是不同的, 不同的目标，不同的复制阶段.

作者: StephenW 时间: 2015-5-19 18:42

HBVCURER 发表于 2015-5-19 18:08
"It is anticipated"

说实话，这不过是炒冷饭罢了。其实多年前同样是在2.2.15上，各种NAs的彼此 ...

你之前贴过Novira主页上那个精彩纷呈的机制解析图，每个都很关键都很重要

Figure 3 depicts the potential contributions of NVR 3-778 to the functional cure of CHB infection through inhibition of the HBV Core dimer. The biological activities of HBV Core that are required for HBV persistence include:

Core dimer is the building block for assembly of the viral capsid. Core Inhibitors promote the formation of abnormal, dysfunctional viral capsids and thereby block production of infectious virus progeny.
The viral capsid can exit the hepatocyte or traffic back to the nucleus to replenish and maintain a stable number of cccDNA molecules. Core Inhibitors can also block cccDNA replenishment and contribute indirectly to inhibition of HBV replication.
Core binds the promoter regions of interferon stimulated genes (ISG) in the host chromosome to inhibit ISG expression and suppress the host innate immune response. Core Inhibitors that can induce ISG expression may restore the anti-HBV host innate immune response, leading to non-cytolytic clearance of infected hepatocytes.
Core binds cccDNA and maintains the mini-chromosome in a transcriptionally active state, thus allowing continuous production of new virus. Core Inhibitors that can prevent binding of Core to cccDNA will silence the cccDNA mini-chromosome. Silencing of cccDNA can prevent production of virus progeny and may restore host anti-HBV immune response.

Core Inhibitors have the potential to inhibit all of these activities. Complete suppression of infectious virus production and restoration of host innate immune response could lead to enhanced elimination of infected hepatocytes and, thus, greater functional cure rates in patients with chronic infection.

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 18:43

StephenW 发表于 2015-5-19 18:32
"Because human hepatocyte chimeric mice (来自人的肝细胞重建的liver) are immunocompromised, they ar ...

呵呵，为什么要去考虑干扰素的掩盖效果？直接看NVR3-778在人源小鼠上单独治疗的效果即可，可以和未治疗的对照小鼠比较，可以和ETV治疗的小鼠比较。如果能体现出任何之前所宣传的特殊效应来，比如最简单的指标，降HBsAg或者降cccDNA，哪怕只有slightly一点点，你觉得公司在这种大场面会不大书特书这种NUCs所没有的效果吗？我已经说的足够明白了吧...

其实，如果他们能show哪怕只是一点点的这种趋势，他们就会立即被2-3家公司争相抢购的。信吗？

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 18:45

本帖最后由 HBVCURER 于 2015-5-19 18:47 编辑

StephenW 发表于 2015-5-19 18:42
你之前贴过Novira主页上那个精彩纷呈的机制解析图，每个都很关键都很重要

“have the potential to inhibit all of these activities”

可是为啥在各种模型中都看不到相应的数据来证实呢？光字面的potential有啥用呀？别被公司的各种宣传洗脑，那是拿来忽悠投资人的，而我们要看的是实实在在得效果数据。

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 18:58

本帖最后由 HBVCURER 于 2015-5-19 19:01 编辑

StephenW 发表于 2015-5-19 18:32
"Because human hepatocyte chimeric mice (来自人的肝细胞重建的liver) are immunocompromised, they ar ...

其实你虽然不是专家，有些认识还不全面，但是了解的信息已经很多了也有独立的思考，所以还是愿意和你深入的探讨。

Novira所用的是基于uPA/SCID原理的人源小鼠，其基本机制就是敲出掉小鼠自身的获得性免疫系统以及鼠源肝细胞，这样就不会产生免疫排斥反应，从而可以在被清除掉的小鼠自身肝脏的原位移植并再生出人源的肝组织来。这种肝组织可以高效的支持HBV的感染和复制，同时也保留了大部分的基于人肝脏细胞的先天性免疫/抗病毒反应，所以尽管不能用来评估获得性免疫反应比如治疗性疫苗的效果，但是用来评估先天性免疫反应还是大有用武之地的，比如干扰素以及某些细胞因子等的直接抗病毒效果。在这个模型中，自然也可以用来评估小分子药物对cccDNA以及HBsAg的抑制作用，这是目前大家所关注的焦点。Novira使用这个小鼠模型来验证他们的结果，自然不仅仅只是为了看对HBV DNA的抑制效果，因为如果仅仅只是为了这个目的，那就会有很多种其他的小鼠模型完全可以达到同样的效果，但比这个小鼠模型要便宜的多的多的多。那么问题来了，为什么没有相应的结果呢？是他们没有做相应的检测吗?

作者: StephenW 时间: 2015-5-19 19:46

回复 HBVCURER 的帖子

"每个都很关键都很重要" 同意，但1,2,3都重要.
"光字面的potential有啥用呀？" - 没有临床证据, 每个都是"潜在"的.
"直接看NVR3-778在人源小鼠上单独治疗的效果即可" - 你怎么区别1和4?

作者: HBVcheck 时间: 2015-5-19 19:55

刚才随便看了看，我也不懂这些，我的理解是，Novira花了很多钱，它肯定关注的是能不能取得超过目前的治疗效果！这个主要就是看cccDNA以及HBsAg的抑制作用这2个指标！使用uPA/SCID原理的人源小鼠可以达到判断这个的目的！
不过也有一种可能，就是它有一些结果，但它认为由于某些原因，比如，对这些结果它还没有很好的理解！现在就不公布了！
当然这是我随便猜测的，我感染还是倾向愈短期之内不会有重大突破！
因为我觉得最重要的是，跟HIV,HCV比，对HBV的认识是不够的！

作者: StephenW 时间: 2015-5-19 19:55

回复 HBVCURER 的帖子

同时也保留了大部分的基于人肝脏细胞的先天性免疫/抗病毒反应，所以尽管不能用来评估获得性免疫反应比如治疗性疫苗的效果，但是用来评估先天性免疫反应还是大有用武之地的

"人肝脏细胞的先天性免疫" 这是什么？人天然杀伤细胞(natural killer cells)，人巨噬细胞(macrophages)?
"人肝脏细胞的先天性抗病毒反应" 这是什么？干扰素(autocrine)?

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 20:05

本帖最后由 HBVCURER 于 2015-5-19 20:07 编辑

StephenW 发表于 2015-5-19 19:46
回复 HBVCURER 的帖子

"每个都很关键都很重要" 同意，但1,2,3都重要.

"光字面的potential有啥用呀？" - 没有临床证据, 每个都是"潜在"的.

不单是没有临床证据，而是连细胞实验动物实验中也都没有证据，或者直白点说，目前所有的数据都不支持这些所谓的“潜在”作用。而这些潜在作用恰恰是当初最大的卖点。当然，我无法绝对排除，NVR3-778在临床实验中来个大逆转将所有这些细胞上小鼠中所看不到的潜在作用都在人体上得到体现这种可能性。如果真是这样，那么将会是写入教科书的经典范例。

"直接看NVR3-778在人源小鼠上单独治疗的效果即可" - 你怎么区别1和4?

很简单，1单纯只是抑制病毒DNA的复制，而4诱导cccDNA的沉默，那么那么viral RNA会降低，同时HBsAg和HBeAg也都会随之降低。这些指标都不难检测，Novira也一定都会检测。

作者: StephenW 时间: 2015-5-19 20:10

回复 HBVCURER 的帖子

cccDNA的沉默所有病毒基因(viral gene)沉默??

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 20:12

HBVcheck 发表于 2015-5-19 19:55
刚才随便看了看，我也不懂这些，我的理解是，Novira花了很多钱，它肯定关注的是能不能取得超过目前的治疗 ...

Novira手头自然是有cccDNA以及HBsAg的结果的，这个大家都心知肚明。至于你说的“对这些结果它还没有很好的理解”，呵呵，那么大概率是这一种可能，那就是和之前预想的不一致，如果一致谁会不公布？至于怎么个不一致为什么不一致，大家可以发挥想象力了。

作者: StephenW 时间: 2015-5-19 20:15

回复 HBVCURER 的帖子

Core binds cccDNA and maintains the mini-chromosome in a transcriptionally active state, thus allowing continuous production of new virus. Core Inhibitors that can prevent binding of Core to cccDNA will silence the cccDNA mini-chromosome.

"连细胞实验动物实验中也都没有证据" - 许多其他科学家证明了上述结果, 不是来自Novira.

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 20:16

StephenW 发表于 2015-5-19 20:10
回复 HBVCURER 的帖子

cccDNA的沉默所有病毒基因(viral gene)沉默??

你可以这么理解。通俗点说就是cccDNA在转录水平上处于一种失活的关闭状态，没有病毒RNA的产生，那么自然也就没有蛋白的表达和病毒的复制。

所以目前有一种说法，functional cure = cccDNA silence。

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 20:19

本帖最后由 HBVCURER 于 2015-5-19 20:20 编辑

StephenW 发表于 2015-5-19 19:55
回复 HBVCURER 的帖子

同时也保留了大部分的基于人肝脏细胞的先天性免疫/抗病毒反应，所以尽管不能用来评 ...

这里所指的人肝脏细胞的先天性免疫/抗病毒反应，是不依赖于免疫细胞的抗病毒机制，主要是细胞因子（干扰素，白细胞介素等等）通路上游的信号分子（TLRs, RIG-I）的激活以及下游的ISGs基因(MxA,PKR等等)的表达。

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 20:32

本帖最后由 HBVCURER 于 2015-5-19 20:52 编辑

StephenW 发表于 2015-5-19 20:15
回复 HBVCURER 的帖子

Core binds cccDNA and maintains the mini-chromosome in a transcriptionally ac ...

在细胞水平上，确实有实验室发表了相关的结果，这次EASL上就有报道，可惜没有talk只有一张poster，但也得到了业界的特别关注。我贴附件的权限太小，就不把电子版放上来了。这些结果目前还很初步很不完善，存在较大的争议，有些结果和之前的数据相左，有待更多实验室的重复以及在其他模型上的验证。这里说是“证明了上述结果”只怕不妥。

我之前的表述很清楚，Novira完成了一系列设计完善的实验，但并没有获取任何证据表明他们的inhibitor存在这些效果。至于未来会不会有新的inhibitor设计出来可以展现出这些效果，我当然不能排除。毕竟在那张图中，每一种机制在理论上都是说的通的。为啥没效果，所有人都很困惑。

作者: 战天斗hbv 时间: 2015-5-19 20:48

感谢两位大神的精彩解读、最近我越来越惭愧了、4天时间突击了1篇paper、1篇专利、单位逼的、有摊派指标、我真是业界之耻、要是研究hbv的科研人员和我一样、那就悲剧了……人在屋檐下、哪有不低头

作者: StephenW 时间: 2015-5-19 21:07

本帖最后由 StephenW 于 2015-5-19 21:09 编辑

回复 HBVCURER 的帖子

所有病毒基因(viral gene)沉默= cccDNA silence=functional cure 。
我问"4诱导所有病毒基因(viral gene)沉默"?我理解epigenetic control可以用来开启/关闭单个基因，但所有？

ISG Interferon Stimulated Genes, ISG表达, 如何影响先天性免疫/抗病毒反应?

作者: HBVCURER 时间: 2015-5-19 21:30

StephenW 发表于 2015-5-19 21:07
回复 HBVCURER 的帖子

所有病毒基因(viral gene)沉默= cccDNA silence=functional cure 。

所有病毒基因(viral gene)沉默= cccDNA silence=functional cure 。
我问"4诱导所有病毒基因(viral gene)沉默"?我理解epigenetic control可以用来开启/关闭单个基因，但所有？

epigenetic control可以用来开启/关闭单个基因，这个主要是指相对human genome这个尺度范围上的理想描述。这种调控也不是指向单个基因，而其实是一类具有共性的基因。很明显现实世界中还没能进化出一套epigenetic control的系统，可以精细的区分基因组上三万多个基因并分别给予独自的调控。cccDNA本身是一个很小的分子，3.2kb也仅仅只是一个普通人类基因的启动子区的长度而已。此外，尽管使用5个不同的启动子表达7个病毒蛋白，但所有的viral基因都共享同一个病毒增强子元件，所以他们的转录也是有共性的。所以，对cccDNA的epigenetic control，对于不同的病毒基因，至少在趋势上，应该是一致的，但强度上会有差别。

ISG Interferon Stimulated Genes, ISG表达, 如何影响先天性免疫/抗病毒反应?

因为很多ISGs本身就是直接的抗病毒分子，比如MxA，PKR，RNaseL APOBC3等等，本身就能直接抑制病毒复制。而另一些ISGs，是通过其他抗病毒基因来间接抑制病毒感染。这些都属于先天性免疫的一部分。

作者: StephenW 时间: 2015-5-19 23:21

回复战天斗hbv 的帖子

研究hbv和报告hbv研究完全不同. 有一天，我希望报告你的研究.

作者: doremifaso 时间: 2015-5-20 09:40

哇塞~~昨晚两位大神简直帅呆了！！
虽然看不大懂，但是被二位的魅力深深地迷住了！！

欢迎光临肝胆相照论坛 (http://hbvhbv.info/forum/)