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8楼
发表于 2008-12-27 08:50
小柴胡汤对实验性肝损伤小鼠Th1/Th2免疫平衡的影响
免疫性肝损伤不仅会导致机体免疫功能低下 ,而且更重要的是使免疫功能发生紊乱。自 Th细胞亚群及 Th1/Th2平衡提出以来 ,人们发现多种与免疫系统相关的疾病会发生 Th1/ Th2平衡飘移的现象。相反 ,机体免疫平衡遭到破坏 ,Th1或 Th2细胞某一方功能减弱 ,而另一方功能相对增强 ,也可导致疾病发生。本实验观察了药物诱导免疫性肝损伤的 Th1/ Th2平衡情况 ,并研究了小柴胡汤对Th1/ Th2平衡的调节作用。1 材料与方法1.1 试剂与器材 :小柴胡汤水煎剂含柴胡 12 g,人参、炙甘草各 6 g,黄芩、半夏、生姜各 9g,大枣 4枚。加水煎煮 2遍 ,混匀 ,加热浓缩至 1g生药 / m L。联苯双酯片 ,由北京协和药厂生产 ,批号 990 5 2 2。小鼠血清干扰素 - γ(IFN- γ)和白介素 - 4 (IL - 4 ) EL ISA试剂盒 (由京美生物工程公司生产 ) ,酶标测定仪 (Bio- Rad,美国产 )。1.2 方法1.2 .1 动物分组及模型制备 :昆明种小鼠雌雄各半 (体重18~ 2 0 g) ,随机分为 4组 ,每组 16只 (雌雄各 8只 )。 (1) 正常对照组。 (2 )肝损伤模型组 :参照文献 <1>制备方法 ,尾静脉注射卡介苗 1mg/只 ,致敏后 10天尾静脉注射 L PS 7.5μg/只 ,以诱导免疫性肝损伤。 (3)阳性对照组 :注射卡介苗后当天给联苯双酯片 5 8mg· kg- 1 · d- 1 ,其余同模型组。(4)小柴胡汤组 :注射卡介苗后当天给小柴胡汤水煎剂灌胃0 .3m L/天 ,其余同模型组。以上各组小鼠在注射 L PS16 h后处死 ,收集血清用 EL ISA法测定 IFN- γ和 IL- 4含量。1.2 .2 小鼠血清 IL- 4含量测定 :操作步骤按照试剂盒说明书进行。将各稀释浓度的标准品和待测样品分别加入预先包被抗体的 EL ISA板 ,2 0 0μl/孔。室温孵育 12 0 m in,洗板 3次。再加入辣根过氧化物酶标记的二抗 ,室温孵育 6 0min,洗板 3次。加入底物 ,室温孵育 30 min,洗板后加显色剂 ,室温避光孵育 15 min,迅速加入终止液 ,5 m in内在酶标仪下测 4 90 nm波长的吸光度 (A)值。以各稀释浓度标准品吸光度值为横坐标 ,相应标准品浓度为纵坐标分别作IL - 4标准曲线 ,利用待测样品吸光度值分别在 IL - 4标准曲线上查找相应的 IL - 4血清浓度 (pg/ m L )。1.3 统计学方法 :采用 SPSS软件进行方差分析 ,实验数据用 x± s表示。2 结果小柴胡汤对实验性肝损伤小鼠血清 Th1/ Th2型细胞因子含量及其比值的影响 :见表 1。表 1 各组小鼠血清 Th1/ Th2型细胞因子含量及其比值的比较 (x± s)组 别 n IFN-γ(pg/m L )IL -4(pg/m L )IF N-γ/IL-4正常对照组 16178.14± 16.95 3 5 .11± 6.985 .0 7肝损伤模型组 1689.2 5± 14 .961 ) 5 0 .67± 5 .0 2 1 ) 1.76阳性对照组 1612 8.5 0± 8.82 3) 43 .69± 9.0 3 2 ) 2 .94小柴胡汤组 1612 1.3 8± 13 .693) 41.5 1± 8.5 2 2 ) 2 .92注 :1)与正常对照组比较 ,P<0 .0 1;2 )与肝损伤模型组比较 ,P<0 .0 5 ,3 ) P<0 .0 1。 实验结果表明 ,BCG和 L PS诱导的免疫性肝损伤模型组 Th1型细胞因子 IFN-γ浓度显著低于正常对照组 (F =89.6 4 ,P <0 .0 1) ,Th2型细胞因子 IL - 4浓度显著高于正常对照组 (F =72 .35 ,P <0 .0 1) ,Th1/ Th2平衡向 Th2方向飘移。小柴胡汤治疗组 IFN- γ浓度较模型组升高 (P<0 .0 1) ,IL- 4浓度较模型组降低 (P <0 .0 5 ) ,Th1/ Th2平衡向 Th1方向恢复 ,飘移得到纠正。3 讨论自 Mosm ann发现小鼠不同辅助性 T细胞 (Th细胞 )克隆分泌不同的细胞因子 ,并根据所分泌细胞因子的生物学功能分为 Th1和 Th2两个亚群以来 ,Th1/ Th2免疫平衡及免疫飘移成为近年来研究的热点之一。 Th1细胞主要分泌 IFN- γ、IL- 2等 ,通过增强巨噬细胞表面表达 Fc受体促进巨噬细胞吞噬免疫复合物及抗体包被的病原体 ,Th2细胞主要产生 IL- 4、IL- 10等 ,起免疫抑制和负性免疫调节作用 <2 >。研究表明 ,许多与免疫系统有关的疾病存在 Th1/Th2平衡的飘移 ,大多数疾病向 Th2方向飘移 ,表现为免疫抑制状态 <3> 。临床和实验研究中常以 Th1和 Th2亚群细胞分泌的细胞因子多少和相对比值来判断 Th1/ Th2细胞的功能和其免疫平衡状态。本实验研究中 ,我们选取 Th1细胞分泌的最具代表性的细胞因子 IFN- γ和 Th2细胞分泌的最具代表性的细胞因子 IL- 4来研究 Th1/ Th2平衡状态。在 BCG和 L PS诱发的免疫性肝损伤模型中 ,可以检测到 Th1型细胞因子血清含量显著低于正常对照组 ,而 Th2型细胞因子 IL - 4的血清含量则显著高于正常对照组 ,表明 Th1/ Th2平衡向 Th2方向飘移 ,该模型存在明显的免疫抑制和免疫功能失调。在给予小柴胡汤治疗后 ,模型小鼠血清 Th1型细胞因子含量明显上升 ,Th2型细胞因子血清含量明显下降 ,免疫平衡向正常方向恢复。这一结果说明小柴胡汤可以通过调节机体免疫平衡对免疫性肝病起到治疗作用小柴胡汤对实验性肝损伤小鼠Th1/Th2免疫平衡的影响@王文杰$山西省儿童医院
@王济$山西省儿童医院小柴胡汤;;实验性肝损伤小鼠;;Th1/Th2免疫平衡;; 细胞因子;;实验研究目的:研究小柴胡汤对实验性肝损伤小鼠Th1/ Th2免疫平衡的影响。方法:以卡介苗(BCG)加脂多糖(L PS)诱导小鼠免疫性肝损伤,模型小鼠给小柴胡汤水煎剂灌胃,以联苯双酯片(BDD)作阳性对照药,并设空白对照。10天后处死小鼠,用酶联免疫吸附法(EL ISA)测定Th1型细胞因子干扰素γ(IFN-γ)和Th2型细胞因子白介素- 4 (IL - 4 )的血清浓度。结果:模型组Th1型细胞因子IFN-γ浓度显著低于正常对照组(P <0 .0 1) ,Th2型细胞因子IL - 4的血清浓度显著高于正常对照组(P <0 .0 1) ,Th1/ Th2平衡向Th2方向飘移;小柴胡汤治疗组IFN-γ浓度显著高于肝损伤模型组(P <0 .0 1) ,IL - 4浓度显著低于肝损伤模型组(P <0 .0 5 ) ,Th1/ Th2平衡飘移得到纠正。结论:小柴胡汤可使实验性肝损伤小鼠血清IFN-γ含量升高,IL- 4含量下降,从而使Th1/ Th2免疫平衡失调得到纠正<1> 佟丽,陈育尧,刘欢欢,等.龙胆粉针剂对实验性肝损伤的作用.第一军医大学学报,2001,21(12):906-907.
<2> MosmannTR,CoffmanRL.TH1andTH2 cells:differentpatterns of lym phokine secretion lead to different functionalproperties.AnnuRevImmune,1989(7):145-173.
<3> 姜颖.疾病的TH1/TH2模式.国外医学·免疫学分册,1999,22(6) :305-307∈蟾〔窈浪寮凉辔?以联苯双酯片(BDD)作阳性对照药,并设空白对照。10天后处死小鼠,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定Th1型细胞因子干扰素γ(IFN-γ)和Th2型细胞因子白介素- 4 (IL - 4 )的血清浓度。结果:模型组Th1型细胞因子IFN-γ浓度显著低于正常对照组(P <0 .0 1) ,Th2型细胞因子IL - 4的血清浓度显著高于正常对照组(P <0 .0 1) ,Th1/ Th2平衡向Th2方向飘移;小柴胡汤治疗组IFN-γ浓度显著高于肝损伤模型组(P <0 .0 1) ,IL - 4浓度显著低于肝损伤模型组(P <0 .0 5 ) ,Th1/ Th2平衡飘移得到纠正。结论:小柴胡汤可使实验性肝损伤小鼠血清IFN-γ含量升高,IL- 4含量下降,从而使Th1/ Th2免疫平衡失调得到纠正<1> 佟丽,陈育尧,刘欢欢,等.龙胆粉针剂对实验性肝损伤的作用.第一军医大学学报,2001,21(12):906-907. |
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