慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞穿孔素表达与干扰素抗病毒疗效的关系

2002落叶

特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)应答在慢性乙型肝炎(CHB)患者清除乙型肝炎病毒(HBV)的过程中发挥了重要的作用。CTLs对靶细胞的细胞毒作用主要是通过穿孑L素和细胞凋亡两种途径实现的， 其中穿孑L素途径起着至关重要的作用。CHB患者干扰素(IFN)治疗持久有效率仅为2O％～4O％，影响其疗效的因素较多且复杂。C H B患者外周血单个核细胞(PBMC)中穿孑L素的表达及其对IFN抗病毒疗效的影响鲜见报道，现着重研究CHB患者IFN a-2b治疗前、后PBMC中穿孑L素表达的情况，以探讨CHB患者PBMC中穿孑L素表达与IFN a一2b抗病毒疗效的关系。

结 果
1．IFN a一2b治疗前、后PBMC穿孔素的表达：穿孔素在细胞中呈棕黄色染色， 主要见于细胞质中或细胞膜上。35例CHB患者干扰素治疗前、后PBMC
中均见穿孔素的表达见图1，2。计算细胞中穿孔素表达时以阳性染色的面积百分比表示。 C HB患者治疗前、后穿孔素的水平均显著高于正常对照组，且治疗结束组PBMC穿孑L素的表达较治疗组前也明显上升，差异有统计学意义

2．PBMC穿孑L素的表达与IFN a一2b抗病毒疗效的关系：35例CHB患者经IFN a一2b 5 MU治疗6个月后，完全应答有l2例，部分应答l4例，无应答9例。
疗效判断依据中华医学会肝病学分会、感染病学分会制定的慢性乙型肝炎防治指南。IFN a一2b治疗前各组间PBMC中穿孔素表达差异有统计学意义；治疗后完全应答患者PBMC中穿孔素表达显著高于部分应答和无应答者，而部分应答与无应答患者PBMC中穿孔素表达比较，差异无统计学意义

讨 论
穿孔素是效应CTLs和自然杀伤(NK)细胞杀伤靶细胞的主要毒性蛋白之一。穿孑L素在靶细胞膜上形成的跨膜孑L道不仅可使细胞直接发生渗透性肿胀死亡，同时提供的跨膜孔道也可使颗粒酶等进入靶细胞内激活caspase级联反应，诱导靶细胞凋亡。另外，穿孑L素也是一些细胞因子发挥作用所必不可少的，例如，白细胞介素一18是通过依赖穿孑L素途径增加肝脏NK、NK—T细胞和T细胞对敏感靶细胞的细胞毒作用。Kagi等研究表明，采用小鼠胚胎干细胞同源性基因重组技术获得了穿孔素基因缺失小鼠，虽然其CTLs和NK细胞数目正常，但在体外不能溶解杀伤淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(1ymphocytic choriomeningitisvirus，LCMV)感染的靶细胞，在体内不能有效清除LCMV，说明穿孑L素在非溶细胞病毒LCMV感染的抗病毒免疫中起着关键作用。
慢性乙型或丙型肝炎患者体内的病毒不能得到有效清除与机体免疫力低下有关。由于穿孑L素在CTLs抗病毒免疫中有着重要作用，因而，缺乏穿孑L素或穿孑L素产量不足会使机体免疫力明显下降，清除病毒的能力降低。Kaser等和Sobao等在慢性丙型肝炎的研究中发现，CTLs~达的穿孑L素是介导肝细胞损害的主要效应分子，干扰素可以上调穿孑L素在PBMC或CD8T淋巴细胞中(主要是CTLS)中的表达，穿孔素的表达与干扰素的疗效有关，治疗后持续有效的患者在治疗前其穿孑L素基因的表达水平显著高于治疗后无效的患者。本研究中CHB患者干扰素治疗结束后PBMC中穿孔素的表达较治疗前也明显上升，差异有统计学意义；同时，干扰素治疗前各组问PBMC中穿孑L素表达的差异均有统计学意义；治疗后完全应答组PBMC中穿孑L素表达显著高于部分应答组和无应答组， 提示C H B患者PBM C中穿孑L素的表达水平与干扰素抗HBV的疗效有关。因此，通过研究CHB患者PBMC中穿孑L素的表达，有助于进一步认识影响干扰素疗效的因素，为临床选择合适的患者及评判抗病毒疗效提供进一步的指导。研究结果提示，在临床上选择PBMC中穿孑L素表达较高的C H B患者进行干扰素抗病毒治疗，疗效可能更为满意。