血清抗-HBs阳性慢性肝病患者的病因研究

天狼星

世界华人消化杂志 1998年第1期第6卷 研究原著

作者：陈耀凯1 吴修斌2 张振英3

单位：1解放军155医院传染科 河南省开封市 475003;2西安医科大学第二附属医院 3河南省开封市传染病医院

Study on causes of serum anti-HBs positive patients with chronic liver diseases

　　chen YK, Wu XB, Zhang ZY

　　Study on causes of serum anti-HBs positive patients with chronic liver diseases

　　cHEN Yao-Kai1, WU Xiu-Bin2 and ZHANG Zhen-Ying31Department of Infectious Diseases, Chinese PLA 155 Hospital,

　　kaifeng 475003, Henan Province, China2The Second Affiliated Hospital of Xi′an Medical University, Xi′an

　　710004, Shaanxi Province, China3Kaifeng Municipal Infectious Diseases Hospital, Kaifeng 475001, Henan province, China

　　Subject headings hepatitis, viral, human/etiology; hepatitis B surface

　　antigens/analysis; hepatitis B virus/genetics; hepatitis C-like viruses/genetics;

　　dNA, viral/analysis

　　Abstract

　　AIM To investigate the causes of chronic liver diseases with positive serum anti-HBs.

　　METHODS HBV DNA and HCV RNA were detected in the sera from

　　anti-HBs positive patients with chronic liver diseases using nested polymerase

　　chain reaction. Thirty-two patients (25 male, 7 female) with average age of

　　41.7 years (21 to 63 years) were studied, including 18 chronic hepatitis and

　　14 cirrhosis. Nine cases of chronic hepatitis and 5 cases of cirrhosis were

　　diagnosed by liver biopsy and the others based on the clinical diagnostic criteria.

　　rESULTS The positive rates of HBV DNA and HCV RNA were 62.5%(20/32) and 28.1%(9/32) respectively, with a total detectable rate of 81.3%(26/32).

　　cONCLUSION Serum anti-HBs positive patients with chronic liver diseases

　　are mostly related to HBV and/or HCV infection.

　　主题词 肝炎，病毒性，人/病因学；肝炎表面抗原，乙型/分析；肝炎病毒，乙型/遗传学；C型肝炎样病毒属/遗传学；DNA，病毒/分析

　　中国图书资料分类号 R 512.6

　　摘 要目的 部分抗－HBs阳性者仍有活动性肝病存在，其病因还不十分清楚.本研究旨在探讨血清抗-HBs阳性慢性肝病患者的病因.

　　方法 应用套式聚合酶链反应检测血清抗-HBs阳性慢性肝病患者血清中HBV dNA和HCV RNA. 患者32例，男25例，女7例，平均年龄41.7岁(21岁～63岁)，其中慢性 肝炎18例，肝硬变14例. 9例慢性肝炎和5例肝硬变经肝活检证实，其余为临床诊断.

　　结果 血清中HBV DNA和HCV RNA的检出率分别为62.5%(20/32)和28.1%(9/32)；

　　hBV DNA和(或)HCV RNA总检出率为81.3%(26/32).

　　结论 血清抗-HBs阳性慢性肝病患者的病因多数与HBV和(或)HCV感染有关.

　　0 引言

　　一般认为，血清抗-HBs的出现和存在是乙型肝炎病毒(HBV)清除的标志.然而近年来发现部分抗-HBs阳性者仍有活动性肝病存在［1-3］.虽然已有文献报道此类患者的病因可能与HBV感染有关，但HBV DNA检出率相差甚大，表明抗-HBs阳性慢性肝病患者的病因仍不十分清楚.为此，我们应用套式聚合酶链反应(PCR)

　　技术检测了32例血清抗-HBs阳性慢性肝病患者血清中HBV DNA和HCV RNA。

　　1 对象和方法

　　1.1 对象 慢性肝病患者32例，男25例，女7例，平均年龄41.7岁(21岁～63岁)，其中慢性肝炎18例，肝硬变14例. 所有病例均排除乙肝疫苗接种史，9例单项抗-HBs阳性，13例抗-HBs和抗-HBc阳性，4例抗-HBs和抗-HBe阳性，6例抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc均阳性. 诊断符合1995年北京全国传染病与寄生虫病学术会议修订的诊断标准。9例慢性肝炎和5例肝硬变经肝活检证实，其余为临床诊断。

　　1.2 方法 采用多重套式PCR技术检测HBV DNA和HCV RNA(PCR试剂由第二军医大学提供). HBV引物位于中国HBV株高度同源性的S基因区，扩增产物为523bp；HCV引物位于HCV RNA5′端非编码区，扩增产物为260bp. 操作步骤：①血清50μl用SDS-蛋白酶K-饱和酚法提取HBV DNA和HCV RNA作为模板；②血清提取物，HBV外套引物各0.2 μmol/L，HCV外套引物0.5 μmol/L，10倍反应缓冲液3 μl，Mg++

　　2.5 mmol/L，dNTP各0.2 mmol/L，逆转录酶2.4 U，RNasin 8 U,Taq聚合酶0.75 U，反应总体积30 μl；③取第一次扩增产物为模板，加HBV和HCV内套引物各0.5 mmol/L，除逆转录外其余步骤同②，反应总体积30 μl；④第二次扩增产物电泳后溴化乙锭染色，紫外灯下观察结果.每次实验均设阳性和阴性对照，并随机抽 取部分标本作重复实验。

　　

　　2 结果

　　HBV DNA和HCV RNA的检出率分别为62.5%(20/32)和28.1%(9/32)，其中

　　9.4%(3/32)同时检出HBV DNA和HCV RNA；HBV DNA和(或)HCV RNA总检出率为

　　81.3%(26/32)。

　　

　　3 讨论

　　套式PCR是一种新型的PCR反应，它采用内外引物分别对测定标本中的模板DNA进行扩增，不仅增强了PCR反应的特异性，而且可使检测敏感度稳定地提高1000倍，可以检出反应体系中2分子HBV DNA(1pg≈3×105分子)，而单次PCR检测呈阳性的反应体系约需要近103分子以上HBV DNA［1］.作者所用多重套式PCR技术可以同时扩增HBV DNA和HCV RNA，较一般套式PCR技术更为方便实用. 本组32例抗-HBs阳性慢性肝病患者中，62.5%(20/32)可以检出HBV DNA，HBV DNA和(或)HCV RNA总检出率为81.3%(26/32). 表明此类患者的病因多数仍与病毒感染有关，且以HBV感染为主。

　　一般认为，血清中检出HBV DNA即表示HBV在体内存在并复制. 部分HBV感染者出现抗-HBs后体内仍能检出HBV DNA并与肝病活动有关，可能有三种解释：一是HBV变异株感染或HBV基因突变［1，3］，在此情况下病毒可以逃避宿主体内抗-HBs的免疫清除作用；二是HBV与抗-HBs形成免疫复合物而存在［4］；三是抗-HBs效价低，因为抗-HBs的保护作用与效价呈平行关系，抗-HBs滴度≥10 IU/L时才具有保护作用［5］。

　　HCV RNA是HCV复制及复制程度的重要标志，而HCV复制与肝病活动密切相关。本组HCV RNA的检出率为28.1%(9/32)，其中9.4%(3/32)同时检出HBV DNA和HCV RNA，表明HCV单独或重叠感染也是导致抗-HBs阳性肝病患者病情活动的重要原因之一.

　　

　　陈耀凯，男，1966-12-27生，河南省固始县人，汉族. 1994年西安医科大学毕业，医学硕士，主治医师，主要从事传染病防治研究，已发表论文26篇.