检测乙肝病毒前S抗原、前S抗体有何临床意义？

flyingherowp

好像我每次检查都只查了s抗原，没查抗体。

lilylcy

我也是前s1阳性，但DNA阴性，我也查了很多资料，但一直没明白怎么回事，请专家指教，是不是变异了？

猫吃鱼

我也是前S1抗原阳性，DNA阴性。
06年之前就是阴性，后面一直是阳性。
之前03年低的时候在吃拉米2年时DNA升高，转氨酶升高，怀疑发生变异。但也不至于在06年才显出来吧

Serdyna

学习了！

masaic117

谢谢，长知识了。

过去无知

我也是前s1阳性，但DNA阴性
但我看了些资料，只是说前s1阳性，但DNA阳性高度相关，但也有百分之三十的人不相关呢。
估计我们就是那百分之三十不相关的

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乙肝反式激活蛋白-大蛋白（LHBs）研究进展
                    
     乙型肝炎病毒外膜大分子表面抗原蛋白（HBV Large Surface Protein，LHBs），简称乙肝大蛋白，是乙肝病毒包膜蛋白中的重要组成，具有双重拓扑结构，具有反式激活增强病毒复制、上调cccDNA拷贝数等作用；而且有研究表明乙型肝炎病毒大蛋白能够直接使肝细胞发生毒害性和致癌性，是导致纤维淤胆性肝炎的原因之一；新近的研究表明表明乙型肝炎病毒大蛋白和HBV DNA的拷贝数呈现一定的正相关性。乙型肝炎病毒大蛋白是目前国际上乙肝研究的新热点，多种疫苗和治疗性单抗药物也针对乙型肝炎病毒大蛋白进行设计。本研究将就乙型肝炎病毒大蛋白的结构、在病毒复制中的反式激活作用和血清学检测的意义进行概要介绍。
一 乙型肝炎病毒大蛋白（LHBs）的组成和结构
HBV基因组秉承节俭高效的原则，充分利用其3.2Kb的基因组编码携带尽可能多的信息并行使更多的功能。在一个开放读码框中利用不同的起始密码子编码多个不同的蛋白，如乙肝病毒三种外膜蛋白，都是从单一的开放读码框，依靠三个启动子进行表达，表达产物分别为大蛋白（LHBs，包括PreS1、PreS2和S）、中蛋白(MHBs，包括PreS2和S)、小蛋白(SHBs，包括S) [1]。
感染了HBV病毒的细胞可分泌三种病毒颗粒：①小球形颗粒（直径22 nm），其包膜蛋白由MHBs和SHBs组成；②管状颗粒（直径22 nm、长度100-1000 nm），管状颗粒是包含宿主细胞来源的脂质和病毒衣壳蛋白，但不具有病毒核衣壳蛋白和核酸的亚病毒颗粒（subviral particles ，SVPs），其包膜蛋白由LHBs、MHBs和SHBs三种包膜蛋白组成；③Dane颗粒，即完整病毒颗粒，其外膜结构蛋白组成与管状颗粒一致，与管状颗粒的区别在于，Dane颗粒含有HBV DNA。
由于完整病毒颗粒外膜的组成依赖于LHBs和MHBs、SHBs的共表达，而后两者在缺失LHBs的情况下，只能形成小球型颗粒。因此LHBs在表达上，实际上起病毒外膜组装能力的调节作用。当LHBs表达达到一定的阈值，病毒粒子将以有包膜的病毒粒子（包括管状颗粒和Dane颗粒）形式被释放，亚病毒颗粒的形成和分泌可作为HBV包膜蛋白正确折叠和参与病毒粒子形成的指标。
     乙型肝炎病毒大蛋白（LHBs）在2位的甘氨酸处被豆蔻酸化。其前S 区AA99-169（横跨部分前S1和前S2）形成一个环状Loop区，具有众多的免疫表位[2]，其中Arg 1031.
和Ser 124之间（或92-113位氨基酸，与病毒基因型有关）的pre-S序列对于HBV的形成具有重要功能，这个区域也横跨了前S1和前S2的衔接区。因此前S区更应该作为一个整体来做研究。但是乙型肝炎病毒大蛋白（LHBs）N端含有细胞内滞留信号肽，具有细胞内滞留性，在体外难以基因重组表达，同时极容易降解，因此以往将LHBs前S区作为一个整体来进行功能研究相对较少。近年来，通过蛋白修饰等技术，已经可以完整表达LHBs前S抗原或者完整LHBs蛋白[3]。

   乙型肝炎病毒大蛋白（LHBs）是第一个被发现的具有双重跨膜拓扑结构的病毒蛋白，通过两种拓扑学构象，单一的蛋白可执行多种的功能 [4]，该特殊拓扑结构在病毒的复制过程中也起关键性作用[4]。乙型肝炎病毒大蛋白（LHBs）N端胞质pre-S结构域可在翻译后跨过细胞膜或病毒包膜而位于内质网腔内(i-pre-S)或病毒粒子的外表面（e-pre-S）。于是，在病毒包膜中含有LHBs的两种拓扑结构体，它们分别含有i-pre-S或e-pre-S,。这两个构象有着独特的作用：e-pre-S结构域暴露在病毒粒子的表面并参与病毒受体的结合；同时，i- preS在里面则和病毒核壳结合，另外，i-preS还可以激活多种启动子元件。
   大蛋白preS的拓扑构象结构决定了其在病毒复制中的作用和反式激活作用。这些功能都不是单独preS1可以完成的。
二 乙型肝炎病毒大蛋白（LHBs）的反式激活作用
    反式激活是指一个基因编码的蛋白质激活另一“遗传微粒”即脱氧核糖核酸上的调节序列，反式激动与肿瘤发生密切相关。
乙肝病毒感染可引起急性肝炎，也是引发肝细胞癌(HCC)的主要致病因素。鉴于此， 很多研究集中于发现其潜在的病毒癌基因产物。目前确认HBV至少可编码二个转录激活因子，HBx蛋白和LHBs蛋白[5,6]都可诱导c-Raf-1/MEK激酶级联通路的激活，其中HBx蛋白是通过不依赖于PKC和依赖Ras的机制介导的，而LHBs的激活为PKC依赖性，不需要Ras的参与。在转染的HepG2细胞中选择性破坏LHBs-或HBx-的特异性激活，并未导致病毒的生成显著性减少。应用反式主要负调节物c-Raf-1-或MEK-特异性抑制剂，阻断二种激活因子共有的信号步骤，可同时抑制LHBs-和HBx-依赖性激活，导致HBV基因的表达的终止。在病毒生活周期中激活蛋白因子功能有重要性，鉴于激活c-Raf-1 /MEK信号级联的LHBs和HBx 可互相取代[7]。c-Raf-1 /MEK信号级联的完整性对于病毒的复制是必须的。因此有研究提出可以尝试是否抑制c-Raf-1 /MEK 可以作为未来抗病毒的靶点。
LHBs反式激活作用与病毒复制具有密切的关系，以鸭乙型肝炎为模型，研究发现亚病毒颗粒能显著增强细胞内的病毒复制和基因表达[7]。该效应对感染滴度、病毒粒子与亚病毒颗粒的比例以及亚病毒颗粒加入的时间具有依赖性，更重要的是亚病毒颗粒的pre-S蛋白能触发该增强效应，数据表明这种增强作用由pre-S蛋白的反式激活功能所活化的信号转导所引发。它们显示含HBV的血清感染性不仅仅依赖于感染性病毒粒子的数量，还与不含核酸的粒子的数目息息相关，特别是与LHBs上的pre-S相关。这个研究具有重要的临床意义，对于临床治疗后期患者血液中HBV DNA阴性（或低载量）但是LHBs残留的预后具有指导意义。国内成军、张伟等其他研究者也证实了HBV前S区不同片段所表达的蛋白拥有自激活功能[8、9]。这些研究有助于我们对乙型肝炎病毒感染过程中相对病毒粒子数量大量过量的亚病毒颗粒的生物学功能的了解。

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三 乙型肝炎病毒大蛋白（LHBs）对肝细胞直接毒性和致癌性
毛玻璃样肝细胞，是人类慢性乙型肝炎的特征性改变，早在90年代，Chisari和Fernandes等已经证实，在转基因小鼠中过量表达乙型肝炎病毒大蛋白（LHBs）会使导致转基因老鼠中毛玻璃样肝细胞（ground glass hepatocytes）的产生，并且发展为细胞的损伤作用，它会诱导肝的再生，在这个模型中最终导致肝癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）[10]，目前认为HCC的发展是由体内LHBs连续的过表达造成的持续煽动过程所引发。因为LHBs的过表达导致一些控制细胞增殖的激酶的活化(PKC, c-Raf-1 kinase)，这些酶的连续活化可能与肝癌的发生具一定的相关性。在其中，感染的细胞不能或来不及通过细胞分泌途径来外运管状颗粒，直接导致细胞的病变效应,表现为细胞内大量LHBs的存在，在转基因老鼠模型上还能看到肝细胞癌的产生。  
对于乙型肝炎病毒大蛋白（LHBs）对肝细胞直接毒性作用，国际上近年也有新发现:  
乙肝肝损伤通常认为是由免疫反应所介导的.，而非通过病毒或病毒成分本身所致。新的研究却发现LHBs对于肝细胞具有直接毒性，是导致肝细胞损伤的主要原因。该研究以急性肝病纤维淤胆性肝炎(FCH)肝细胞损伤为模型，它发生于严重的免疫抑制病人中，FCH状态下的肝脏的主要特征是肝细胞产生广泛性的液泡化和细胞凋亡，gee-Chih Foo等的研究发现LHBs是形成FCH的直接原因[11]，LHBs致使肝细胞凋亡而快速死亡，这些细胞在死亡前的胞质中有明显的液泡化。国内林旭等的研究也显示：LHBs蛋白同样可导致HepG2细胞(肝胚细胞瘤细胞)及Chang肝细胞(永生化肝细胞)空泡化及凋亡，对肝细胞致病性具有普遍性[12]。
总之，乙型肝炎病毒大蛋白（LHBs）存在于感染性颗粒（Dane颗粒）和亚病毒管状颗粒上，是病毒形成完整外膜的重要标志，与病毒复制密切相关，对HBV复制过程具有反式激活作用，并与病毒颗粒从细胞内释放调节有关。过量LHBs在肝细胞内质网积聚是导致内质网应激的关键因素，并导致肝细胞毒性甚至致癌。
四 乙型肝炎病毒大蛋白（LHBs）临床检测意义
被损伤肝细胞释放的乙型肝炎病毒大蛋白（LHBs）和病毒颗粒上所包含的LHBs在血液中，可以被特异的抗体所捕捉，使得血清检测成为可能。以往的检测是通过检测LHBs的独有片断Pre-S1蛋白来实现的，但是编码pre-S蛋白的Pre-S区具有较为复杂的拓扑结构，导致Pre-S1抗原的检出率较低，不能很好的反映HBV的复制情况。而采用针对其复杂构象结构的单抗检测，发现与DNA的符合率、平行关系更为明显[13]。不仅如此，单独检测前S1完全掩盖了大蛋白的意义，而对肝细胞产生毒性的是大蛋白，具有反式激活作用的也是其前S区，因此检测整体性大蛋白将使临床意义更为清楚。
临床检测LHBs，对于临床判定e抗原阴性中病毒复制情况有应用价值。目前临床上习惯以HBeAg来判断乙肝病毒复制及传染性强弱。但是当HBV发生前C与C区变异后，会出现HBeAg阴性，而病毒仍复制的情况，造成临床难以确定停药时机及治疗结束后应答持续时间短等情况的出现。魏红山的研究认为检测LHBs对于检测e抗原阴性肝炎具有重要意义[14]，该研究表明LHBs可以用于HBeAg阴性乙肝患者的病毒复制程度的判定，血清中LHBs含量与HBV DNA拷贝数变化一致，具有良好的相关关系（r=0.947）。
目前在抗病毒治疗慢性乙型肝炎过程中，血清HBV DNA拷贝数的下降是目前评估其疗效的主要指标，但血液中DNA拷贝数下降和转阴并不能作为乙肝治疗疗效判定和停药的指标。由于LHBs与病毒复制密切相关，并且具有反式激活病毒复制作用，所以在乙肝抗病毒治疗过程中的作用和以其作为疗效指标进行观测受到国内外的重视。
通过对117例拉米夫定用药治疗患者的回顾性研究，结果显示在拉米夫定治疗用药4至24个月的患者中LHBs与拉米夫定治疗应答一致[15]，在治疗效果明显的患者中，血清中大蛋白阴转比DNA消退晚大约5个月。鸭乙肝病毒模型发现亚病毒颗粒在HBV感染过程中，能显著增强细胞内的病毒复制和基因表达，而这种增强作用是由LHBs上的前S蛋白的反式激活作用所触发。因此抗病毒治疗后病毒DNA下降而大蛋白的残留对HBV的感染和预后有重要观察价值。
此外由于LHBs的直接细胞毒性的发现，使得研究人员联想到乙肝治疗的另外一个途径应该是抑制病毒蛋白合成，而不单单是抗病毒核苷的形成。原因为在血液低载量DNA的乙肝慢性感染中，LHBs还是有可能大量产生，并组装管状亚病毒颗粒，它的量超过所需的一万倍，而管状颗粒在细胞内的积累，导致细胞毛玻璃样，对细胞产生直接毒性作用。
因此在监测病毒复制、观察治疗效果上单独采用HBV DNA指标是不能够满足临床需要的，应该增加临床对能够反式激活病毒复制功能和直接对肝细胞产生毒性作用的乙型肝炎病毒大蛋白的检测。

「十把火」

学习了...

过去无知

下面是骆抗先老专家在博客上恢复别人的提问


我的问题是：
    DNA看起来是阴性（阴性是我自己认为的，因为我们这里检测灵敏度最高就是1.00E+03），病毒复制力应该很低，但前S1抗原又是阳性，是否又说明病毒复制活跃？
   我在网上查了N久，都说DNA检测应该与前S1抗原检测结果一致，现在两者出现了不一致，我以谁为准？我看网上说有百分之三十的人这两者不符，那不符难道是因为病毒变异造成的？


骆抗先的回复： 2009-08-18 19:58:07

前S1抗原不是临床常规检查，对临床工作意义很有限。我看过一些最近国外回来的验单，都没有这一项，医院为增加收入做的项目有些并不需要。