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9楼
发表于 2003-10-23 13:44
[B]（七）心急火撩在复旦悦达上的你问我答。[/B]
有些问题我真的很想知道为什么，下面是与专业研究病毒的人士的问与答。（2003.7.15-20038.16）
这个问题我老早在HBVHBV问过，可没人回答。
问：壹：3.2kb的HBVDNA能转录2种3.5kb的mRNA，不知道怎样理解？3.2kb的HBVDNA转录至少4种mRNA，3.5kb的mRNA(有2种),2.4kb的mRNA，2.1kb的mRNA，0.7kb的mRNA；为什么从3200长的DNA可以转录成3500个碱基的mRNA？少的我能理解，而多了300是从哪里来的？
贰：HBVDNA为双链环状，一长一短的正负链组成。不知道是什么样子的？象一条腿长一条腿短的梯子吗？叁：有一说法，除了腺病毒原核生物的基因几乎是连续的（也就是没有内含子），不知道HBV是怎样的，有内含子吗？若没有，那为什么有mRNA后的转录剪接加工呢？肆：S、C、P、X各区在基因组中的具体位置（碱基对序列）是什么？可以举例如HBV C或B型？
伍：5"到3"是从哪端数的，比如是缺腿的梯子状，是从缺腿的长端（负链）还是短端（正链）数，是从齐头向负链还是向正链数?
陆：就是在从碱基对到蛋白质的翻译时的六框翻译，由于不知道起始点，所以相邻3个一个一个试，3个正向试我明白，为什么要试3个反向的？柒：对于表达序列标签和互补DNA之间的关系，有的方法采用的引物可能使一个克隆产生两钟读法，一个从5‘端开始，另一个从3’端起始。（以上摘自简明生物信息学）。我不明白，好像别的书上讲的碱基对序列的读法都是从5‘到3’的。我觉得HBV3200个碱基对不是很多，我还不知道有没有比它更小的东西了？所以，应该是能被治好的吧，您作为专门研究这个的，请问您也这样认为吗？
答：针对你回答的7个问题，回答如下： 1、因为HBV的基因组是双股环状的DNA，因此转录合成mRNA时不会正好到一周时就终止，还会继续往前合成一段，因而形成大于3.2kb的mRNA。 2、见图 3、HBV没有内含子，因为它的ORF翻译产物有好几种，因此形成mRNA也有好几个，这些RNA的大小长短也不一样，所以会要进行转录剪接加工。 4、见图 5、见图 6、如果知道其ORF框架，从第一个ATG开始进行翻译即可。 7、还有比HBV更小的病毒，如丁肝病毒、小RNA病毒等。由于HBV病毒比较“聪明”，能够发生突变，逃避宿主的免疫反应，且具有嗜肝性，长期潜伏在肝细胞中，也可能会发生整合，所以在治疗方面有一定的难度。
(一）关于普通的疫苗
问：
我对IC治疗的原理知道一些，不过还有一些问题。现代免疫学认为免疫细胞的TH1/TH2应答能反映机体对病源体清除的能力。这一点可查体内的IL-2、IL12、IL18、IFN－嘎嘛、TNF杯他的含量；或IL4、5、6、10、13等2型细胞因子的含量可以得到。这一点还可以在接种疫苗后查IgG亚类的比例得到，IgG1反映TH2应答,IgG2a反映TH1应答。我的问题1，对于普通预防HBV的普通疫苗接种后，根据体内产生的抗体种类反映的是什么应答？2.如果普通疫苗产生的免疫应答是属于TH2类的，那么必会产生一些TH2类细胞因子。而TH2细胞因子则抑制CTL的细胞毒作用，并促进TH0向TH2分化，而过度的TH2细胞反应对病毒的控制不利（参见朱迅编的“免疫新进展”中吴玉章的‘CTL作用于的免疫生化进展’）。如果是这样的话普通的疫苗对HBV患者不但没有作用，反而还有不利作用。请问是否是这样的？我这样问是有亲身经验的，有一防疫站所谓专家正进行所谓治疗性疫苗的疗法，说有50%的机会，我偷看了疫苗厂家名称---深圳泰康，那意味着是普通的预防疫苗他只不过是加量了。这样的尝试在很多正规医院也正如火如荼的进行着。如果没用还有害那么为什么没人管。国家的责任呢？
答：1、对于普通预防HBV的普通疫苗接种后，不反应TH1,TH2应答。 2、同时会产生TH1，TH2的细胞反应。
二）HBV历史和研究模型？
问：1。为什么B型肝炎病毒只能感染人、黑猩猩、鸭子、鼠？据说除了人外他们只感染，但并不发病，就象HIV是这样的吗，为什么？2。鸭病毒和人能互相感染吗，据说我国的鸭感染率高，是这样的吗，吃没熟透的鸭血有事吗？3。能推断HBV这个病毒在地球上生存了多久吗（听说HIV只有几十年的历史）？4。研究HBV所用的模型是否有新进展？HBV是不是还是很不好培养，真是可笑你们费劲养都不容易养，我们想甩却都甩不掉？
答：
1、病毒是具有宿主特异性的，所以HBV也不例外。2、目前为止，鸭病毒不会感染人，请放心吃未熟的鸭血不会有事。3、1963年，Blumberg在澳洲土著人血清中发现澳大利亚抗原，但至于在地球上生存了多久我们无法考证。4、HBV还是容易培养的。 希望你有朝一日也能摆脱HBV.
(三）HBV的各个时期的生命形态？肝细胞生命周期？
问：
1。HBV各个生命形态？为什么有rcDNA（双链松弛环状DNA）、ssDNA(单链DNA）、cccDNA（共价闭合环状DNA）之分？哪种状态生存在什么样的细胞器，或是血液中？什么是cccDNA扩增池，音译过来的吗？以下的说法正确吗：cccDNA不与蛋白共价结合。3.2kb的病毒DNA在持续感染的细胞浆合成。核内cccDNA扩增池不需要多轮感染。细胞分裂抑制剂不能阻止起始的病毒基因组转变成cccDNA，但能可逆的阻断随后的cccDNA扩增。 2。 HBV是嗜肝的，它能被消灭与否与肝细胞相持状况密不可分。能否介绍关于肝细胞的情况。比如与别的细胞相比，其生命周期有何不同？HBV病毒能活多少天？一个肝细胞大概能生存多少天？G1、S、G2、M细胞周期有什么特点？它是普通的分裂而来的吗？为什么肝脏有再生功能？
答：
1、在科研研究中通过电泳迁移率不同发现了这三种状态，这三种状态可以存在于细胞核和胞浆中。通俗地理解，从细胞中提取出含有cccDNA的细胞成份统称为pool，大概就是你所说的扩增池。2、cccDNA可以与宿主的蛋白结合。3.2kb的病毒DNA除了在细胞核中复制外，也存在于胞浆复制时相。不同的细胞分裂抑制剂作用于不同的细胞周期，因此影响HBV cccDNA的作用环节也不一样。3、笼统地说，肝脏细胞代谢非常旺盛，这也是G1,S,G2,M细胞的主要特点之一。HBV存活能力比较强，对外界环境抵抗力较高，对低温、干燥、紫外线均有耐受性，不被70％乙醇灭活，一般高压灭菌法或100度加热10分钟和环氧乙烷等均可灭活HBV。另外有些问题建议你查阅一些细胞生物学的书。
问：
HBV生存能力强我明白，我问的是在自然状态下（比如在肝细胞内生存对它算是自然状态吧），它的寿命有多长？另外是不是它会按照某种我们还不明的一种机制，根据cccDNA的浓度来调节其自身的复制速度，以此来试图与肝细胞和平共处，并维系其种族的生存。
答：1、如果是慢性感染，HBV进入肝细胞后，在自然状态下会长期存在于宿主细胞内，很难清除。2、 是
（三）HBV的复制速度？关于HBV的网格计算？（注：这应该是第四了）
问：1。真核细胞的DNA复制模式与速度是怎样的？是否高等的复杂的是核甘酸从中间向两端，并且是多点的。而低等的如一些病毒，是由一端到另一端？人的复制速度最慢，是100bp/s？那HBV的复制速度是多少呢？2。抗病毒的药物是怎样筛选的怎么样又保证抗病毒又保证对人体无害，能就从计算机的利用方面讲讲吗？我听说美国有一个利用网格计算的项目，吸引了约200万台计算机，从今年2月到7月5个月的时间分选了3500多万种药，是用来分析抗天花病毒的。说是以上工作若用1台电脑需工作7000年，都是分析抗病毒，能讲一下机理吗？你们的工作包括分析抗病毒药吗？世界有类似的分析HBV的项目吗？（还WWW.HBVHBV.COM介绍的Ｄ２ＯＬ项目有近5.5万台计算机参与。）
答： 1、真核细胞DNA复制模式这个问题比较复杂，建议你查阅一下生物化学或基因遗传传方面的书。 2、是 3、现在有很多软件可以分析病毒抗原表位，根据这些表位设计抗病毒药物，通常一次分析可以得到上百种抗病毒药物，然后再从中根据药物的化学鍵和空间结构，离子电荷等方面进行筛选。对于具有可行性的药物再通过动物实验进一步筛选。我们的工作暂时不包括分析抗病毒药（指计算机分析）。
（四）HBV的全部蛋白？理想的免疫耐受未来进化的猜想？
问：1。HBV的S、C、P蛋白现有所知晓。那么有X蛋白吗？它的功能是什么，对HBV来说是否必要？即有无变异的不产生X蛋白？所谓基因的数量就是指能产生相对应的蛋白的数量吗？比如HBV分4种蛋白，那HBV就有4个基因？是否还有未知的HBV蛋白未被发现？2。如果知道HBV的哪些部分是作为其生存基本必不可少的，因为HBV比较小，是否就可以用计算机模拟出其可能出现的排列组合，即变异的组合？3。据说垂直传播是造成免疫耐受的主要原因？么是否存在理想状况的免疫耐受？即一生都不犯病，就象鸭子一样？如果有，那HBV是否就能毫无节制的复制？这种复制会对宿主有什么影响（在不导致其犯病下如果HBV最终不能被消灭，它是否会进化为与人共生的关系，既无益也无害，并最终成为人的一部分？另一个无关的话题：人吃的饭，即是异物那它是如何进入人体后又逃过人的免疫攻击呢？有这样的免疫理论吗？
答：1、有，且对HBV非常重要，在病毒的基因复制，诱导细胞凋亡，逃避宿主免疫反应均有重要作用。基因的数量并不能指相对应的蛋白数量。我们目前还不能确定是否有未知蛋白。 2、垂直耐受是造成免疫耐受的主要原因。HBV的致病能力和人本的免疫能力达到一个平衡之后，人体成为一个携带者，可能就是你所指的“最终成为人的一部分”。人吃的饭是淀粉类化合物，并非抗原，进入消化道后，消化成多糖或单糖，被胃或肠粘膜吸收，因而不存在这种“免疫理论”。其它一些问题请查阅微生物方面的书籍。
(五）什么是T细胞表面分化抗原，如E受体？
问：这个E受体在抗病毒中的作用是什么？
答：CD2抗原抗原：CD2抗原又称白细胞功能抗原2（LFA-2）或E 受体，即羊细胞受体。同时也是白细胞功能抗原-3的受体。CD2是单链分子，相对分子质量5.0*10的4次方，分布在大多数（70％）胸腺细胞以及成熟的人T细胞（90％）的表面。这种表面辅助分子除了细胞粘附作用外，还有信号传递功能。CD2与配体LFH-3结合能增强细胞粘附作用。因为羊红细胞表面有LFA-3(CD58)，所以T细胞与羊红细胞结合形成E花结也是通过CD2与配体LFA-3相结合而实现的。因为E花结是在T细胞周围吸附了许多羊红细胞很易观察，所以是一种T细胞特异的检测方法以及从血液中分离纯化T细胞的方法。
（六）野生株？变异株？一定能治好。
问：1。如果被变异的病毒（比如说不能分泌E抗原的那种）感染的正常人，若发病是表现为大三阳还是也是变异的小三阳？ 2。一定能治好。因为有自现性的急性患者的康复，尽管比率小。另外还有慢性，经过长年之后自愈的尽管比率更小。我认为只要全面分析这两种情况，找出差异就能找到解决办法。由于无大面积的全面的检测与监控，无从得到有效的数据，所以费时费力又费钱。你说对吗？另外以上两种情况到底占多大的比例？（假如按通常的所说的中国10%的的感染情况）
答：
1、如果被变异的病毒感染的正常人表现为大三阳。2、由于在中国绝大多数的乙肝患者为母婴传播的，所以后者的比例很大。
问：真的吗？很奇怪啊。是因为1。多种病毒株共存才出现这种情况的吗？环境的选择，造成了不同优势株的选择吗？不过已感染者和被感染者有什么样的环境区别？（免疫压力）2。环境对病毒来说好比是时空穿梭机，如果说变异的代表15岁，还是环境把病毒又带回了从前，即刚出生（能分泌E抗原）吗？
答：1、病毒的变异和它自身的因素以及机体对它的免疫压力都有关。不同患者或携带者针对HBV的免疫状态都有所不同。急性感染者的免疫系统能够清除病毒，慢性感染者（持续性感染）及携带者则是免疫系统对该病毒产生免疫耐受。2、变异有两种情况，一种是出现新的变异组，另一种可能会回复到早先的毒株，后者的概率要低得多。
（七）幼龄易感病毒的年龄？病毒蛋白是否带有宿主的信息？
问：
1。有人提出幼龄(非母婴的）易感染病毒，造成对HBsAg的免疫耐受状态。请问这一年龄能否确定？（大致的，比如说人在什么年龄免疫系统基本成熟？）因为我不是垂直传播的，想确定一下是什么时间被感染的。 2。病毒蛋白石由病毒编码的，但是它也是在宿主比（如是人）的细胞器中被产生的，所用的物质也都是来自宿主。那么，这些蛋白是否带有宿主的信息，哪怕是一顶点？
答： 1.人的免疫系统是在青春期左右基本成熟，但由于感染途径很多，所以我们也无法确定你是如何被感染的。2、这些病毒蛋白不带有宿主的信息，宿主只是提供一些酶或因子帮助病毒的复制及蛋白翻译。
（八）基因种类，是否有很大的作用？现有已知的病毒蛋白的三维结构是否都已经很清楚了？
问： 1。人们根据HBV病毒株的有些核苷酸序列部位很近似，而分出其基因种类。另外还做比较，如拿中国株和瑞典株比较，说是有什么渊源。而这种分析是否真的有价值，因为它们不停的在变。如果很有价值，为什么不进行推广，除了有PCR外，现在的检测手段跟十几年前相比只是精度高了些，怪不得进展缓慢。是因为成本吗？在这方面国家为什么不能投入更多些，比如说免费检测。如果再建立起很有效的网络话，应该很快就有突破的。2。比如说C蛋白的结构，如果清楚了，是否有人正在研究对付该病毒蛋白的药物，就像已经有了对付P蛋白的一些药物一样？
答：
现在已有人正在研究对付c蛋白的药物，但效果没有对付p蛋白的药物好。
(十）病毒滴度与病的进程？阻塞细胞受体研究？
问：1。与HIV不同的是，HBV的病毒数量是否与病的进程无关？2。HBV的滴度多少对人体免疫系统有何影响？（根据别人的一些统计研究，如果体内的HBV DNA含量较高，则病毒对产生IFN嘎嘛的协同效应有抑制作用。）是否是这样的。3。HBV侵入肝细胞需要借助其表面上的受体，这样的受体有几个？有无旨在阻塞肝细胞表面受体的研究？
答：
1、HBV的数量与病的进程有一定的关系。2、当HBV大量存在的时候，机体针对HBV的免疫反应会有一定的抑制，比如IFN嘎嘛的产生可能会受到一定的抑制。3、关于HBV受体目前研究的不是很清楚。
问：
关于阻塞受体，我的想法的来源是：有份报道说5年前发现HIV除了CD4外还要同时附着CCR5受体，缺一不可。于是有公司研究新药竞争性地附着在CCR5上，阻止病毒与细胞结合。顺便问一下，对HBV病毒的入侵供体是否已有研究？
答： 我个人对此不太清楚，抱歉
(十一）彼抗体？此抗体？YIC的稳定性如何？
问：1。普通检测抗原用的抗体是人类的吗？是多克隆的吗？其是否仅仅使用抗原抗体相聚集的原理？能通过基因工程大规模得到的吗？ 2。YIV的治疗原理已有个大概俄认识。利用抗体Fc段，促使APC对抗原的呈递作用。那么根据同物种的Fc段才能被利用的原则，YIC中的抗体必须来自人类。那么是怎样得到的？是血源性的吗？还是多克隆的吗？有无必要使用单克隆？能否大规模得到？3。这一问题基于我前面中的一个问题：“HbsAg-Hbsab复合物会引起3型反应吗？”是否发现有什么东西，比如说是细胞因子对这种免疫复合物有溶解作用。好像有研究补体能溶解免疫复合物。补体是在肝内合成的，而肝病患者补体多不正常。在治疗前否需要测量补体的水平吗？另外YIC是比较大的分子，如果基没有变态反应，又能保持疗效，那说明了什么？4。既然是利用抗原抗体复合物，那么为什么不直接注射抗体，利用其Fab段与抗原的特异结合来达到这样的目的？是这种结合有困难吗？还是抗体能引起抗体的抗体，从而在与抗原中和前，就已经被中和了？
答：1、普通检测抗原用的抗体不是人类的。一般是免疫动物（小鼠和兔子等）的多克隆抗体。基本原理是抗原抗体特异性结合的免疫反应。2、是人源性的。3、不会引起3型变态反应，抗原抗体复合物要引起3型变态反应和它的存在的数量以及部位有关，如果血液中大量存在，有可能会引起。乙克是用肌注接种的，而不是静脉滴注，这种可能性很小。治疗前可以检测一下补体水平。4、因为乙克的治疗是一种免疫治疗，需要用抗原来引起特异性的免疫应答。单单注射抗体是一种被动免疫方法，不能达到治疗的目的。
问：
关于4。您有些误解。我说的是注射抗体，利用抗体和患者体内的抗原（如果体内抗原含量高的话）结合，在体内生成抗原抗体复合物，而不是用在体外合成好的。这还是利用了APC呈抵抗原。
也许我的问题太多了，未作答。
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