乙型肝炎表面抗原阳性孕妇不同孕期胎盘乙型肝炎病毒的感染状态

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乙型肝炎表面抗原阳性孕妇不同孕期胎盘乙型肝炎病毒的感染状态


闫永平 徐德忠 王文亮 刘斌 刘志华 门可 徐剑秋




子宫内传播是乙型肝炎病毒(HBV)的重要传播方式之一，目前尚无有效的阻断
措施［1］。为了深入了解HBV子宫内传播的发生机制，我们应用免疫组织化学方法，
对HBsAg阳性孕妇不同孕期胎盘的HBsAg和HBcAg存在和分布状况进行了初步研究。

一、对象和方法

1.对象：选择1995年3月～1996年5月，在陕西省妇幼保健院行人工流产术、引
产术和足月分娩的HBsAg阳性孕妇为研究对象。共收集标本86例，其中孕早期(孕第一、
二和三个月)妇女18例，孕中期(孕第四、五和六个月)6例，足月分娩62例。同时还分
别选取了14例不同孕期乙型肝炎感染标志均阴性的妇女作为对照。

2.胎盘收集方法：孕早期胎盘为负压钳刮之绒毛，刮出后立即浸入4%多聚甲醛液
中固定；孕中期水囊引产胎盘和足月分娩胎盘于娩出后30分钟内切取胎盘完整厚组织
约1cm×1cm×2cm大小，浸入4%多聚甲醛液中固定。

3.免疫组织化学染色方法：胎盘组织经固定、常规石蜡包埋后，进行5μm连续切
片。然后应用ABC免疫染色法进行检测，ABC试剂盒购自美国Vecta公司，操作方法
按试剂盒说明。鼠抗人单克隆HBsAg抗体和兔抗人HBcAg抗体均购自美国Zymed公
司。以HBsAg和HBcAg阳性尸体肝脏组织为阳性对照，HBV感染标志均阴性的尸体肝
脏和不同孕期妇女胎盘为阴性对照。同时设正常鼠或兔血清替代对照和PBS空白对照。
另外还进行了HBsAg吸收阻断试验。

二、结果

1.HBsAg阳性妇女孕早期胎盘HBsAg和HBcAg的检测：18例HBsAg阳性孕妇孕
早期胎盘HBsAg和HBcAg检测均未发现阳性染色。

2.HBsAg阳性孕妇孕中期胎盘HBsAg和HBcAg的检测：在6例孕中期胎盘中，有
1例HBsAg和HBcAg均呈浅棕色弱阳性着色，阳性细胞散在分布。HBsAg和HBcAg
主要分布于母面蜕膜细胞、滋养层细胞和绒毛间质细胞的胞浆和胞核中。

3.HBsAg阳性孕妇足月分娩胎盘HBsAg和HBcAg的检测：在62例足月分娩胎盘
中，有21例检出了HBsAg，受染细胞较多，呈团块状或片状分布。HBsAg不均一棕
色阳性颗粒可见于蜕膜细胞(21例)、蜕膜毛细血管内皮细胞(18例)、滋养层细胞(8
例)、绒毛间质细胞(8例)和绒毛毛细血管内皮细胞(5例)的胞浆中(图1)。另外，还有
21例胎盘绒毛间隙中可见部分区域有成片均一棕色着染。8例检出HBcAg的存在，呈
局灶型或散在型分布。HBcAg位于蜕膜细胞(5例)、蜕膜毛细血管内皮细胞(8例)和绒
毛间质细胞(8例)的胞核内。呈细颗粒状均匀分布(图2，3)。

在HBsAg侵及的蜕膜、滋养层、绒毛间质和绒毛毛细血管内皮中，阳性细胞分别约
占30%～50%、10%～30%、5%～10%和5%以下。

4.HBV感染标志均阴性的不同孕期妇女胎盘HBsAg和HBcAg的检测及对照试验：
阳性对照为阳性结果，HBsAg阳性表现为肝细胞胞浆内呈不均一棕色颗粒，HBcAg阳
性表现为肝细胞核内棕色着染。14例不同孕期HBV感染标志均阴性的孕妇胎盘、正常
鼠或兔血清替代对照、PBS空白对照及阻断试验中均未发现阳性染色。



图1 胎盘滋养层细胞、绒毛间质细胞和绒毛毛细血管内皮细胞胞浆呈HBsAg阳
性，ABC染色，苏木素衬染 ×400 图2 胎盘蜕膜细胞胞核呈HBcAg阳性，ABC
染色，苏木素衬染 ×400 图3 胎盘蜕膜毛细血管内皮细胞呈HBcAg阳性，ABC
染色，苏木素衬染 ×400


三、讨论

Lin等［2］应用PAP免疫组织化学方法检测了32例HBsAg和HBeAg均阳性孕妇的
足月分娩胎盘，结果未发现有HBsAg的存在。Lucifora等［3，4］则分别在收集
的3例和9例HBsAg携带者足月分娩胎盘中均分别检测到HBsAg和HBcAg的存在，而
且主要分布于绒毛血管内皮细胞中。所以在仅有的上述两篇报告中结果迥然不同。前
者研究方法的敏感性较低，而后者绒毛血管内皮细胞感染检出率达100%，但实际上H
BsAg携带者孕妇母胎HBV传播的机率仅有5%～10%。本结果显示，一方面HBsAg阳
性孕妇足月分娩胎盘绒毛细血管内皮细胞阳性率为8.06%(5/62)，与实际胎儿子宫内
感染率相近。另一方面在孕中期胎盘中，尤其是足月分娩胎盘中各类细胞均可检出HB
sAg和HBcAg的存在。表明：(1) HBV可感染胎盘各类细胞；(2) HBV经胎盘侵及胎儿
的主要途径是经血和/或细胞传递方式而实现的。即母血HBV首先经绒毛间隙和/或感
染蜕膜细胞，然后感染相邻绒毛，包括滋养层细胞和绒毛间质细胞，并进一步侵袭绒
毛内胎儿毛细血管内皮细胞，最终感染胎儿；(3) 由于HBsAg在胎盘中检出率及阳性细
胞所占比例由母面蜕膜细胞、滋养层细胞、绒毛间质细胞至胎儿面绒毛毛细血管内皮
细胞依次递减。提示，胎盘HBV感染的方向来自于母亲，而非胎儿。说明HBV不是经
卵和/或精子先天传播至胎儿逆向再至胎盘［5］。

本研究结果发现胎盘的感染主要发生于孕中期以后，从而提示HBV在孕期的传播
可能大多发生于孕晚期。这为子宫内传播的预防提供了可能。