Killing the Messenger-->特深沉转移

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最新消息，rnai最快两年进入临床试验

dsyman

那里看来的

sunday

有专业精神
不错

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报告中校。 请看〈  我们的希望在这里 〉一贴

特深沉

UP

特深沉

这是科学美国人关于iRNA的科普

liver411

全台灣最大基因干擾殖株庫 shRNA Clone Library

【shRNA 的簡介】 RNA interference基因干擾的發現最早可回溯到1995年，康乃爾大學 Su Guo博士，於試圖阻斷線蟲（C. elegans）中 par-1基因時，發現了一個意想不到的現象：實驗設計利用 anti-sense RNA 技術，達到特異性阻斷 par-1基因的表達，同時亦在其對照組實驗中，注射 sense RNA 到線蟲體內，起初預期可能觀察到此基因表現的增強。但得到的結果竟是二者都切斷了par-1基因的表達途徑。這與傳統上對 anti-sense RNA 技術的解釋竟恰好相反。研究小組一直沒能把這個意外結果給予以合理的解釋。直到1998年2月，華盛頓卡內基研究院的 Andrew Fire 和麻塞諸塞大學醫學院的 Craig Mello才首次揭開這個懸疑之謎。Andrew Fire及其同事將雙鏈RNA注射到線蟲體內。令研究者驚訝的是，dsRNA顯著的抑制了基因的表達。後來的研究發現其實抑制基因的並不是dsRNA，而是dsRNA經由核酸內切脢切割後產生的siRNA。 之後10年，科學家陸續發現幾種可以產生RNA intefrense的方法，而且是可以有效應用到哺乳動物的方法，包括1.最早期的方法是直接將合成siRNA送進細胞、2.合成的長鏈dsRNA送進細胞、3.利用細胞內源性的基因干擾物質-microRNA、4.將合成的plasmid vector送進細胞觸發細胞產生shRNA..等。 多數eukaryotic生物體都會對外源的dsRNA 產生一種特殊的反應-小分子干擾作用(small RNAi interference)，這個干擾作用主要來自dsRNA可以被生物體中內切脢酵素Dicer切割成約22nt的小片段RNA(siRNA)，siRNA分子緊接著會與一種關鍵性的複合物，名叫RISC的分子團結合並與互補 mRNA序列片段接合，接合後產生切剪降解mRNA作用，達到基因表現的干擾效果。 miRNA屬於內生性的小分子RNA，轉錄自genome DNA的non-coding RNAs，長度約為21-25nt，在生物體發育中體扮演的角色是基因干擾反應與調節基因表現，目前已經有數百種miRNA已經被發現並定義功能。 miRNA的構造有其特殊之處，miRNA 有一個stem-loop的結構，由DNA transcript來的primer miRNA會被RNase-III enzyme-Drosha切割成約70nt的pre-miRNA，Pre-miRNA緊接著會被Exportin5 transporter 運送出細胞核來到細胞質，一但進入細胞質，pre-miRNA會被另一種RNase-III enzyme-Dicer切割成dsRNA complex(miRNA:miRNA* complex)，miRNA(mature miRNA)並與RNAinduced silencing complex(RISC)結合成有干擾效果的複合物，靠著miRNA的序列去辨識結合到特定序列的mRNA(三端UTR區（Un-Transcript Region）)，因為miRNA的特殊結構使的mRNA 的trnslation作用終止。相對的，siRNA也是會與RISC複合物結合，不同於miRNA，這個複合物的序列專一性更高，而且主要的基因干擾作用是來自於切剪target mRNA。 miRNA與siRNA相似的地方包括：同樣是小分子RNA，同樣需要RNase-III enzyme-Discer的切剪，同樣需要靠著與RISC的結合才有作用。相異的地方包括有：來源不同，miRNA主要是轉譯自Genome DNA，而siRNA主要則是靠著切剪dsRNA而來的。基因干擾的方式也不同，miRNA所引發的RNA interference是靠著不完美的結構loop與mRNA結合而阻斷mRNA 的轉錄，siRNA所引發的RNA interference主要是靠著切剪mRNA序列而抑制基因表現。 但是，也有少數paper 指出部份miRNA 也是靠著切剪mRNA而達到基因表現抑制作用，比如miR196 & Hoxb8 之間的關係。 Cold spring harbor 所設計的shRNA trigger 類似miRNA，他們取用了哺乳動物的miR30構造，保留drosha切剪的特殊辨識序列處，並將有knockdown作用的序列，換成可以作用於target gene 的dsRNA，經驗法則告訴我們，這樣的設計多了Drosha的這一段步驟反應，間接個產生更多的小分子RNA，也就是增加了knockdown 效果。hairpin的主幹包含22-nt的dsRNA and a 19-nt 的loop，再加上了125nt 的miR30 flanking sequence和Loop的部份維持原有的miR30 loop。這樣的設計比起一般沒有加入miR的設計多上了10倍的基因干擾效果。 探索生技引進由cold spring harbor所建立的short hairpin RNA clone library，目前這個library已經累積了相當數量的基因干擾殖株，其中包含針對2萬多個人類基因建構了近4萬個基因干擾殖株，針對近1萬個小鼠基因建構了近2萬個基因干擾殖株，平均每個基因擁有1.7個基因干擾殖株(shRNA construct)。 這個全世界第一個最大的人類基因干擾殖株庫已經被應用在gene therapy 、drug discovery等後續的研究，目前也已經有數個藥廠對此基因干擾殖株庫非常有興趣，製藥開發產業合作案亦再進行中。

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关于RNAI已有今年进入临床试验的消息，但不是乙肝

我们还得等啊