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标题: 关于HBV-DNA阴性还是阳性的解答[坚强懦弱]整理 [打印本页]

作者: 王震宇 时间: 2009-2-18 15:47 标题: 关于HBV-DNA阴性还是阳性的解答[坚强懦弱]整理

本帖最后由风雨不动于 2012-4-14 17:28 编辑

论坛里面关于DNA的成型的帖子有一下几个

HBV-DNA检测“阳性”“阴性”的意义：
http://www.hbvhbv.com/forum/view ... &extra=page%3D2
[科普文章]客观看待乙肝病毒DNA定量检测：
http://www.hbvhbv.com/forum/view ... p;extra=&page=1
如何计算HBVDNA及其应用：
http://www.hbvhbv.com/forum/view ... 5406&highlight=

看完之后你也许会有这样那样的问题,简单分析一下同时列举一些问题，希望能帮助了解HBVDNA的相关文章

标注：HBVDNA的相关资料会出现103copy/ml或者104copy/ml、105、106copy/ml实质上是10的3、4、5、6次方（10E+03、10E+04、10E+05）这里战友看了就不要再迷惑了！

第一，定量和定性的关系：
斑点法只能用于定性。PCR用于定量，PCR定量方法主要有：荧光定量PCR 技术、竞争PCR 技术、PCR 酶联免疫吸附法、荧光标记物法和PCR 酶联化学发光法。标本定量数值小于参考数值为阴性，反之为阳性。
斑点法的优点是假阳性率低，假阴性率高，PCR法正好相反，换句话说，随着精细度提高，假阳性率就会提高，假阴性率随之降低。

1，DNA的检测目前分为定性和定量两种。定性方法一般比较准确，很少出现误检，但是精度相对较低。一般值精确到E05（10的5次方），而且报告单上只标明阴性或阳性。定量的方法，一般来说准确性较差（说的是定量出来的具体数值），但精度较高（针对用定量数值判断而来的阴性或者阳性）。由于采用的是PCR（聚合酶链反应）体外扩增，即使血清中有微量的病毒，也可以检测出。但实际上，由于技术的限制，一般只能精确到一个数量级，目前精度最高的在E02（10的2次方，就是少数医院采用的参考数值500copy/ml）。也由于各家医院实验室采用的方法和试剂的差别，造成的精度也不一样，所以就出现了参考值不一样的情况。一般阴性的表示方法是<参考值copies/ml，表示未检测到。当然随着检测技术的发展，精度不断提高，以前一些DNA阴性的患者也会被检测到，这个很正常，慢性乙肝患者（是否改为“只要表面抗原阳性”更有普遍意义？）的乙肝病毒是肯定存在复制的。不完整病毒的复制也属于复制，只要表面抗原还阳性，就不能说病毒的复制停止了。只是复制水平高低多少的区别，阴性时候复制非常非常少，阳性时候复制程度比较高而已！
这段话简单道出了“斑点法的优点是假阳性率低，假阴性率高，PCR法假阳性率就会提高，假阴性率低。”
据我（王震宇）早先的经验：
定量3000左右的弱阳性，（用非定量方法去）定性常常阴性
定量2000左右的弱阳性，（用非定量方法去）定性也常常能够阳性
定量5000以上的弱阳性，（用非定量方法去）定性通常能够阳性

2，一般来说，DNA定性灵敏度比定量迟钝半个方次，
如果定量1000为界，（用非定量方法去）定性差不多5000为界
如果定量500为界，（用非定量方法去）定性差不多1000为界
注：1）如果定量是以小于1000copy/ml为阴性的标准的话，标本实际HBVDNA浓度为0-1000copy/ml那用非定量方法去定性结果肯定也是阴性的，但是如果实际是1000-5000copy/ml的话用非定量方法去定性的话常常也是阴性的。
2）如果定量是以小于500copy/ml为阴性的标准的话，标本实际HBVDNA浓度为0-500copy/ml那用非定量方法去定性结果肯定也是阴性的，但是如果实际是500-1000copy/ml的话用非定量方法去定性的话常常也是阴性的。
3）乙肝病毒DNA 定量尚无国家统一标准，定量正常值和异常值范围难以统一。目前定量最常见的正常参考标准是小于1000copy/ml和小于500copy/ml。对于阴性的标准，我们一般认为是10的3次方。为什么会有小于500copy/ml的参考标准呢，用王震宇的话来说就是：“卖大白菜的非要用毫克做买卖，反正不能算违法吧”

定性判断很多种类，定性不能判断定量，(定性也能纠正一部分引误区变异!)但是现在技术发展到用具体的定量检测去判断定性！由于种种原因定量数值会波动，如果是阴性那么也可能是在小于参考数值之内的波动，也可能是偶尔稍微超出参考数值波动！如果定量是阳性那么可能实际数值是2000copy/ml也可能是8000copy/ml，也可能其他试验错误导致的假阳性而实际上的定量数值是小于参考数值的！
对于定性目前某些医院，出于经济需要，废止定性，某些医院，出于管理需要，废止定性（定性标本少，凑成一批周期长，不能随抽随验，病人有意见）。所以在论坛的战友检测单子上通常就是做的定量，然后根据定量数值来判断HBVDNA阴性还是阳性。

3，以上的总结可以解释：
这就可以解释：
DNA小于可见数值低限，意味着三种可能
1.真阴性-------没传染性
2.假阴性1-------有很弱的传染性，只能等到更精准的检验方法去证实。（因为定量的数值受到各种因素影响会出现波动，这时侯很可能偶尔超出参考范围）
3.假阴性2-------试验误差，比例很小，常常忽略。（可能是引物区变异，或者是极少发生的操作人员水平不达标导致的人为误差。）

也可以解释“DNA阴性但s1阳性，就要警惕DNA引物变异或者DNA极低量阳性了。”这种情况的原因之一：实际上是DNA极低量阳性也就是上面的“假阴性1”造成的。

为什么会造成HBVDNA检测是阴性而实际上是极低量阳性呢？同样是不确定的，可能是DNA确实是小于参考数值但是DNA和其他抗原阴转的时间先后顺序不一样，也可能是极少量的变异株存在！（大家别害怕变异，有专贴在科普区发表的！连接：http://www.hbvhbv.com/forum/viewthread.php?tid=780395）

第二，战友检测的常见疑问
采用PCR技术检测单位血液里面的完整HBV的数量，由于PCR技术要求高，不容易精确检测出具体的数量！受到检测仪器和试剂、还有病毒自身的原因等，（详细见《客观看待DNA定量检测》）所以定量出来的数值未必一直是血液里面的数值。
1，一般定量的数值都有1或2次方的波动，故在进行抗病毒治疗时候2次方以内的波动不作为疗效参考！那么DNA定量已经小于参考值的DNA阴性的病毒携带者DNA要是一直定量波动性会是如何啊？或者是小三同时HBVDNA阴性的情况一直定量会是如何？？我感觉稍微的波动会有的，但是一下子无缘无故超出参考范围波动好几次方似乎是不大可能，如果无缘无故波动超出正常范围，那只能说明检测阴性的那次是试验误差导致的假阴性
2，关于单位换算的问题
我的书《乙肝病毒携带者就诊指南》中

测验HBV-DNA时通常要达到两个目的，一个是定性，另外一个是定量，HBV-DNA定性的测验注重于证实HBV-DNA的存在，定性通常只给出阴性、阳性的结果，定量的测定着重于HBV-DNA量存在的多少，目前检验HBV-DNA的定量方法大致有三种：
1.PCR (polymerase chain reaction 或RT-PCR)，这是最常用的方法，很敏感，误差大，价格比较贵，通常单位用拷贝/毫升（copies/mL）。
2.bDNA (branched chain DNA assay), 也是目前常用的方法，敏感, 常规化，结果比较稳定，价钱比较便宜，通常单位用皮克（pg/mL）或飞克/毫升（fg/mL）。
3.NASBA (nucleic acid sequence-based amplification), 不常用，很敏感，误差大，工时长，价钱最贵，通常单位用也是皮克（pg/mL）或飞克/毫升（fg/mL）。
关于拷贝/毫升（copies/mL）与皮克（pg/mL）或飞克/毫升（fg/mL）的换算大致如下：
1公斤(kg)=1000克（g）
1克=1000毫克(mg)
1毫克=1000微克 (μg)
1微克=1000纳克（ng）
1纳克=1000皮克（pg）
1皮克=1000飞克（fg）
也就是说，1克=1000,000,000,000pg或者1g=1012pg，有时也写作10E12。不论毫克还是pg，都是重量单位，HBV-DNA虽然很轻，但也是有一定重量的，经过测算，1条HBV-DNA的重量约等于1fg的1/283。也就是说1 pg/mL = 283,000 copies/mL。血液中查不到HBV-DNA并不能说明HBV-DNA不存在，可能是因为现有仪器和水平不能测到更精确的程度。目前最好的仪器可以测到20copies/mL浓度的水平，一般的医院评价HBV-DNA阳性的标准，多以1000copies/mL为阳性界限。
要强调的是
第一：我本人不是高检验专业的，DNA检验属于检验行业中较高端项目，我只知道大概齐
第二：对于“http://bbs.hbvhbv.com/forum/viewthread.php?tid=545115
如果用 Branched DNA(bDNA) 方法: IU/mL = Copies/mL x 5.2.
如果用 Branched DNA(bDNA) 方法: IU/mL = Copies/mL x 5.2.”的引用，我本人没有验证。

第三，如果第二条的引用是可靠的，我的理解是

(bDNA) 方法: IU/mL = Copies/mL x 5.2.，这句话你已经理解了
(PCR) 方法: Copies/mL = IU/mL x 2.7也就是
IU/mL= Copies/2.7mL ，或=370 Copies / 微升

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作者: 坚强懦弱 时间: 2009-2-18 15:59

谢谢老王对科普工作的坚决支持！！

作者: 坚强懦弱 时间: 2009-2-18 16:08 标题: 一楼的连接

HBV-DNA检测“阳性”“阴性”的意义
http://www.hbvhbv.com/forum/view ... &extra=page%3D2

[科普文章]客观看待乙肝病毒DNA定量检测
http://www.hbvhbv.com/forum/view ... p;extra=&page=1

如何计算HBV-DNA及其应用
http://www.hbvhbv.com/forum/view ... 5406&highlight=

作者: lybaler 时间: 2009-3-23 22:50

各种检测方法
单位换算
好，讲的挺细的

有没有类似的关于两对半的资料
国产试剂进口试剂有什么不同价格差多少
好些参考值和单位也不一样
还有的是小于多少多少有的是大于多少多少
看的有点乱找不到资料

作者: auau43 时间: 2010-1-24 18:20 标题: HBVDNA的困惑

您好，看到您HBVDNA的帖子非常专业有一些相关问题想请教。
前几天带朋友去北京302医院体检发现两对半2，4，5阳性，但肝功正常。医生建议做HBVDNA。取
结果为10^7.找另外一个医生解释化验单，医生说这是隐性乙肝，非常罕见。如果想确认需要重做
HBVDNA。
回忆起当时抽血的情况，由于护士没能成功的将带皮护管的部分刺入真空管，而导致血液流到了工作台上，由于皮护管部分已经弯曲，所以护士重新打开一包新的采血针，更换了皮护管部分重新刺入真空
管采血。
想请教的是，就算是护士采血失败导致样品污染，会导致10^7这么高的值吗？
这使我想起我自己9年前的经历，当年身体严重疲倦感，多方查证没有发现任何肝炎证据，但转
氨酶不正常，比正常值高1倍左右，另外就是GGT高100-200左右。HBVDNA也是10^7or8左右，按乙肝治
疗拉米夫定1年左右，HBVDNA时高时低。后来停止拉米夫定，打了5倍剂量的乙肝疫苗，半年后检查两
对半竟然只有第二项抗体阳性。但身体依然不适，停所有药，按脂肪肝治疗每日跑步3km，坚持4年身
体明显好转，转氨酶正常（GGT依然略高70左右）。
所以我非常怀疑HBVDNA的可靠性，除非我自己也是隐性乙肝患者。
302是国内权威的肝病医院，我到底应该如何看待HBVDNA检测呢？

作者: 烦恼神仙 时间: 2010-6-21 07:39

我的结果居然是127IU/ML，参考值是小于100，我换算成拷贝怎么算？

作者: 烦恼神仙 时间: 2010-7-4 13:52

我的DNA似乎是阳性

作者: wonder4078 时间: 2010-12-5 14:32

值得学习，了解下吧

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